尼麦角林联合阿替普酶治疗对急性缺血性脑卒中患者Chemerin、miR-128b表达的影响*

陈璐菡, 陈伟良

中国人民武装警察部队海警总队医院神经内科(浙江嘉兴 314000)

急性缺血性脑卒中在所有卒中患者中占比高达3/5以上，是最常见的致残疾病[1-2]，其主要病因为脑血管粥样硬化、血栓致使脑组织血供不足[3]。急性缺血性脑卒中患者通常发病急、治疗难度大、患者预后差，因此寻找一种安全有效的治疗急性缺血性脑卒中的手段成为许多专家学者的主要研究方向[4-5]。尼麦角林具有扩张血管、加强脑细胞代谢、改善脑功能的药理作用[6]。阿替普酶具有溶解血栓的药理作用，常用于脑血管疾病的治疗[7]。本研究旨在探究两者联合对急性缺血性脑卒中患者趋化素(Chemerin)、微小RNA-128b(Microrna-128b，miR-128b)表达的影响，观察效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机数字表法将我院2019年7月至2021年7月收治的急性缺血性脑卒中198例患者分为对照组、观察组各99例。对照组包括男57例，女42例，年龄60～71岁，平均(65.78±4.39)岁；体质指数(BMI)21～28 kg/m2，平均(24.15±3.05)kg/m2；其中合并高血压患者61例，合并冠心病患者23例。观察组男49例，女50例，年龄61～72岁，平均(66.39±4.15)岁；BMI 21～27 kg/m2，平均(23.85±1.80)kg/m2；合并高血压患者54例，合并冠心病患者24例。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究所有患者家属均知情同意，获我院伦理委员会批准[(2019)伦审第(56)号]。

纳入标准：均符合中华医学会对缺血性脑卒中诊断标准[8]，经我院影像检查确诊，所有患者均于发病4 h内入院就诊，并接受阿替普酶溶栓治疗，病历资料齐全。

排除标准：(1)尼麦角林、阿替普酶不耐受者；(2)脑出血、脑外伤患者；(3)脑组织恶性肿瘤者；(4)精神疾病患者；(5)未接受阿替普酶溶栓治疗者。

剔除标准：(1)医护工作依从性差者；(2)因其他原因退出本研究者。

1.2 治疗方法 两组患者均进行吸氧、降低颅内压、改善微循环、控制血压等常规治疗。对照组患者使用阿替普酶治疗：1 min内静脉推注阿替普酶0.9 mg/kg(最高剂量90 mg)，其余阿替普酶与100 mL 0.9%生理盐水混合后静脉滴注，时间1 h左右。观察组患者使用尼麦角林联合阿替普酶治疗：尼麦角林：2次/d，20 mg/次，于早晚饭后使用温水吞服。两组患者均连续治疗14 d。

1.3 指标观察

1.3.1 生活能力、神经功能评价 使用ADL评分表[9]评价患者日常生活能力，总分100分，评分越高表示日常生活能力越高。采用NIHSS评分表[10]评价患者神经功能，总分42分，评分越低神经功能损伤越轻。

1.3.2 IMT、斑块面积、血液流变学水平检测 对患者进行颈动脉彩超检查，对比两组治疗前及治疗结束1周后颈动脉内膜中层厚度(carotid intima-media thickness，IMT)、颈动脉斑块面积变化情况，本研究中对患者进行颈动脉彩超检查的医生为课题专职医生，检查前经过系统培训。取患者治疗前、治疗结束1周后静脉血5 mL，离心处理(离心半径10 cm，转速3 000 r/min，离心时间15 min)后-50℃保存，血液流变动态分析仪检测全血高切黏度(HBV)、全血低切黏度(LBV)水平。

1.3.3 Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)通路蛋白、miR-128b表达检测 Western blot法检测TLR4/NF-κB通路蛋白表达：待测标本内添加裂解液，提取蛋白后定量、变性、SDS-PAGE凝胶电泳、转PVDF膜，室内封闭2 h，添加一抗(1∶1 000)及内参抗体(1∶2 000)孵育，1 d后TBST清洗3次，添加二抗(1∶5 000)孵育，2 h后清洗3次，显色、曝光、成像，检测TLR4、NF-κB p65表达。RT-PCR法检测miR-128b表达：提取总RNA，逆转录后扩增处理。预变性处理10 min、变性处理10 s(95℃)，退火25 s(63℃)，延伸10 s(72℃)，进行42个循环，2-ΔΔCt方法计算miR-128b表达量。

1.3.4 炎症因子及Chemerin水平检测 酶联免疫吸附法检测血清炎症因子及Chemerin水平，酶标分析仪检测450 nm处吸光值，计算肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、Chemerin水平，检测过程严格按照试剂盒说明书进行。

1.3.5 疗效评价标准 按照显效、有效、无效的标准对临床疗效进行评价，显效：临床症状消失，NIHSS评分下降90%以上；有效：临床症状改善，NIHSS评分下降18%～90%；无效：NIHSS评分下降幅度低于18%。总有效率=显效率+有效率。

2 结果

2.1 两组生活能力、神经功能比较 本研究过程中并未出现剔除/脱落病例。治疗前两组ADL、NIHSS评分比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组ADL评分高于治疗前，NIHSS评分低于治疗前，且观察组ADL评分高于对照组，NIHSS评分低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者生活能力、神经功能比较 分

2.2 两组IMT、斑块面积对比 治疗前两组IMT、斑块面积比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组IMT、斑块面积低于治疗前，与对照组比较，观察组IMT、斑块面积较低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组IMT、斑块面积对比

2.3 两组血液流变学变化比较 治疗前两组HBV、LBV水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组HBV、LBV水平低于治疗前，且观察组HBV、LBV水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组血液流变学变化

2.4 两组TLR4/NF-κB通路蛋白及下游炎症因子水平变化 治疗前两组TLR4、NF-κB p65表达及TNF-α、IL-1β水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组TLR4、NF-κB p65表达及TNF-α、IL-1β水平低于治疗前，且观察组TLR4、NF-κB p65表达及TNF-α、IL-1β水平均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 两组TLR4/NF-κB通路蛋白、因子水平比较

2.5 两组Chemerin、miR-128b表达水平变化 治疗前两组Chemerin、miR-128b表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组Chemerin、miR-128b表达水平低于治疗前，且与对照组相比，观察组Chemerin、miR-128b表达较低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 两组Chemerin、miR-128b表达水平变化

2.6 两组治疗效果对比 与对照组比较，观察组治疗有效率较高，差异有统计学意义(U=8.342,P=0.003)。见表6。

表6 两组治疗有效率比较 例(%)

3 讨论

急性缺血性脑卒中发生发展伴随着机体脑组织神经元细胞损伤，对患者日常生活能力、神经功能造成严重影响[11]。有研究表示，急性缺血性脑卒中患者神经功能出现异常，日常生活能力相对较差，对急性缺血性脑卒中患者进行治疗能够减轻患者神经功能损伤严重程度，从而使患者日常生活能力得到改善[12]。本研究发现，应用尼麦角林联合阿替普酶治疗，急性缺血性脑卒中患者ADL评分上升、NIHSS评分下降，说明两者联合能够减轻患者神经功能损伤严重程度，提升患者日常生活能力，有助于患者病情恢复、预后改善。其原因可能是，尼麦角林能够扩张脑组织血管，具有脑保护作用，阿替普酶能够溶解血栓、改善脑血管供血状况的作用，两者联合应用可共同发挥脑保护作用，治疗效果显著。

颈动脉斑块形成在急性缺血性脑卒中症状发展过程中起到重要作用。缺血性脑卒中病情严重程度与血管斑块密切相关，观察血管斑块、狭窄程度变化情况对患者病情状况、临床疗效具有较高评估价值。有学者在研究中表示，减轻颈动脉硬化严重程度，稳定、减小动脉硬化斑块对急性缺血性脑卒中患者病情恢复、神经功能提升、预后改善具有重要意义[13]。本研究发现，使用尼麦角林联合阿替普酶治疗，急性缺血性脑卒中患者IMT、斑块面积明显下降，说明两者联合能够降低急性缺血性脑卒中患者IMT，使斑块缩小、稳定，有助于患者颈动脉粥样硬化改善，促进患者病情恢复，从而发挥治疗效果。

有学者在研究中表示，急性缺血性脑卒中发展与脑组织血液流变学状况密切相关[14-15]。HBV、LBV为评价机体血液流变学的主要指标，改善患者血液流变学，能够缓解患者脑组织血凝状况，从而发挥治疗效果。本研究发现，使用尼麦角林联合阿替普酶治疗，急性缺血性脑卒中患者HBV、LBV水平下降，说明两者联合能够改善患者脑组织血液流变学，从而起到脑保护作用，其原因可能是，阿替普酶具有调节纤维蛋白溶解系统活性的药理作用，应用阿替普酶对急性缺血性脑卒中患者进行治疗，能够改善患者脑血管供血状况，缓解患者脑组织血液高凝状况，发挥起到溶解血栓的作用。

急性缺血性脑卒中患者病情发展、严重程度与脑组织炎症反应状况具有密切联系，减轻脑组织炎症反应是促进神经功能恢复关键[16]。TLR4/NF-κB通路与炎症反应具有密切联系，TNF-α、IL-1β均为TLR4/NF-κB通路下游炎症因子，两者水平变化与机体炎症反应密切相关。有学者在研究中表示，抑制急性缺血性脑卒中患者TLR4/NF-κB通路激活，能够减轻炎症反应严重程度，从而减轻患者神经功能损伤严重程度[17]。本研究发现，使用尼麦角林联合阿替普酶治疗，急性缺血性脑卒中患者TLR4、NF-κB p65表达及TNF-α、IL-1β水平均明显下降，说明两者联合能够调控TLR4/NF-κB通路蛋白表达，抑制其下游炎症因子水平，从而减轻患者神经功能损伤严重程度，治疗效果显著。

Chemerin主要形成于脂肪细胞，在缺血性脑卒中发生发展中发挥促进作用[18-19]。miR-128b在缺血性脑卒中呈异常高表达，检测其表达对患者诊断、预后检测具有较高的评估价值[20]。本研究发现，使用尼麦角林联合阿替普酶治疗，患者Chemerin、miR-128b表达水平下调，说明该治疗方案能够调控Chemerin、miR-128b表达水平，从而帮助患者病情恢复，治疗效果显著。

综上所述，使用尼麦角林联合阿替普酶治疗，急性缺血性脑卒中患者生活能力、神经功能提升，IMT、斑块面积下降，血液流变学改善，炎症反应减轻，Chemerin、miR-128b表达受到调控，治疗效果显著，为急性缺血性脑卒中的临床治疗提供依据。

利益相关声明：所有作者均声明不存在任何利益冲突。

作者贡献说明：陈璐菡：数据整理、统计学分析、论文撰写；陈伟良：研究指导、论文修改、经费支持。