怀古颗粒质量标准研究

林禹澎 姜英子 解生旭 徐雅娟

【摘 要】 目的：建立怀古颗粒的质量控制方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为安捷伦Eclipe XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为甲醇-醋酸-水（36∶4∶64），流速为1 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为283 nm。结果：柚皮苷在0.061～0.427 mg范围内线性良好（r=0.999）;精密度实验RSD为0.85%;稳定性实验RSD为1.16%，重现性实验RSD为2.13%;平均加样回收率为99.01%（RSD为4.41%）。结论：该测定方法简便、快速、重现性好，可用于怀古颗粒中柚皮苷含量的测定。

【关键词】

怀古颗粒;质量控制;柚皮苷;HPLC法;含量测定

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2022）08-0045-03

Toxicological Safety Evaluation of Huaigu Granules

LIN Yupeng1 JANG Yingzi1* XIE Shengxu2 XU Yajuan2

1.College of pharmacy， Yanbian University， Yanji 133002，China;

2.Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine， Changchun 130012 ，China

Abstract：

Objective Establishing a quality control method for huaigu granules. Methods HPLC wasused. Agilent Eclipse XDB-C18 column（4.6 mm×150 mm，5 μm）was used.The mobile phase was methanol-acetic acid-water（36∶4∶64）. The flow rate was 1 mL/min.Thecolumn temperature was 30 ℃ and the detection wavelength was 283 nm. Results Naringin was linear in the range of 0.061～0.427 mg（r=0.999）; RSD of precision testwas 0.85%; RSD of stability test was 1.16%， RSD of reproducibility test was 2.13%; Theaverage recovery was 99.01% （RSD was 4.41%）. Conclusion The method is simple，rapid and reproducible， and can be used for the determination of naringin in huaigu granules.

Key words：

Huaigu Granules; Quality Control; Naringin; HPLCMethod; Content Determination

怀古颗粒由骨碎补6g、山茱萸2.2g、怀牛膝2.2g、川芎1.2g、鹿茸0.16g五味药材组成，具有增强骨密度，预防骨质疏松保健功能。五味药材作为骨伤科常用中药，其在治疗骨质疏松症方面的运用已经得到广泛认可，为临床治疗骨质疏松方剂中的常用药物[1～6]。骨碎补为方中君药，具有补肾强骨，治筋骨瘘软之功效[7]，柚皮苷为其主要成分。研究采用HPLC高效液相色谱法测定怀古颗粒中柚皮苷的含量，为怀古颗粒的质量控制提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津LC-2010C高效液相色谱仪;FA2004B万分之一天平;GA-425十万分之一天平;KQ-300DE型数控超声波清洗器。

1.2 材料 怀古颗粒（厂家：北京海润德医药集团有限公司;批号：20181201，20181202;20181203）对照品柚皮苷购自中国食品药品检定研究院;甲醇购自Fisher，为色谱纯;水为双蒸水自制;冰醋酸购自国药集团化学试剂有限公司，为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性 采用安捷伦Eclipe XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：甲醇-醋酸-水（36∶4∶64）;流速：1 mL/min;柱温：30 ℃;检测波长为283 nm;进样量：10 μL;上述色谱条件下，柚皮苷对照品与其他组分峰分离度良好。色谱图如图1所示。因该颗粒所含成分较多，此条件下其他成分无法得到有效的分离，故在2～4 min有些许杂峰，其不影响本实验结果。

2.2 对照品溶液制备 取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷0.305 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 取本品0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20 mL，密塞，超声处理（功率300 W，频率40 KHZ）30 min，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性及范围 精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10、12、14 μL，注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件测定，记录峰面积，以柚皮苷进样量（x）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标绘制标准曲线，如图2所示，结果显示，柚皮苷含量在0.061～0.427 μg范围内线性良好。

2.5 精密度考察 取2.2项下对照品溶液，精密吸取10 μL，连续进样6次，记录柚皮苷峰面积。以积分峰面积测定结果的相对偏差，反映仪器的精密度，计算其RSD值為0.85%，说明仪器精密度良好。5795460B-2C22-496F-B722-880663CF3290

2.6 稳定性考察 根据2.3项下方法制得供试品溶液，分别于放置0、2、4、6、8、24 h后，精密吸取10 μL，进样，测定供试品中柚皮苷的峰面积值，计算RSD值为1.16%，表面柚皮苷在24 h内稳定性良好。

2.7 重复性考察 称取同一批供试品6份，每份精密称定0.25 g，按2.3项下方法制成供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样分析，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定其峰面积，计算柚皮苷的含量，得RSD值为2.13%。表明该方法重复性良好。

2.8 回收率试验

2.8.1 对照品溶液的制备 同2.2项下对照品溶液的制备。

2.8.2 加样对照品溶液制备 取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.32 mg的溶液，即得。

2.8.3 回收率供試品溶液制备 精密量取已知含量的供试品溶液0.125 g，共6份，分别精密加入加样对照品溶液1 mL后，按2.1项下色谱条件进行测定，结果见表1。计算加样回收率，结果为：柚皮苷的平均回收率为99.01%，RSD为4.41%。

3 讨论

3.1 色谱柱考察 对不同型号的色谱柱进行了考察，在SHIMADZU VP-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）;Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）;Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）三根色谱柱中，XDB-C18的保留时间最短为10.2 min，理论塔板数最大，为2888，故选用此柱。

3.2 流动相考察 在甲醇-醋酸-水（35∶4∶65）的基础上对流动相进行了考察，结果显示以甲醇-醋酸-水（36∶4∶64）为流动相时所得的供试品色谱图峰型较好，且保留时间更短，理论塔板数最大，故选流动相比例为甲醇-醋酸-水（36∶4∶64）。

3.3 提取方法考察 在怀古颗粒供试品溶液的制备中，考察了不同的提取方法，分别为甲醇超声提取方法、乙醇超声提取方法和甲醇加热回流提取方法。三种提取方法测定的含量分别为2.584、2.425、2.537 mg/g，发现甲醇超声提取方法柚皮苷损失较少，方法操作简便，故选用次提取方式。

3.4 方法学考察 由线性考察结果可知柚皮苷在含量为0.061～0.427 μg范围内线性良好，可作为怀古颗粒质量控制的指标;精密度考察的RSD为0.85%，说明仪器精密度良好;重复性考察的RSD为2.13%，表面该含量测定方法重复性良好;稳定性考察的RSD为1.16%，表面柚皮苷在24 h内稳定性良好;回收率实验的平均回收率为99.01%，RSD为4.41%，符合中华人民共和国药典的要求。

4 结论

怀古颗粒中骨碎补主要含黄酮类、三萜类等成分[8];山茱萸主要含有环烯醚萜类、鞣质等成分[9];怀牛膝主要含有甾酮类、生物碱等成分[10];川芎主要含有酚类、有机酸类等成分[11]。综上所述，本实验结果显示所建立的含量测定方法能有效地分离出柚皮苷成分，且所建立含量测定方法重现性、加样回收率、精密度等均符合药典规定，故将此方法用于怀古颗粒中柚皮苷的含量测定。

参考文献

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（收稿日期：2021-04-02 编辑：刘 斌）5795460B-2C22-496F-B722-880663CF3290