HPLC法测定天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的含量

段立群 李文凤

摘要：目的 建立黔南州中医醫院院内制剂天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的含量测定方法，完善天人平喘胶囊的质量标准。方法 采用HPLC法测定天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的含量，以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为203 nm，色谱柱为RSZG-C18（4.6×250 mm，5 μm） ，流速为1.0 mL/ min，柱温为30℃，进样量为20 μL。结果 人参皂苷Rg1的含量在0.5814～2.907 μg范围内线性关系良好，精密度、稳定性及重复性试验RSD分别为1.58 %、1.56 %、1.88 %，平均加样回收率为99.91 %，RSD = 1.94 %。结论 该含量测定方法准确可行，可作为天人平喘胶囊的质量控制。

关键词：天人平喘胶囊;HPLC法;人参皂苷Rg1;含量测定

天人平喘胶囊是由人参、天冬、黄芪、麦冬、蛤蚧等十多味中药材组方[1～3]，现采用HPLC法对其人参皂苷Rg1的含量进行定量研究，以完善其质量标准，为天人平喘胶囊的质量控制提供参考依据。

1仪器与试药

Agilent1260高效液相色谱仪，AUW-120 D岛津分析天平，FA1004电子天平，电热恒温水浴锅。

4批天人平喘胶囊（由黔南州中医医院制剂科研制） ，人参皂苷Rg1标准品（中国食品药品检定研究院，Rg1纯度为95 %，批号：110703-201529） ， 甲醇、乙腈为色谱纯，氨水、正丁醇为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

2方法及结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称定人参皂苷Rg1标准品7.6 mg于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得浓度为0.2907 mg/ mL对照品储备液;精密吸取5 mL对照品储备液至10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得浓度为0.14535 mg/ mL对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的配置[4]

取天人平喘胶囊内容物适量，搅拌均匀，约取2.0 g，精密称定，置于索式提取器中，用甲醇回流提取至近无色，将提取液挥干，残渣加20 mL水分次溶解，溶液转移至分液漏斗中，用30 mL水饱和正丁醇洗涤4次，合并正丁醇液;用氨水洗涤正丁醇液，每次30 mL，弃去氨液;用正丁醇饱和的水洗涤收集的正丁醇合并液，2次，每次30 mL，弃去水层，收集正丁醇液;挥干正丁醇，残渣加甲醇溶解至10 mL容量瓶中，定容，即得天人平喘胶囊的供试品溶液。

2.1.3 阴性对照溶液的制备

按处方称取不含人参的其他味药材，按照制备工艺制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.2 色谱条件

采用RSZG-C18（4.6×250 mm，5 μm） 色谱柱，以乙腈为流动相A，水为流动相B，按表1中的程序进行梯度洗脱，检测波长203 nm，柱温30℃，流速：1.0 mL/ min。

2.3 系统适应性及专属性试验

按照“2.2”项下的色谱条件，精密吸取上述对照品溶液、天人平喘胶囊供试品溶液以及阴性对照溶液20 μL进样，供试品中人参皂苷Rg1与相邻组分分离度较好（R>1.5） ，理论塔板数均大于3000，供试品溶液与对照品溶液中人参皂苷Rg1在相同保留时间处有相应色谱峰，阴性对照溶液与供试品溶液和对照品溶液在相同保留时间处，无干扰峰出现，可以说明处方中其他成分对该项测定没有产生干扰，见图1～3。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取“2.1.1”项下的对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得一系列浓度标准品溶液;分别精密吸取20 μL，按“2.2”项下的色谱条件依次进样分析，以人参皂苷Rg1进样量（μg） 为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，Y = 249391 X-896.1，R = 0.9999。结果表明，人参皂苷Rg1在0.5814～2.907 μg范围内，与其峰面积呈现良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取“2.1.1”项下的对照品溶液20 μL，按照“2.2”项下的色谱条件，连续进样测定6次，记录峰面积积分值，精密度RSD为1.58 %，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性实验

取天人平喘胶囊供试品溶液，精密吸取20 μL，按照“2.2”项下的色谱条件操作，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、10 h测定峰面积积分值，RSD为1.56 %，表明天人平喘胶囊供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一批天人平喘胶囊（批号：20160519） ，按照“2.1.2”项下方法平行制备6分供试品溶液，精密吸取20 μL;再按照“2.2”项下的色谱条件进样测定，测得天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的平均含量为0.3538 mg/ g，RSD为1.88 %，表明该测定方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取6份已知含量的同一批天人平喘胶囊（批号：20160519） 的内容物，分别加入1 mL按照“2.1.1”项下方法配制的人参皂苷Rg1浓度为0.3363 mg/ mL的对照品溶液;以“2.1.2”项下的方法制备加样回收供试品溶液，精密吸取20 μL，再按照“2.2”项下的色谱条件分别进样测定。天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的平均加样回收率为99.91 %，加样回收率的RSD为1.94 %，表明该测定方法加样回收率良好。

2.9  天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的含量测定

抽取3批天人平喘胶囊，按照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，每批胶囊平行制备2份供试品溶液，精密吸取20 μL;再按照“2.2”项下的色谱条件，进样测定人参皂苷Rg1的含量。 3批天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的平均含量分别为0.3484 mg/ g、0.3622 mg/ g、0.3400 mg/ g。

3讨论

本研究选用人参皂苷Rg1作为天人平喘胶囊的含量测定成分，该含量测定方法可重复、在线性范围内具灵敏度和选择性较高，分离度良好，回收率稳定，为天人平喘胶囊有效成分的含量提供了快速可靠的测定方法，进一步为天人平喘胶囊质量控制提供了实验依据。通过测定3批天人平喘胶囊中Rg1的含量，得出天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的含量不应低于0.3400 mg/ g，可将其作为天人平喘胶囊中人参皂苷Rg1的含量标准[5]。

参考文献

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[2]苟鑫宇，季宏与，刘玉婷，等.RP-HPLC-UV法测定清心莲子饮中人参皂苷Re、Rg1、Rb1的含量[J].化学工程师，2019，33（12）：21-24.

[3]王秋颖，赵幻希，吴冬雪，等.人参皂苷提取方法的研究进展[J].人参研究，2019，31（5）：50-53.

[4]徐文武，谢涛，吕东峰，等.一测多评法同时测定红参中11种人参皂苷的含量[J].中草药，2021，52（7）：2099-2105.

[5]黄晓燕，罗时，李瑞莲，等.HPLC法测定血络通胶囊中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量[J].中国药师，2017，20（12）：2248-2250.