超临界萃取技术在提取蒲公英抗衰老成分中的应用

王 雪

(扬州工业职业技术学院 化学工程学院， 江苏 扬州 225127)

1 研究背景

蒲公英全草含蒲公英甾醇、胆碱、菊糖、果胶等。味苦、甘，性寒，具清热解毒，消肿散结，利尿通淋之功效清热解毒，利尿散结。可治急性乳腺炎，淋巴腺炎，瘰疬，疔毒疮肿，急性结膜炎，感冒发热，急性扁桃体炎，急性支气管炎，胃炎，肝炎，胆囊炎，尿路感染。

苦苣根为菊科植物苦苣的根，具有降糖、降脂、清热退蒸之功效。治骨蒸、痢疾涩、平入肺、大肠二经。

紫苏叶中含挥发油类、黄酮和花色苷类、花青素、酚酸类、苷类、三萜类和甾体等多种化学成分，紫苏叶提取物表现出一定的抗炎活性。具有散寒解表，宣肺止咳，理气和中，安胎，解毒[1-3]。

隋洪玉等人[4]用乙醇作溶剂，将蒲公英加热煮沸一定的时间，以提取其所含的黄酮成分，这种方法，适用于有效成分能溶于乙醇，且对湿热稳定的药材，而对药材中一些热敏性的组份损失较多。

齐白羽等人[5]以蒲公英为原料，利用超声波提取法来提取蒲公英的水提物。这种方法是主要利用超声增大物质分子运功频率和速度，增加溶剂穿透力，提高药物溶出速度和溶出次数，缩短提取时间的浸提方法。

超临界流体萃取技术是目前国际上用于提取分离的先进技术之一。原理是利用超临界流体具有接近于液体的密度和类似于液体的溶解能力，同时还具有类似于气体的高扩散性、低黏度、低表面张力等特性进行提取分离。现广泛应用于中药天然产物的提取领域[6]。本文采用超临界萃取法从蒲公英、苦苣根和紫苏叶中提取有效成分。

2 实验部分

2.1 原料与试剂

蒲公英、苦苣根、紫苏叶(药用级，江苏宜草生物科技有限公司)；硼砂、无水乙醇(分析纯，江苏宜兴化学试剂有限公司)；食品级二氧化碳(天津市兴盛气体有限公司)。

2.2 设备

H8422超细中药磨粉机(河北德科机械科技有限公司)；SFE120-50-02超临界萃取仪(南通仪创实验仪器有限公司)；UV-754紫外可见分光光度计(日本岛津有限公司)。

2.3 实验步骤

(1) 粗提

将一定比例的蒲公英、苦苣根、紫苏叶粉碎后，选20～40目的粉末，加入适量的2%硼砂水溶液，硼砂水溶液的用量为蒲公英、苦苣根、紫苏叶质量之和的2.0～2.5倍，浸泡1～2 h后，加入适量体积分数为20～30%的乙醇溶液回流提取5～6 h后，过滤，滤液调pH至5.0～6.0后，浓缩得粗提物。

(2) 萃取

将上述粗提物加入萃取釜中，采用超临界CO2萃取，萃取压力为26～28 MPa，萃取温度为45～48 ℃，CO2流量为50～55 L·h-1，萃取时间为2～3 h，分离釜I温度为40～42 ℃，压力为8～10 MPa，分离釜II温度为35～38 ℃，压力为5～6 MPa。得蒲公英复方提取物，见表1。

2.4 黄酮含量的测定

以芦丁溶液作为标准溶液，用紫外可见光光谱扫描[7，8]，确定确定萃取物中黄酮类物质的浓度。

2.4.1 吸收波长的选择和标准曲线的绘制

用加芦丁标准品0.00 mL的溶液为空白参比，标准溶液在300～800 nm波长范围内进行紫外可见光光谱扫描，得到最大吸收波长，最终确定黄酮的测定波长为510 nm。

表1 不同配方下的萃取物Tab. 1 The extracts under different formulations

在最大吸收波长510 nm处测得吸光度值，以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制芦丁标准曲线图。

2.4.2 蒲公英提取物中黄酮含量的测定

分别配制萃取物A-F的60%乙醇-水溶液，摇匀，放置20 min后用紫外可见光光度计进行测量，测得的吸光度对照芦丁标准曲线图，确定其浓度。

2.5 抗衰老效果检测

本文产品A-F的抗衰老效果，采用D-半乳糖致衰老小鼠模型进行药理学实验。

D-半乳糖溶液配置：D-半乳糖溶于生理盐水中，配成浓度为20 mg·mL-1。(腹腔注射)

维生素E(VE)溶液配置：用植物油配置成20 mg·mL-1。(灌胃给药)

模型组：腹腔注射D-半乳糖溶液，给药量100 mg·kg-1·d-1。

正常组：腹腔注射等量的生理盐水。

VE组：腹腔注射D-半乳糖溶液，给药量100 mg·kg-1·d-1，同时灌胃给药VE溶液，给药量100 mg·kg-1·d-1。

产品A-F组：腹腔注射D-半乳糖溶液，给药量100 mg·kg-1·d-1，同时分别灌胃给药相应的产品A-F溶液，给药量200 mg·kg-1·d-1。

3 结果与讨论

3.1 黄酮总量的测定

3.1.1 芦丁标准曲线的绘制

芦丁标准曲线如图1，从图1可知，芦丁标准溶液的浓度与吸光度A成线性关系[7]，方程为y=157.33A+3.923 7，相关系数为0.994 6。

图1 芦丁的标准曲线

3.1.2 黄酮总量的测定

在2.4.2配制的溶液中取6个样品，每个样品5 mL，用紫外分光光度计测出吸光度，根据图1标准曲线方程，计算出黄酮含量。

表2 提取物中黄酮类物质的含量Tab. 2 The content of flavonoids in the extracts

从表2可知，蒲公英5份，苦苣根1份，紫苏叶0.1份时提取物中黄酮类物质含量最高。

3.2 抗衰老性能检测

本文测试小鼠血清、脑中SOD、CAT、GSH-Px、T-Aoc酶活力与MDA含量，具体实验方法本文采用中国专利申请号：CN201710674001.8中实施例2记载的方法进行[8]。

结果见表3。实验数据与正常组比较，模型组具有统计学意义(p<0.05)，与模型组比较，VE组与产品A-F组也具有统计学意义(p<0.05)。结果见表3。

表3 药理学实验结果Tab. 3 The results of pharmacological experiments

4 结论

本文主要以蒲公英、苦苣根、紫苏叶为主要原料，利用超临界萃取法分离提取混合物中的有效成分，科学实验证明：蒲公英、紫苏叶、苦苣根以一定的比例混合，有希望研究出蒲公英保健品。本文研究了各种配比，蒲公英苦苣根紫苏叶比例不一样，都可以研制成功，其中蒲公英5份，苦苣根1份，紫苏叶0.1份的萃取物测试性能最好。蒲公英、紫苏叶、苦苣根中的有效成分，均有非常显著的抗氧化、抗衰老、抗病毒等作用，在各个领域应用非常广泛，因此蒲公英有希望被发展为保健品。