复方中药“稳健”提高非特异性免疫力动物实验研究

蒋 威，相艳丽，岳学亮，杜亚博，关景林

（1.新乡鑫瑞博生物工程有限公司，河南 新乡 453800；2.辛集市农业农村局，河北 辛集 052300；3.河南省获嘉县农业农村局，河南 新乡 453800；4.河北省昌黎县农业农村局，河北 昌黎 066600）

非洲猪瘟是一种急性、高热、高度接触性传染病，由于其具有发病率高、病程短、死亡率高等特点，给发病地区的养猪业造成沉重的打击。同时，由于传统灭活疫苗生产工艺制备的非洲猪瘟灭活疫苗无法起到保护作用；弱毒疫苗存在散毒风险；亚单位疫苗和DNA疫苗免疫原性较差等原因难以投入到实际生产应用，导致对该病预防和治疗的难度极大。

中药对生猪有一定的保护作用，主要是中药能够促进生猪非特异类型的免疫功能。此非特异性免疫力的作用比疫苗更广泛，同时也能够进一步提升猪群的疾病感染阈值。所以，对生猪的非特异性免疫功能和非洲猪瘟间的相关性、评估防控参数需加强探究。

猪群免疫系统的非特异性免疫力由三道免疫防线组成，第一道免疫防线为黏膜屏障保护，主要包括体表皮肤和体内黏膜，中药对黏膜屏障的保护是通过特异性分泌型免疫球蛋白SIgA、以及机械和化学屏障对猪进行保护。

在猪群非特异类型免疫功能的防线中，第2道防线涉及免疫器官(淋巴结、脾脏、胸腺、扁桃体等)、相关免疫细胞(T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞等)，是猪群对外界病原体刺激产生免疫反应的主要部位。机体的非特异性免疫力主要是通过免疫器官和免疫细胞来衡量，因此评价中药对第二道免疫防线是否增强主要通过免疫器官和免疫细胞的活性变化进行评价。

动物非特异性免疫力的第三道防线主要通过分泌Ⅰ型干扰素、白细胞介素（IL）、其他细胞因子等来实现。非洲猪瘟病毒入侵第一道和第二道防线后，会抑制猪干扰素、白细胞介素等的分泌，所以，生猪受到非洲猪瘟病毒感染之前，体内可以形成较多白细胞介素与干扰素，可以改善生猪保护功能，降低猪群发病风险。基于非特异性免疫力与非洲猪瘟防控关系，本文通过对免疫器官（胸腺和脾胀指数）和细胞因子（IL-2、IL-4活性）进行实验和数据分析，验证了中药在非特异性免疫方面的作用，为非洲猪瘟的防控提供基础。

1 实验材料

1.1实验动物18~22g雌性昆明小鼠100只；

1.2实验中药复方中药“稳健”的主要成分：蚤休、人工牛黄、人参、黄芪、当归、白术、苍术、白芍、三七、红景天、刺五加、金银花等。

1.3试剂环磷酰胺、转移因子（杭州）、转移因子（洛阳）、小鼠白细胞介素-4 ELISA试剂盒（索莱宝）、小鼠白细胞介素-2 ELISA试剂盒（索莱宝）等。

2 实验方法

2.1分组和给药方式将100只小鼠随机分为7组，空白组、模型组（环磷酰胺）、阳性对照A组（转移因子-杭州）、阳性对照B组（转移因子-洛阳）、“稳健”低、中、高剂量组；每组5只。适应性喂养5d，饲养室温度21～26℃，湿度45%～55%，光/暗交替12h，可自由饮水和摄食。

对小鼠实施维持用药15d，2次/d，低剂量、中剂量、高剂量的“稳健”组中，依次予以每日剂量是5g/kg、15g/kg、30g/kg，阳性对照组给转移因子（杭、洛）0.01mg/g，正常对照组以及模型对照组小鼠予以相同剂量的蒸馏水，除了正常对照组之外，其他各个组别在用药第7~15d，给小鼠腹腔注入药物，用药是环磷酰胺，剂量是60mg/kg.d，构建免疫抑制小鼠模型，1次/d，而对照组小鼠而予以相同用量的生理盐水，给予形式也是腹腔注入，具体方案见表1。实施实验之后，小鼠体重测定1次/d，了解其体重改变、进食状况、活动情况等。

表1 实验动物用药实验方案

在第16日，将小鼠眼球给予摘掉，采集血液，采取2000g实施离心干预，维持时长是15 min，对血清样品给予处置，放在-20℃下存储，对血清内所含细胞因子（具体涉及IL-2因子、IL-4因子）实施测定。对小鼠颈椎实施脱臼后整死，对小鼠实施解剖操作，将脾脏以及胸腺拿出，测定湿重数据，分析脾脏指数结果以及胸腺指数结果。

2.2脾脏指数和胸腺指数的测定试验小鼠采血后颈椎脱臼处死，并迅速解剖，取脾脏和胸腺称量湿重，以小鼠脏器重量（mg）/体重（g）来计算脾脏、胸腺的脏器指数。小鼠体重、胸腺和脾脏重量，根据公式，计算胸腺和脾脏指数。

2.3IL-2、IL-4因子的检测IL-2、IL-4因子的检测按照小鼠白细胞介素-4 ELISA试剂盒、小鼠白细胞介素-2 ELISA试剂盒说明书操作进行。

3 实验结果

3.1症状表现实施实验的过程中，注入环磷酰胺之后，模型组及对照组中的小鼠经由对比，模型组进食量得以降低，活动量降低，存在弓背表现，其体重降低，予以用药时，其抵抗行为减弱，转移因子阳性对照组和“稳健”给药组在进食情况、活动状况、体重大小、精神表现等均获得改善。

3.2脾脏指数结果及胸腺指数结果模型组和对照组在脾脏指数结果、胸腺指数结果方面差距比较大，提示环磷酰胺造模得以成功，且对照组给予对比，给药组以上两项指数提示，复方中药“稳健”高剂量组、中剂量组获得良好效果，差别较高；提示环磷酰胺可引发胸腺指数降低，和对照组给予比对，模型组胸腺指数结果降低；和模型组实施对比，“稳健”低剂量组、中剂量组、高剂量组及转移因子使小鼠脾脏指数有恢复效果，“稳健”中剂量给药组对小鼠效果较为明显。结果见表2和图1、2。

表2 “稳健”对免疫抑制小鼠胸腺及脾脏指数的影响

图1 不同组别小鼠具体胸腺指数结果（单位是mg/g，n=5）

图2 雌性各组小鼠脾脏指数结果（mg/g，n=5）

3.3复方中药“稳健”对免疫抑制小鼠血清IL-2和IL-4影响为分析复方中药“稳健”对存在免疫抑制状况的小鼠身体免疫能力形成的影响，测定其IL-2指标及IL-4指标。和对照组实施对比，模型组中的血清IL-2指标下降，提示模型组细胞免疫能力对减弱，IL-4指标也减少，提示模型组体液免疫功能也降低；和模型组给予评比，用量较少的复方中药“稳健”对IL-4存在加强效果，不过影响作用缺乏显著性，中剂量组、高剂量组可提升IL-4含量，复方中药“稳健”低剂量组、中剂量组、高剂量组均能显著增加血清细胞因子IL-2分泌水平，说明复方中药“稳健”均能增强细胞因子IL-2和IL-4 的分泌,相对来讲复方中药“稳健”增强见IL-2分泌水平更强（见表3、图3和图4）。

表3 复方中药“稳健”对免疫抑制小鼠血清IL-2、IL-4含量的影响

图3 环磷酰胺致雌性小鼠免疫力低下模型血清中IL-2的含量

图4 环磷酰胺致雌性小鼠免疫力低下模型血清中IL-4的含量

4 结论

本研究通过对小鼠腹腔注射环磷酰胺造模型，并给予复方中药“稳健”用药，观察小鼠非特异性免疫指标。复方中药“稳健”可促进存在免疫抑制状况的小鼠体重大小、脾脏指数结果和胸腺指数指标得到提升，通过也能够促进细胞因子IL-2和IL-4的表达，进而改善机体的免疫功能。证明了复方中药“稳健”在改善小鼠等动物的免疫功能低下症状，提高机体非特异性免疫力方面具有一定的功效。

5 小结

中药能够提升动物身体非特异性免疫功能，也存在可量化特征，中药经由加强动物免疫系统功能实现非特异性免疫能力提高。中药主要是通过调节免疫体系关键活性物质，进而对免疫功能给予改善，能够依据免疫体系项目改变给予评估结果情况。参考中药存在的优越性，采取中药能够对非洲猪瘟实施积极预防及控制。

中国的中医药历史悠久，中药相关理论较深，对传染病的防治应用实践经验较多。由于非洲猪瘟疫苗的开发难度较大，在非洲猪瘟疫苗未研制成功之前，在做好外部生物安全的同时，要充分利用我国优势的中药资源，通过提高动物的非特异性免疫力对动物进行保护存在重要性，对非洲猪瘟的预防及控制存在有效性。