中药微生态制剂对奶牛子宫内膜炎乳汁相关指标的影响

程 磊，郭 庆

（1.河南省开封市畜产品质量监测检验中心，河南开封 475000；2.安徽科宝生物工程有限公司，安徽淮北 235000）

随着生活水平的提高，人们对牛奶的需求量与日俱增，这促进了我国奶牛事业的不断发展壮大。奶牛子宫内膜炎是影响奶牛业发展和经济效益的重要疾病之一，其原因主要是奶牛生产后子宫未完全修复，自身抵抗力差，使病原体进入子宫内繁殖增长，引起子宫内膜浅表的炎症。该病主要有全身性的治疗和针对子宫局部抗感染的治疗，然而在治疗过程中由于抗生素的滥用，造成奶牛机体产生抗药性和抗生素残留，使养殖户遭受巨大经济损失。近年来用中药治疗子宫内膜炎的研究越来越多，并且己有研究表明中草药复方制剂、灌注剂和中草药提取物注射剂对子宫内膜炎具有良好的防治效果。目前，亦有微生态制剂治疗奶牛子宫内膜炎的报道，但微生态制剂中均没有中药成分，都是单纯的采用益生菌制成微生态制剂。本实验以中兽医理论为基础，旨在筛选出对奶牛子宫内膜炎有效的中药，科学组方并提取有效成份，接种益生菌发酵，制成中药微生态制剂直接给奶牛饮用，通过测定用药前后乳汁中的体细胞数、电导率、乳酸脱氢酶（LDH）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和白蛋白（ALB）相关指标，以评价其对奶牛子宫内膜炎的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 中药与试剂 益母草、红花、桃仁、金银花、白头翁、紫锥菊、绞股蓝、黄芪、甘草购于开封协和医药连锁店；CMT 诊断液购于西安麦得法药业有限公司；乳酸杆菌、红茶菌和酵母菌购于徐州市献华生物科技有限公司；LDH、ALT 和ALB 试剂盒均购于上海士锋生物科技有限公司；乙醇食品级，购于安徽安特食品股份有限公司；葡萄糖食品级，购于西王药业有限公司。

1.1.2 主要仪器 SZC-A 恒温磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）、R-1005 旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）、DL-360B 超声波清洗器（上海之信仪器有限公司）、CONscan40 型数显电导率仪（上海理达仪器厂）、迈瑞BA-90 半自动生化分析仪（咸阳铭海医疗器械有限公司）、高速冷冻离心机（盐城市凯特实验仪器有限公司）、YC-300L 医用冷藏箱（中科美菱低温科技有限公司）、PHS-3E 型精密pH 计（上海仪电科学仪器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 中药微生态制剂的制备 将益母草、红花、桃仁、金银花、白头翁、紫锥菊、绞股蓝、黄芪、甘草等按重量比15:15:15:13:13:12:10:8:4 精确称取，超微粉碎，加10 倍量（中药重量）的80% 乙醇浸泡30 min 后超声15 min，再加热回流2 h，降至常温，用布氏漏斗真空抽滤，收集药液。药渣加8 倍量60% 乙醇，加热回流提取1 h，降至常温，用布氏漏斗真空抽滤，合并2次药液，旋转蒸发回收乙醇至无醇味，向浓缩液中加纯化水至每毫升含有0.5 g 中药。以1 000 g 浓缩液加50 g的葡萄糖加热煮沸5 min，降至常温转无菌室内接种乳酸杆菌、红茶菌和酵母30 g，37℃发酵72 h，即得中药微生态制剂，4℃保存备用。

1.2.2 乳汁中体细胞数和电导率的测定 参照参考文献中的方法检测体细胞数，用CONscan40 型数显电导率仪测定乳汁的电导率。

1.2.3 乳汁中pH 的测定 采集乳样到实验室，按照说明书操作PHS-3E 型精密pH 计，先开机预热30 min，校正后，再测定乳汁pH。

1.2.4 乳清中LDH、ALT 和ALB 含量的测定 将3 mL乳汁加入5 mL 离心管内，3 000 r/min 离心10 min，除去乳脂，然后12 000 r/min 离心15 min，取上清液4℃保存，备用。采用迈瑞BA-90 半自动生化分析仪测定乳清中LDH、ALT 和ALB 含量，按试剂盒说明书进行测定。

1.2.5 实验动物的分组与采样 选取安徽淮北某奶牛场患有子宫内膜炎的奶牛36 头，随机分成2 组，中药微生态制剂治疗组（I）30 头和阳性对照组（II）6 头，另选取胎次、年龄、泌乳月相近、身体状况良好的阴性健康奶牛10 头为阴性对照组（III）。治疗组将中药微生态制剂稀释5 倍，让奶牛自由饮用，连续用药7 d，阳性对照组采用抗生素治疗，阴性对照组将中药微生态制剂稀释10 倍，让奶牛自由饮用；采取乳样进行分析，严格消毒，弃去前三把乳液，同时比较用药第0 天和用药后第7 天的各组乳汁指标的变化，并统计泌乳量。

1.3 数据统计 应用SPSS 18.0 统计软件，对实验数据进行分析。数据用“平均值± 标准差”表示，＜0.05表示差异显著，＜0.01 表示差异极显著。

2 结果

2.1 中药微生态剂对奶牛子宫内膜炎乳汁中体细胞数和电导率的影响 由表1 可知，中药微生态制剂治疗前，I、II 组奶牛乳汁中的体细胞数、电导率与III 组相比差异极显著。通过中药微生态制剂治疗7 d 后，I 组奶牛乳汁中的体细胞数、电导率与II 组相比差异极显著，与III 组相比差异不显著；II 组奶牛乳汁中的体细胞数、电导率与III 组相比差异极显著。

表1 中药微生态制剂对乳汁中体细胞数和电导率的影响

2.2 中药微生态剂对奶牛子宫内膜炎乳汁pH 值和泌乳量的影响 由表2 可知，在治疗前，I、II 组奶牛乳汁pH 和泌乳量与III 组相比差异显著。通过中药微生态制剂治疗7 d 后，I 组奶牛乳汁的pH 和泌乳量与II 组相比差异显著，与III 组相比差异不显著；II 组奶牛乳汁的pH 值和泌乳量与III 组相比差异显著；III 组经过7 d的自由饮用中药微生态制剂后泌乳量增加了4.36%，差异不显著。

表2 中药微生态制剂对乳汁pH 值和泌乳量的影响

2.3 中药微生态制剂对奶牛子宫内膜炎患牛乳清中LDH、ALT 和ALB 含量的影响 由表3 可知，在治疗前，I、II 组奶牛乳清中LDH、ALT 和ALB 含量与III组相比差异极显著。通过中药微生态制剂治疗7 d 后，I 组奶牛乳清中ALT、LDH、ALB 与II 组相比差异显著，与III 组相比差异不显著；II 组奶牛乳清中的ALB、LDH、ALT 与III 组相比差异极显著。

表3 中药微生态制剂对子宫内膜炎患牛乳清中LDH、ALT、ALB 含量的影响

3 讨 论

中药微生态制剂配方中，益母草、红花、金银花、白头翁等均有活血化瘀、清热解毒的功能，黄芪、甘草等均能增强机体免疫力。乳酸菌是良好的免疫激活剂，能够增强奶牛免疫功能，激活巨噬细胞活性，提高奶牛抗体水平和免疫球蛋白水平，提高抗病力，有效预防病原体的感染，降低子宫内膜炎发病率。本试验结果表明：对患有奶牛子宫内膜炎的奶牛，经中药微生态制剂治疗，乳清中的LDH、ALT 和ALB 含量达到正常的水平，与阴性对照组相当。这为临床应用提供了实验数据，其具体作用机制有待进一步探讨。

根据我国奶牛隐性乳房炎快速诊断技术农业标准（NY/T2692-2015）的规定，健康奶牛乳汁中体细胞数应低于50 万个/mL。健康泌乳牛乳腺中体细胞数很少，机体发生炎症时，大量的中性粒细胞及淋巴细胞从血液中向乳腺迁移，导致上皮细胞的脱落，致使乳汁中体细胞数量异常升高。本试验结果表明，患有子宫内膜炎的奶牛连续7 d 自由饮用中药微生态制剂后，乳汁体细胞数由161.12 万个/mL 降到42.31 万个/mL，说明中药微生态制剂对治疗奶牛子宫内膜炎有明显效果，而阳性对照组变化不大，阴性对照组体细胞数下降，说明中药微生态制剂对奶牛子宫内膜炎也具有较好的预防作用，这与周键报道的结果一致。提示中药微生态制剂防治奶牛子宫内膜炎的作用，可能是益生菌和肠道菌群建立共生，促进营养的吸收，增强免疫力，也可能是中药中的有效成分和活性小肽等能够促进胎衣排出和子宫修复，降低有害菌群的滋生等原因所致，但其作用机理待深入研究。

本研究针对当地奶牛场的试验，未能扩大到其他地方的奶牛场进行大群试验的验证，且本试验所分离的致病菌主要是金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，其他致病菌的试验待进一步验证。后期拟开展中药微生态制剂对致病菌的机理方面研究。

4 结 论

本研究发现，将中药提取有效成分和益生菌发酵制备的中药微生态制剂应用于奶牛子宫内膜炎的治疗，经过7 d 的治疗能够使乳汁中的体细胞数、LDH、ALT 和ALB 含量降至正常值。