某猪场商品猪O型口蹄疫抗体监测分析

王杰

（盐城生物工程高等职业技术学校，江苏 盐城 224051）

口蹄疫（Foot and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的一种烈性、接触性传染病，临床特征为患猪蹄部、鼻镜等出现水泡[1-2]，继而发生溃疡。易感动物种类较多，包括猪、牛、羊等主要家畜及其他家养或是野生的偶蹄类动物，是目前危害养猪业健康发展的重要疫病之一[3-4]。目前，在我国主要流行O型和A型口蹄疫病毒，市场上使用的也是口蹄疫OA二价苗。大部分国产常规疫苗对当前疫情几乎无法形成有效抵御，所以经常会出现免疫失败的情况。现如今，越来越多的养殖场重视口蹄疫免疫后的抗体监测工作，根据不同时间、不同猪群的检测结果，结合养殖场日常管理情况，不但可以总结分析口蹄疫疫苗免疫失败的原因，而且还能提出更合理的免疫方案。母源抗体是仔猪出生后获得抗体保护的首要条件，对早期预防FMD发挥着重要作用，但是FMD母源抗体在仔猪体内会随时间增加而逐渐衰减[5]。母源抗体具有两面性，若过早注射口蹄疫疫苗，母源抗体的存在会干扰免疫效果；过晚则具有被感染的风险。制定免疫程序首先要清楚仔猪首免时间，而首免时间又取决于仔猪体内母源抗体的消减时间[6]。

液相阻断 ELISA在FMD疫苗免疫效果评价方面具有高度的敏感性、特异性和重复性，也是OIE推荐的标准方法。为了监测及对比某规模化猪场2条生产线所产商品猪的口蹄疫抗体情况，通过液相阻断ELISA方法对该场商品猪不同阶段的抗体进行监测，并根据结果及时调整首免时间及免疫程序。

1 材料与方法

1.1 材料

口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒、酶标仪（含波长450 nm的滤光片）、洗板机或洗瓶、微量可调移液器（单道/多道）及配套吸头、去离子水、冰箱、37℃培养箱、旋涡混合仪、计时器、吸水纸巾、记号笔及加样槽等。

1.2 检测方法

采用O型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒检测，严格按照试剂盒使用说明进行。抗体判定合格的标准为：抗体效价≥1∶64，99%以上保护；抗体效价＜1∶8，不保护；抗体效价为 1∶8～1∶45，50%保护。 结合农业农村部相关规定，以养殖户（场）为单位，抗体合格率在70%以上，则该户（场）免疫抗体水平为合格。

1.3 样品采集

该规模化养殖场，使用某公司生产的口蹄疫疫苗普免，A生产线母猪口蹄疫疫苗一年免疫3次，B生产线母猪口蹄疫疫苗一年免疫4次，在同批次母猪每次免疫后28天，随机抽取8个血清样品进行抽样监测；A生产线和B生产线的仔猪在4周、6周、7周、8周、9周、10周、13周、16周、20周、24周和 26周随机采血，分离血清样本各8个。采集血样进行统一离心，保存待检。

1.4 结果判定

抗体效价≥1∶64， 判定为阳性； 抗体效价＜1∶64，判定为阴性。

2 结果与分析

2.1 母猪抗体结果

母猪抗体检测结果如表1所示。

表1 三免母猪和四免母猪抗体检测结果

对比农业农村部 70%的合格标准，通过检测数据可以看出三免和四免的母猪，每次免疫后28天的抗体均达到了合格水平，可以有效地产生保护力。根据结果得知，该次抽取的样本未出现免疫失败的情况，所以仔猪采食初乳后可立即获得母源抗体，从而快速提高仔猪的免疫力，抵抗口蹄疫病毒的侵袭。

2.2 仔猪抗体结果

母猪抗体检测结果如表2、图1和图2所示。

表2 三免母猪和四免母猪所产仔猪的抗体检测结果

图1 三免母猪所产仔猪的O型抗体结果

图2 四免母猪所产仔猪的O型抗体结果

2.3 结果分析

通过试验结果可以看出，三免母猪所产的仔猪，母源抗体在7周时，抗体效价＞64阳性率下降到62.5%，而＞128的阳性率只有25%，此时对仔猪要进行首次免疫，所以将仔猪首免日龄确定为50 d，二免为80 d；二免后有效保护期为90 d，即170日龄，该日龄商品猪出栏体重为115～120 kg，刚好勉强可以产生免疫保护作用。当出栏体重达到135～145 kg即饲养至180～190 d时需要加强免疫1次（三免）。从图中也可以看出，在26周时抗体效价＞64阳性率只有12.5%，此时很难对动物机体产生保护力。

四免母猪所产的仔猪，母源抗体在10周时抗体效价＞64阳性率下降到62.5%，而＞128的阳性率只有37.5%，因此将仔猪首免日龄确定为70 d，二免为100 d，二免后有效保护期为90 d，即185～190日龄，体重也刚好达到出栏标准，可以产生有效保护。从试验数据也可以看出，在26周时抗体效价＞64阳性率仍为61.25%。

3 讨论

免疫抗体监测是对动物的健康状况进行反馈的一项重要工作，猪作为口蹄疫的放大器，对口蹄疫病毒极为敏感，对猪群血清样品的检测能反映口蹄疫在易感家畜中的感染情况，并根据检测结果合理调整疫苗的免疫程序。仔猪群首次免疫后抗体保护水平虽有上升，但是平均抗体保护水平不高，而二次免疫后抗体保护水平迅速上升，并长时间维持在一个较高水平，这是由于首免后机体产生的抗体以IgM为主，能在短期内中和大量抗原[7]。但是与抗原的结合力较弱，在体内维持时间较短，所以根据检测结果，该猪场调整首免日龄，将仔猪首免日龄确定为50 d，二免为80 d，根据疫苗的有效保护期，第二次免疫后有效保护期为90 d，即170日龄（24周左右），此时如果商品猪出栏体重为115～120 kg，刚好勉强可以产生免疫保护作用。但是当出栏体重为135～145 kg，即180～190 d（26周左右）时，抗体合格率极低。此时需要加强免疫1次。

4 建议

针对该场经产母猪，之前未使用过某某分司生产的疫苗，应先普免1次，间隔1个月再补免1次，以后每3～4个月免疫1次，避开配种后1周和分娩前1周；普免母猪群，母猪进行3次免疫，建议首免时间为50～60日龄；二免为80～90日龄；母猪4次免疫，建议首免时间为60～70日龄；二免为90～100日龄。在实际生产中，应根据猪场情况和本场母猪免疫水平，监测母源抗体消减规律以确定仔猪首免日龄，结合实际生产及商品猪出栏时间，确定出栏前是否需要加强免疫。

通过调整母猪免疫次数，延长疫苗免疫抗体的保护时间，调整育肥猪免疫程序，降低疫苗使用成本。母猪每年免疫4次，商品猪免疫2次可以完全满足保护需求。母猪每年免疫3次，商品猪免疫2次无法满足免疫保护需求，需要加免1次。所以母猪每年免疫4次比每年免疫3次从免疫成本上要节约1万头份苗 （500头基础母猪）。