补饲不同剂量双歧杆菌单剂对柴达木绒山羊血清生化、免疫和抗氧化指标的影响

刘 梦，吴占月，白占成，吴 森*

（1.青海大学畜牧兽医科学院，青海 西宁 810016；2.青海省高原家畜遗传资源保护与创新利用重点实验室，青海 西宁 810016）

随着“饲料禁抗”的实施，急切需要研究、开发和推广抗生素替代品[1]。双歧杆菌是一种厌氧型革兰氏阳性杆菌，同时也是典型的食品益生菌，具有调节肠道菌群、促进消化、预防腹泻、减少便秘、抗过敏、抗肿瘤、改善营养状况和增强宿主免疫机能等[2]特殊的生理功能。有研究表明，当食品中双歧杆菌含量达到106CFU/mL以上时，才能发挥其应有的生理功效[3]。曹健[4]、Xiaozhou Tian[5]等人的研究结果表明，长期、大量使用双歧杆菌对血液生化指标无明显影响，且会造成药物残留，打破宿主菌群平衡。中国绒山羊主要分布在华北、西北、东北及青藏高原等地区[6]。目前，青海省山羊年存栏量约220万只，羊绒年产量约300 t[7]。柴达木绒山羊是以青海柴达木山羊（母本）与辽宁绒山羊（父本）杂交而成的一种新型绒山羊。有研究表明，双歧杆菌与哺乳仔猪的大肠杆菌、沙门氏菌在营养和空间方面不能长期共存，并可通过细菌素和抗生素等代谢产物抑制致病菌的生长[8]。本试验进一步探讨了不同水平双歧杆菌对柴达木绒山羊生长性能以及血清生化、免疫和抗氧化指标的影响，为双歧杆菌在柴达木绒山羊在养殖中的应用奠定基础，为提高柴达木绒山羊健康水平提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 试验设计

该试验于2020年2月在青海伊清农牧科技有限责任公司进行，双歧杆菌单剂及基底辅料购自内蒙古和美科盛生物技术有限公司。随机选取24只6月龄体重相近的健康柴达木绒山羊作为试验动物，分成3组（即对照组，试验I组，试验II组），每组2个重复，每个重复4只。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ组，试验Ⅱ组在基础日粮中分别添加 5×106CFU/g，5×107CFU/g的双歧杆菌单剂，同时，根据每只羊每天采食100 g精料估算，保证每只羊每日摄入双歧杆菌量为5×108CFU，5×109CFU 左右。 试验期为60 d。 试验期间各试验羊只分别饲喂在3个通风良好的圈中，日常饲养管理方法完全一致。基础日粮组成及营养水平见表1。

表1 饲粮组成和营养水平（干物质基础）

1.2 样品采集及测定方法

试验结束时，对每只柴达木绒山羊颈静脉采血4.0 mL。将所有采集的血液注入离心管，分别于37℃培养箱培养2 h和2～8℃冰箱内培养4 h。5 000 r/min离心10 min，取上清液作为血清样本，用于后续血清生化指标的测定。

1.3 血清生化指标测定

该试验检测的血清指标包括血清生化指标、免疫指标和抗氧化指标（共计24个）。

1.3.1 血清生化指标。包括谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（Albumin）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、雌二醇（E2）、生长激素（GH）、胰岛素（INS）、尿素（Urea）。

1.3.2 免疫指标。包括球蛋白（GLB）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白 G（IgG）、免疫球蛋白 M（IgM）、白细胞介素 1β（IL-1β）、白细胞介素 2（IL-2）、白细胞介素 4（IL-4）、白细胞介素 6（IL-6）。

1.3.3 抗氧化指标。包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）。

对所有指标采用“酶标生物”（江苏）出产的绵羊血液ELISA酶标反应试剂盒进行检测。根据试剂盒使用说明，采用Tecan Safire2多功能酶标仪（瑞士）检测柴达木绒山羊血清相关生化指标。

1.4 数据统计分析

试验数据用Excel进行初步整理，使用IBM SPSS 24.0进行One-way ANOVA方差分析，并对检验结果进行多重比较（Duncan法），结果以“平均值±标准差”表示，P＜0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 双歧杆菌对柴达木绒山羊生长性能的影响

柴达木绒山羊生长发育指标测定值见表2。由表2可知，补充不同剂量双歧杆菌后，试验I组的末重、平均日增重均显著高于对照组和试验II组（P＜0.05）。

表2 双歧杆菌对柴达木绒山羊生长性能的影响

2.2 血清生化指标的测定

2.2.1 双歧杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响。由表3可知，试验I组，试验II组与对照组相比，Albumin、TC 和 TG 含量显著高于对照组（P＜0.05），试验I组的AST含量显著高于对照组（P＜0.05），而TP、E2含量差异不显著（P＞0.05）。试验II组与试验I组相比，ALP、INS 含量显著高于试验 I组 （P＜0.05），ALT、Albumin、TC、TG、E2、GH 和 Urea 含量均未达到显著差异（P＞0.05），而试验 I组 AST、TP 含量显著高于试验II组（P＜0.05），说明在基础日粮中添加 5×106CFU/g和5×107CFU/g的双歧杆菌均能提高柴达木绒山羊的血清生化指标，且添加剂量为5×106CFU/g的作用效果要优于5×107CFU/g的。

表3 双歧杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响

2.3 血清免疫指标的测定

双歧杆菌对柴达木绒山羊免疫指标的影响。由表4可知，试验I组，试验II组与对照组相比，IgM含量均显著高于对照组（P＜0.05），试验 I组 IgA、IgG 含量与对照组相比差异不显著（P＞0.05）。试验II组与试验I组相比，IgG、IgM 含量显著高于试验 I组 （P＜0.05），GLB、IgA、IL-2 含量均未达到显著差异（P＞0.05），试验I组IL-1beta、IL-4和IL-6含量显著高于试验 II组（P＜0.05），说明在基础日粮中添加 5×106CFU/g 和 5×107CFU/g的双歧杆菌均能改善柴达木绒山羊的血清免疫能力，且添加剂量为5×106CFU/g的作用效果要优于 5×107CFU/g的。

表4 双歧杆菌对柴达木绒山羊免疫指标的影响

2.4 血清抗氧化指标的测定

2.4.1 双歧杆菌对柴达木绒山羊抗氧化指标的影响。由表5可知，试验I组，试验II组与对照组相比，SOD、LDH、GSH-Px含量均显著低于对照组（P＜0.05），CAT、MDA 含量差异不显著（P＞0.05）。 试验 II组与试验 I组相比，GSH-Px含量显著高于试验 I组 （P＜0.05），而 SOD、CAT、MDA 含量均未达到显著差异（P＞0.05），试验II组MDA含量高于试验I组和对照组，说明在基础日粮中添加5×106CFU/g和5×107CFU/g的双歧杆菌对柴达木绒山羊的血清抗氧化指标影响不大，且添加剂量为5×107CFU/g的作用效果整体上优于5×106CFU/g的。

表5 双歧杆菌对柴达木绒山羊抗氧化指标的影响

3 讨论

3.1 双歧杆菌对柴达木绒山羊生产性能的影响

该试验在高寒牧区进行，在圈舍饲养条件下过量添加益生菌使得很多动物不仅不能维持体重，甚至会掉膘或死亡。有研究表明，在基础日粮中添加少量双歧杆菌可提高家畜的生长性能。在本试验中，补充少量双歧杆菌使柴达木绒山羊的体重和平均日增重提高，这与戴东文等[9]的研究结果一致。

3.2 双歧杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响

益生菌含有蛋白质、氨基酸和多种消化酶，可以有效提高饲料中营养物质的利用率，动物的生长性能也得到了相应的提高，现已被广泛发掘和应用[10]。有研究表明，双歧杆菌能够促进动物消化道的吸收率，可调节动物肠道微生态菌群的平衡，提高动物的抗病能力，并能提高猪的生长性能[11]。TP、ALB活性反映了动物体内肝脏蛋白质代谢水平和蛋白质的合成能力[12-14]。在本试验中，试验I组TP含量显著高于试验II组，试验II组的ALB含量高于试验I组，但是ALB含量差异不显著，说明在基础日粮中添加5×106CFU/g和5×107CFU/g的双歧杆菌均能提高柴达木绒山羊血清的TP、ALB含量，可促进柴达木绒山羊蛋白质消化吸收利用率，改善肝肾功能。血清中ALP、AST活性是机体肝功能的重要指标[15]，AST可调节机体内蛋白质的代谢水平，当蛋白质代谢水平提高或肝功能受损时，血清中AST的活性就会升高[16]。在本试验中，试验I组的AST含量显著高于对照组，试验II组的ALP含量显著高于试验I组，说明补充双歧杆菌可增强柴达木绒山羊心脏功能和肌肉组织代谢功能，这与贺长青等[17]报道的结果一致。

3.3 双歧杆菌对柴达木绒山羊免疫指标的影响

在血清中免疫指标是一种具有抗体活性的球蛋白，在动物机体中主要起免疫调节的作用，主要包括IgA、IgM和IgG[18-19]。IgM为初次免疫应答的主要抗体[20]，在本试验中，试验I组，试验II组的IgM含量均高于对照组，且试验II组IgG含量显著高于对照组，这与王彩莲[21]的研究结果相似。IL-2能够刺激T淋巴细胞增殖，IL-6能够诱导B细胞分化和免疫球蛋白的分泌，IL-4可以抑制促炎因子的产生。IL-4和IL-6均是动物机体炎症细胞因子的主要检测指标[22]。在本试验中，试验I组IL-4、IL-6含量显著高于试验II组，说明在基础日粮中添加5×106CFU/g的双歧杆菌比5×107CFU/g的效果要好，这与徐萍等[23]、杨春涛等[24]的研究结果相似。

3.4 双歧杆菌对柴达木绒山羊抗氧化指标的影响

在血清抗氧化指标中，动物体内自由基的产生与消除始终处于微观动态平衡状态。当动物机体受到外界病原体的刺激时，会发生氧化反应，产生大量的自由基。而动物机体内的SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶则通过酶系统被还原，以清除自由基，维持动物体内氧化还原微动力学平衡[25]。在本试验中，试验I组，试验II组SOD、LDH、GSH-Px含量均低于对照组，试验I组CAT、LDH含量与对照组相比差异不显著，试验II组SOD、CAT、GSH-Px含量高于试验I组，但只有GSH-Px含量呈现出显著差异，说明在基础日粮中添加5×107CFU/g双歧杆菌对柴达木绒山羊抗氧化功能的改善整体上优于5×106CFU/g添加剂量，其原因可能是双歧杆菌在柴达木绒山羊瘤胃中能迅速繁殖，起到调节微生态平衡的作用，从而提高柴达木绒山羊的免疫和抗氧化功能，改善柴达木绒山羊的健康状况。脂质氧化的最终产物是MDA，其含量直接反映了动物体内脂质氧化和细胞损伤的程度[26]。在本试验中，试验II组MDA含量高于试验I组，说明在柴达木绒山羊基础日粮中添加5×106CFU/g双歧杆菌能够减轻对动物细胞的损伤，而且添加不同水平的双歧杆菌均能够提升柴达木绒山羊的免疫功能和抗氧化能力。综合考虑养殖成本，建议在日常饲养中双歧杆菌的临床添加剂量为5×106CFU/g。

4 结论

从本试验可以得出，在柴达木绒山羊的基础日粮中添加5×106CFU/g双歧杆菌，能够提高柴达木绒山羊的生长性能、免疫和抗氧化能力，因此在日后养殖中建议选择5×106CFU/g作为最适添加剂量。