柴胡疏肝散加味江香薷对SD大鼠28天喂养实验研究
2022-05-06陈雨然罗黎明李龙雪杨玉艳曾静军彭赐玲刘志勇
陈雨然,罗 琪,罗黎明,李龙雪,舒 坤,徐 磊,洪 滔,杨玉艳,曾静军,彭赐玲,刘志勇
(江西中医药大学实验动物科技中心,330004,南昌 )
0 引言
柴胡疏肝散(Chaihu Shugan San, CHSGS)出自于明代张介宾的《景岳全书》,方是由陈皮、柴胡、川芎、香附、枳壳、芍药、甘草共7味药组成[1],以柴胡、枳壳、香附解肝经气郁;川芎开肝经血郁;白芍、甘草柔肝缓急:陈皮理气健脾化痰使气机疏畅,具有疏肝行气、活血止痛的功效[2]。近10年来,柴胡疏肝散的临床研究及药理作用研究已渐趋深入,当前柴胡疏肝散的临床应用主要集中在心血管系统[3]、神经系统[4]、消化系统[5]及生殖相关[6]的4个方面。而柴胡疏肝散作为疏肝理气的经典方剂,在临床和动物实验中均已被证明其在抑郁症治疗上的良好疗效,并得到抗抑郁治疗的广泛应用。将柴胡疏肝散这一经典方剂的药物进行加减,茯苓、白术、陈皮健脾益气;远志宁心安神;白芍养血柔肝;郁金、玫瑰花、佛手除烦解郁安神;在先前研究中发现江香薷可以影响大鼠肠道菌群的变化[7],具有化湿健脾、改善体质的功效。将柴胡疏肝散在原有方剂的基础上进行加减,并加味江香薷,诸药合用,共奏疏肝解郁,健脾安神之功效。本研究通过给SD大鼠灌服柴胡疏肝散加味江香薷28 d的喂养实验,观察给药后对大鼠的各项指标的影响并结合BDI-GS评价指标体系,用以评价柴胡疏肝散加味江香薷的安全性,为临床应用提供准备。
1 材料与方法
1.1 实验动物
5周龄雌雄各半SD大鼠80只由江西中医药大学实验动物科技中心提供,体重范围为60~80 g,合格证号SCXK(赣)2018-0004。实验大鼠饲养在江西中医药大学实验动物科技中心SPF级屏障系统内,环境温度为20~23 ℃、湿度45%~55%,使用许可号为SYXK(赣) 2017-0004。大鼠食用由万千佳提供的正常饲料。
1.2 受试药物
受试方为:柴胡疏肝散加味江香薷,由柴胡、香附、当归、陈皮、川穹、枳壳、焦山楂、白芍、决明子、郁金、佛手、白术、茯苓、石菖蒲、江香薷、玫瑰花、远志组成,处方由江西中医药大学附属医院药剂科陈浩副主任药师进行鉴定。药材以10倍水量先行浸泡1 h,煎煮50 min得第1次的药液,再次加水煎煮50 min得第2次的药液,合并2次的煎煮液,浓缩为2:1的溶液,最终获得2 g/mL的药液,用于实验给药。
1.3 试剂与仪器
全自动尿液分析仪(优利特)、全自动生化仪(贝克曼AU480)、显微镜(IX37生物显微镜)、分析天平(北京赛多利斯)、血液学检测试剂盒、血液生化学检测试剂盒、尿常规检测试纸。
1.4 分组与处理
将SD大鼠分为空白对照组(0 g/kg)、柴胡疏肝散加味江香薷低(0.2 g/kg)、中(2 g/kg)、高(20 g/kg)剂量给药组,雄雌各4组,每组10只,共80只SD大鼠。连续灌胃给药28 d。实验期间每周称重1次,最终给药日时对大鼠进行尿常规检测。实验结束后,对大鼠进行深度麻醉后腹主动脉采血,进行血液学和血清生化指标的检测,同时进行大鼠大体解剖,先观察后取心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺、生殖腺(子宫卵巢或睾丸附睾)等脏器,分别称重后进行脏器系数的分析,并计算受试物脏器指标统计值的均值/空白对照组对应指标的均值,获得BDI值,在此基础上通过累计积分计算获得GS,最终得出BDI-GS评价指标体系。并对所有脏器进行固定制片后光学显微镜下检查各脏器。
1.5 统计学方法
2 结果
2.1 柴胡疏肝散加味江香薷对大鼠体重变化的影响
雄雌各剂量给药组大鼠及空白对照组大鼠的体重均呈增长趋势,各组大鼠的体重变化无显著性差异,结果图见图1。
2.2 血液学指标的影响
柴胡疏肝散加味江香薷各剂量组雌、雄大鼠的血液学指标检测结果与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3 柴胡疏肝散加味江香薷对大鼠末期血液生化学指标的影响
柴胡疏肝散加味江香薷高、中、低3个剂量组雄、雌大鼠的末期血液生化学指标检测结果与空白对照组的比较结果显示,雌鼠中剂量组AST指标显著降低,(P<0.01),其余与肝功能相关的指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。在与肾功能相关的生化指标检测结果中得出,给药后雄雌各剂量组大鼠的BUN(尿素氮)、CRE(肌酐)、UA(尿酸)与空白对照组大鼠间差别无显著性差异(P>0.05),各给药组与血脂相关的指标TC、TG、GLU与空白对照组相比也均无显著性差异(P>0.05),结果见表1、表2。
图1 大鼠体重变化趋势图
2.4 柴胡疏肝散加味江香薷对大鼠尿常规指标的影响
大鼠尿常规结果未见明显差异。
2.5 柴胡疏肝散加味江香薷对大鼠脏器系数的影响及BDI-GS评价结果
在各组大鼠脏器系数分析结果中得出给药组各剂量大鼠与空白对照组大鼠间各脏器均无显著性差异。BDI-GS计算结果显示,雌性给药组大鼠多数脏器的BDI值随着给药剂量的增加呈上升的趋势,各脏器总累计GS值也随着给药剂量的增加呈上升的趋势,增加至高剂量时GS值>10(在10项脏器重量累计总积分结果中,雌性的脾、肺BDI值均>1,子宫、卵巢和大脑BDI值均<1);雄性给药组大鼠各脏器总累计GS值在中剂量时>10(雄性给药组大鼠的睾丸、附睾、肾上腺的BDI值均>1),结果见表3、表4。
2.6 大体解剖及组织病理学观察
给药结束后,常规剖检大鼠,肉眼未观察到明显改变。对各组大鼠的主要脏器进行常规组织病理学切片检查,在大鼠肝脏、肾脏、脾脏的光镜观察下均未发现异常的组织病理学变化。
表1 柴胡疏肝散加味大鼠血清肝功能指标的影响
表2 柴胡疏肝散加味大鼠血清肾功能、血糖血脂的影响
表3 雌性大鼠脏器重量的BDI-GS评价结果
表4 雄性大鼠脏器重量的BDI-GS评价结果
3 讨论
柴胡疏肝散是根据中医“疏肝解郁”的治疗原则,由四逆散进一步发展而来的经典名方。具有治疗抑郁症、功能性消化不良和急性胰腺炎等多种药理作用[1]。通过对柴胡疏肝散处方的药物进行加减并配以江香薷,发挥疏肝解郁,健脾安神的功效。SD大鼠的血液学指标、生化学指标、脏器质量与系数、大鼠生长体重变化、各脏器病理制片等结果是实验动物健康评价、安全性评价试验中不可或缺的指标。因此本实验以SD大鼠为研究对象,通过28 d的喂养实验,观察大鼠的各项指标,进而评价受试药物的安全性。
3.1 从体重方面来看
由体重结果可知,各剂量给药组雄雌大鼠相比空白对照组大鼠体重增长趋势无显著差别,雌鼠的低剂量与高剂量给药组大鼠后期的体重增长趋势较空白对照组更加明显,而雄性各剂量给药组大鼠的体重增长趋势与空白对照组大鼠几近相同,表明柴胡疏肝散加味江香薷对大鼠的体重以及增长无影响。
3.2 从大鼠血常规来看
血常规指标是反应受试物是否影响造血功能的重要指标,本实验结果表明,柴胡疏肝散加味江香薷28 d喂养后,并未对各实验组大鼠血常规的各项指标有显著性影响。
3.3 从大鼠血清生化来看
雄雌各组大鼠的血清生化结果显示,雌性中剂量大鼠的AST指标与空白对照组大鼠间相比显著降低,差异有统计学意义。AST的水平可以反应肝细胞的损伤程度和严重程度,提示柴胡疏肝散加味江香薷可能对肝脏具有影响作用,但雌性各剂量大鼠间的AST指标未见明显的剂量效应关系,且在肝脏的病理切片中未发现异常的组织病理学变化,说明柴胡疏肝散加味江香薷对肝脏有作用,但无毒。生化检测中的其余各项指标与空白对照组比较均无显著性差异。
3.4 从大鼠尿常规来看
尿常规检测结果为肾脏疾病诊断的重要指标。本实验结果表明,柴胡疏肝散加味江香薷的28 d喂养实验中,并未对肾脏泌尿产生毒性作用。
3.5 从大鼠脏器系数和BDI-GS指标来看
大鼠脏器质量和脏器系数是毒理学试验的重要观察指标。雌性给药组大鼠的脾、肺BDI值均>1,性腺、大脑的BDI值均<1,随着给药剂量的增加,雌性大鼠多数脏器的BDI值和GS值都呈增加的趋势,在剂量增加至高剂量时,各脏器总累计GS值>10;雄性给药组大鼠的肾上腺、睾丸、附睾BDI值均>1,雄性给药组大鼠的各脏器总累计GS值接近或>10,BDI-GS指标提示柴胡疏肝散加味江香薷并未对雌雄大鼠脏器系数产生明显影响。
4 结论
通过大鼠28 d的喂养试验后,依据SD大鼠的体重变化、生理生化指标、尿常规并结合BDI-GS指标体系可见柴胡疏肝散加味江香薷对SD大鼠未见明显的毒性。