乳糜对仪器自动化检测浆膜腔积液细胞数量结果的影响

龙一飞，张宏远，鄂顺梅，肖英伦，陈茶，林冬玲

(广东省中医院&广州中医药大学第二附属医院检验医学部， 广州 510006)

浆膜腔积液自动化检测已逐渐应用于临床实验室，相关操作及技术要求也日趋标准化[1-2]。临床工作中，有很多因素可对血细胞分析仪的检测结果产生影响，高血脂乳糜标本可以对WBC、Hb及PLT等项目检测带来严重影响[3]。由于血细胞分析仪检测浆膜腔积液和血液细胞数量的方法学原理一致，因此浆膜腔积液仪器自动化检测结果的准确性同样会受到不同程度乳糜状态的影响。临床上乳糜状态的浆膜腔积液标本并不少见，且目前暂未见有关乳糜性状对浆膜腔积液自动化检测细胞数量及分类结果产生影响或干扰的报道。本研究将探讨乳糜状态对浆膜腔积液自动化检测细胞数量的干扰影响。

1 材料与方法

1.1标本收集 2021年7月于广东省中医院大学城医院检验科收集20例新鲜浆膜腔积液标本。标本的采集与送检均符合WS/T 662—2020《临床体液检验技术》要求，标本细胞计数检测值均在仪器线性检测范围内，且外观正常，呈非乳糜状态。本研究已获得广东省中医院伦理委员会批准(批准文号2021666)。

1.2仪器与试剂 BC-6000Plus血细胞分析仪及其配套试剂(深圳迈瑞公司)；Cobas8000生化分析仪(瑞士罗氏公司)；三酰甘油(TG)试剂(罗氏诊断公司，批号52478501)；中/长链脂肪乳注射液(费森尤斯卡比华瑞制药公司，批号80PL062)，氯化钠注射液(广东怡翔制药公司，批号210106501)。

1.3检测项目 实验检测项目有体液白细胞计数(WBC-BF)、多个核细胞绝对计数(PMN)、单个核细胞绝对计数(MN)、中性粒细胞绝对计数(NEU)、中性粒细胞百分比(Neu)、淋巴细胞绝对计数(LYN)、淋巴细胞百分比(Lyn)、单核细胞绝对计数(MON)、单核细胞百分比(Mon)、嗜酸性粒细胞绝对计数(EOS)、嗜酸性粒细胞百分比(Eos)、高荧光强度细胞绝对计数(HF)、高荧光强度细胞百分比(Hf)、体液红细胞计数(RBC-BF)。

1.4轻、中、重浊度模拟乳糜液的制备 用中/长链脂肪乳注射液与氯化钠注射液经多倍稀释后用Cobas8000生化分析仪检测TG，制备轻、中、重3种浊度的模拟乳糜液，经轻、中、重浊度乳糜液TG浓度分别为11.2 mmol/L、47.4 mmol/L、96.6 mmol/L。

1.5轻、中、重3种浊度乳糜标本的制备与检测 将每例浆膜腔积液标本与氯化钠注射液等体积(200 μL+200 μL)混合，充分混匀后及时上机检测，所得结果作为对照组数据。每例标本分别与上述配制好的不同浊度模拟乳糜液等体积(200 μL+200 μL)混合，模拟轻、中、重3种浊度的乳糜性积液标本，充分混匀后及时上机检测，所得结果作为轻、中、重度脂浊实验组数据(等体积混合后，3组实验标本的TG最终浓度分别为5.6 mmol/L、23.7 mmol/L、48.3 mmol/L)。

1.6有核细胞DIFF散点图的比较分析 选取其中1例标本的对照组及轻、中、重度乳糜组的DIFF散点图作为分析对象，将散点图分A、B、C三区，其中A区为血影区，代表细胞碎片或小颗粒成分等背景成分；B区代表细胞复杂度较高的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等多个核细胞(PMN区域)；C区代表细胞复杂度较低但核酸含量较高的淋巴细胞、单核细胞及异常组织细胞等单个核细胞(MN区域)。通过图形的对比观察，比较各组散点图间的A、B、C区的粒子数及坐标轴检测参数的差异。

1.7统计学分析 采用SPSS 19.0软件进行数据分析，偏态分布资料采用M(P25，P75)表示；轻、中、重度脂浊实验组与对照组间分别进行配对样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1乳糜状态对浆膜腔积液自动化检测结果的影响 结果见表1。与对照组结果比较，在轻度乳糜状态下，检测结果差异有统计学意义的项目有PMN、EOS、Eos、Hf与RBC-BF；中度乳糜状态下，检测结果差异有统计学意义的项目有WBC-BF、PMN、EOS、Eos与RBC-BF；而重度乳糜状态下，检测结果差异有统计学意义，分别有WBC-BF、PMN、NEU、Neu、LYN、Lyn、MON、EOS、Eos与RBC-BF。

表1 不同浊度乳糜实验组的统计数据

2.2有核细胞计数DIFF散点图的影响 选取1例实验标本的对照组及轻、中、重度乳糜组有核细胞计数的DIFF散点图(该标本的WBC-BF结果为90×106/L)。通过比较分析发现，随着乳糜程度的递增，A区的粒子数明显增多且杂乱；B区与C区细胞粒子数在轻、中度乳糜实验组增多不明显，然而在重度乳糜状态下粒子数则明显增多；C区细胞粒子的侧向散射光强度逐渐增强，导致C区细胞粒子在横坐标轴整体逐渐向右倾移，这种情况在重度乳糜状态下右移表现最为明显。

3 讨论

浆膜腔积液是较常见且重要的临床体液标本，此类标本的仪器自动化检测能够很好地弥补了人工镜检法重复性差、精密度低、耗时长等不足，因此浆膜腔积液标本仪器自动化检测应用越来越广泛且逐渐往标准化方向发展[4-5]。在实际工作中，乳糜状浆膜腔积液标本并不少见，特别是在心胸外科术后患者中发生率更高[6]。乳糜会对仪器产生一些干扰，可以出现细胞分类散点图异常等情况，导致检测结果不准确，影响临床对患者的诊疗及预后评估等。

通过表1数据发现，与对照组比较，实验组随着乳糜浊度增加，差异有统计学意义的项目也增加，而在重度乳糜下受影响的项目最多，分别有WBC-BF、PMN、NEU、Neu、LYN、Lyn、MON、EOS、Eos、RBC-BF。不同检测项目受影响的程度不一，PMN、EOS、Eos与RBC-BF在轻、中、重度乳糜下，与对照组差异均有统计学意义，表明抗乳糜干扰能力较差；WBC-BF在中、重度乳糜下，与对照组差异有统计学意义，表明抗乳糜干扰能力一般；而NEU、Neu、LYN、Lyn、MON只在重度乳糜下，与对照组差异有统计学意义，表明抗乳糜干扰能力较强。

DIFF散点图中横坐标轴(SS轴)为侧向散射光，代表侧向散射光信号；纵坐标轴(FL轴)为侧向荧光，反映侧向荧光信号。由于乳糜微粒是不具备核酸成分的带有一定体积的微小粒子，具有强烈的光散射作用且不易被相关检测试剂溶解，所以导致仪器能检测到大量非特异的异常散射光信号。这些异常的散射光信号以弱荧光、强散射光的信号方式呈连续性分布在DIFF散点图A区中。通过比较发现，由于受到A区的乳糜粒子的干扰和C区粒子分布的整体趋势性右移的影响，B区检测粒子数会随着乳糜浊度的增加而增多，从而影响仪器对B区多个核细胞计数(PMN，主要为中性粒细胞与嗜酸性粒细胞)检测的准确性。此外，随着乳糜程度的增加，C区细胞分布逐渐右移，使C区部分细胞粒子被错分至B区，导致部分淋巴细胞被错分为单核细胞或中性粒细胞而假性降低，这种现象在重度乳糜散点图表现最为明显。但乳糜微粒对纵坐标轴的荧光强度信号影响不大，所以在高荧光强度区域，对HF并未造成明显的影响。

综上所述，乳糜状浆膜腔积液标本并不适宜用血细胞分析仪进行自动化检测，建议采用人工镜检的方式进行细胞计数与分类。此外，需要说明的是，本研究以外源性脂肪乳制品来模拟临床乳糜标本，并不能完全代替真实的乳糜状态标本，只能起到评价仪器方法学影响因素的作用。虽然这种评价方法存在一定的局限性，但实验的预期结论与临床实际情况相符，期待今后开展多中心的研究以进一步评估。