lncRNA MALAT1在头颈部鳞状细胞癌中的表达和化疗对其影响分析

徐颖 肖红梅

[摘要] 目的 探讨lncRNA MALAT1在头颈部鳞状细胞癌中的表达和化疗对其影响。 方法 收集2018年6月至2020年12月遵义医科大学第二附属医院确诊的头颈部鳞状细胞癌患者45例及同期化疗患者30例。分析肿瘤组织中lncRNA MALAT1的表达及在不同临床病理特征的表达情况，并分析化疗对lncRNA MALAT表达的影响。 结果 lncRNA MALAT1在头颈部鳞状细胞癌肿瘤组织中表达显著增加（P<0.05），且肿瘤>2 cm、TNM Ⅲ～Ⅳ期、组织分化差以及淋巴结转移患者中的lncRNA MALAT表达增加（P<0.05）。化疗后可显著降低lncRNA MALAT1在头颈部鳞状细胞癌肿瘤组织中表达（P<0.05）。结论 lncRNA MALAT1在头颈部鳞状细胞癌肿瘤组织中表达显著增加，且在不同临床病理特征中表达不同，预示较差临床预后;化疗可降低其表达。

[关键词] lncRNA;MALAT1;头颈部鳞状细胞癌;化疗;TNM分期

[中图分类号] R739.91          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2022）09-0012-04

Expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma and analysis of the effect of chemotherapy on it

XU Ying   XIAO Hongmei

Department of Head and Neck Oncology， the Second Affiliated Hospital of Zunyi Medical University， Zunyi   563000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma and the effect of chemotherapy on it. Methods A total of 45 patients with head and neck squamous cell carcinoma diagnosed in the Second Affiliated Hospital of Zunyi Medical University and 30 patients treated with chemotherapy from June 2018 to December 2020 were collected. The expression of lncRNA MALAT1 in tumor tissue and different clinicopathological characteristics as well as the effect of chemotherapy on the expression of lncRNA MALAT was analyzed. Results The expression of lncRNA MALAT1 significantly increased in head and neck squamous cell carcinoma tumor tissue （P<0.05）， and the tumor increased in volume， with TNM staging Ⅲ-Ⅳ， poor tissue differentiation. The expression of lncRNA MALAT in patients with lymph node metastasis increased （P<0.05）. The expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma significantly decreased after chemotherapy （P<0.05）. Conclusion The expression of lncRNA MALAT1 significantly increases in head and neck squamous cell carcinoma tumor tissues， and varies in different clinicopathological features， which predicts poor clinical prognosis. Chemotherapy is able to reduce the expression.

[Key words] lncRNA; MALAT1; Head and neck squamous cell carcinoma; Chemotherapy; TNM staging

頭颈部鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC）是头颈部表皮最常见的恶性肿瘤，每年报告超过60万例新病例[1]。HNSCC是异质性、实体性和恶性肿瘤，患者总体生存率较低，主要原因是诊断晚、治疗反应率低、复发和转移率高[2-3]。因此，阐明与HNSCC相关的遗传和表观遗传分子改变对于改善HNSCC患者的诊断、适当治疗和预后至关重要。各种研究表明，HNSCC的发生和发展与长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNAs）密切相关[4]。lncRNAs（>200 nt长度，无蛋白质编码功能）通过在转录、转录后和翻译后水平参与基因调控，作为关键调节因子，并影响许多生物过程[5-6]。lncRNAs在HNSCC的发展中具有复杂和广泛的功能，包括与肿瘤生长、复发和转移相关的功能，因为其在HNSCC中的不规则和特异性表达模式[7]。尽管lncRNAs与HNSCC之间的关系尚不清楚，但有报道称一些lncRNAs异常表达，并有助于HNSCC的发生和发展。lncRNA MALAT1在多种肿瘤中表达异常[8]。本研究拟分析lncRNA MALAT1在头颈部鳞状细胞中的表达和化疗对其影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年6月至2020年12月遵义医科大学第二附属医院确诊头颈部鳞状细胞癌患者45例。根据2002年国际癌症控制联盟（UICC）制订的标准进行分级。在手术过程中收集肿瘤组织和正常邻近组织（距肿瘤边缘>1 cm），其中正常邻近组织作为癌旁组。将切除的组织立即保存在手术室中的冰箱（-20℃）。纳入标准：①经病理检查为头颈部鳞状细胞癌者;②首次接受手术治疗者;③术前未接受放疗或化疗等抗肿瘤治疗;④临床资料完整。排除标准：①临床和病理信息，如性别、年龄、肿瘤分期、治疗效果和复发相关的信息不完整者;②同时合并其他类型肿瘤者;③既往接受手术、放疗或化疗治疗者;④入院时患者合并其他疾病，如感染性疾病、严重糖尿病等器官衰竭性疾病、全身免疫性疾病以及恶性肿瘤并发症等。本研究纳入的45例患者作为未化疗组，另外选取30例术前接受化疗的头颈部鳞状细胞癌患者作为化疗组进行比较研究。本研究获得医院医学伦理委员会的批准，患者或其家属均知情同意。

1.2 头颈部鳞状细胞癌患者资料收集

分别记录头颈部鳞状细胞癌患者的性别、年龄、病程等一般资料以及肿瘤大小、组织分化、TNM分期、有无淋巴结转移的临床病理特征资料。见表1。

1.3 Real time PCR分析

按照Trizol试剂盒说明从组织中提取总RNA，并在紫外分光光度计上检查其浓度和纯度。通过第一链cDNA逆转录试剂盒将RNA反向转录成cDNA。RT-PCR试剂盒用于扩增cDNA，95℃持续5 min，95℃ 10 s，40个循环;60℃循环45 s。应用的PCR反应系统（20 μl）：2.0 μl cDNA、0.4 μl上游引物（10 μmol/L）、0.4 μl下游引物（10 μmol/L）、10.0 μl SYBR和7.2 μl双蒸水。MALAT-1（正义链：5′-CAGACCACAGTTACAG-3′，反义链：5′-AGACACATCCAATGCTTCA-3′）和GAPDH（正义链：5′-TGACACACACAGGCCACA-3′，反义链：5′-CACCCTGTGCTAGCAAA-3′）引物由上海基因有限公司提供。以GAPDH作为内参，通过2-ΔΔCT法计算MALAT-1的表达水平。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MALAT1在头颈部鳞状细胞癌中的表达

Real time PCR分析lncRNA MALAT1在头颈部鳞状细胞癌肿瘤组织中表达情况，结果显示MALAT1表达显著增加（P<0.05），提示其可能在头颈部鳞状细胞癌发挥促癌因子作用。见图1。

2.2 头颈部鳞状细胞癌不同临床特征患者中MALAT1表达情况

根据MALAT1表达情况，将头颈部鳞状细胞癌患者进一步分为MALAT1高表达组（>MALAT1表达中值，n=31）和MALAT1低表达组（≤MALAT1表达中值，n=14）。MALAT1在不同肿瘤大小（≤2 cm、>2 cm）、有无淋巴结转移、不同组织分化情况（良好、差）以及不同TNM分期（Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ）的表达比较，差异有统计学意义（P<0.05），肿瘤>2 cm、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、组织分化差以及淋巴结转移患者中lncRNA MALAT表达增加。见表2。

2.3 化疗对头颈部鳞状细胞癌中MALAT1表达的影响

化疗组头颈部鳞状细胞癌中MALAT1表达显著降低，与未接受化疗的患者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3 讨论

大量研究表明，lncRNA的异常表达与多种癌症的发生发展密切相关。此外，lncRNA被视为癌症诊断和预后的重要标志物，也是癌症治疗的治疗靶点[7]。MA- LAT1在哺乳动物中高度保守，在正常人体组织和细胞中广泛表达，并具有明显的组织特异性和时间表达模式，具有很强的组织特异性，其表达水平和功能在不同细胞类型之间可能存在很大差异[8]。MALAT1最初在人类非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中被证实大量存在，其与肺癌转移呈正相关、与预后呈负相关。随后发现，MALAT1在多种肿瘤组织中的表达显著高于正常组织，且与肿瘤转移相关[9-10]。

MALAT1可以调节多种恶性肿瘤的发生和发展，也在转录、细胞周期调节、表观遗传学和肿瘤转移中发挥作用[11]。近年来，关于MALAT1对多种肿瘤的恶性进展作用的研究越来越多，凸显出MALAT1对肿瘤诊断、预后评估和靶向治疗的重要性。头颈部鳞状细胞癌是世界上排名居前的主要癌症类型，由于区域淋巴结转移、随后复发的趋势和对治疗的抵抗，导致头颈部鳞状细胞癌死亡率很高[12]。多项研究表明，不同非编码RNA的去调控对HNSCC病理学有重要影响，其可以作为个体化药物中的特异性生物标记物以改善治疗[13]。因此，MALAT1具有广泛而重要的临床应用前景，值得进一步研究。但是MALAT1在头颈部鳞状细胞癌中的表达和临床意义尚未阐明。本研究证实MALAT1在头颈部鳞状细胞癌中表达增加，且MALAT1的高表达与头颈部鳞状细胞癌患者临床特征显著相关，包括肿瘤大小（>2 cm）、组织分化差，晚期TNM分期（Ⅲ～Ⅳ）和淋巴结转移，提示其可能作为癌基因发挥作用，可能通过调节头颈部鳞状细胞癌的生长、凋亡、侵袭和转移，并与不良预后相关。因此，MALAT1有望成为早期肿瘤诊断和预后的标志物。

本研究进一步研究化疗对MALAT1表达的影响，结果证实在接受紫杉醇和顺铂等化疗药物治疗后，头颈部鳞状细胞癌患者中发现MALAT1表达下降，提示MALAT1与头颈部鳞状细胞癌药物敏感性相关。MALAT1是研究较为广泛的与多种人类癌症相关的lncRNAs之一[14]。相关研究认为，MALAT1失活可抑制基因表达调节因子，这些调节因子可改变肿瘤的特征，阻断MALAT1表达可抑制肿瘤的进展[15]。lncRNA MAL- AT1可通过促进肿瘤细胞转移和抑制凋亡触发肿瘤对化疗药物的耐药性。MALAT1基因敲除通过靶向miRNA抑制肿瘤的恶性生物行为，MALAT1有望成为头颈部鳞状细胞癌新的治疗靶点，并有利于为化疗的疗效和预后进行评估[16]。目前本研究的患者例数收集较少，需扩大样本量，并深入補充体外实验进行相关作用机制研究，从而支撑MALAT1在头颈部鳞状细胞癌的靶点作用的研究。

綜上所述，lncRNA MALAT1在头颈部鳞状细胞癌肿瘤组织中表达显著增加，且与临床病理特征相关，化疗可降低其表达，为头颈部鳞状细胞癌临床治疗和机制研究提供相关思路。

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（收稿日期：2021-12-01）