前列腺癌患者癌组织中miR- 183- 5p表达的意义及其诊断价值分析

吴继宏，梁泰生，高宏君，罗向东，吴刚

(广西中医药大学附属瑞康医院 泌尿外科，广西 南宁 530000)

前列腺癌(prostate cancer，PCa)在年龄≥50岁的男性中较常见，随年龄增长，其患病风险相应增高。该病发病危险因素包括不良饮食习惯、遗传史、年龄等，是导致男性肿瘤患者死亡的重要因素之一[1- 2]。研究表明PCa具有无限生长倾向以及转移风险高的特点，但该病早期缺乏典型症状，患者不易察觉，当出现明显症状时，通常已进展至中晚期，肿瘤生长可累及周围组织，或伴有转移，错过最佳干预时机，预后较差[3]。因此，尽早对PCa进行诊断是改善预后的关键。由于该病的发病机制比较复杂，涉及一系列基因、蛋白等的参与，临床仍需探索相关的基因、蛋白作为肿瘤标志物，为PCa诊疗提供新靶点。目前，已有大量研究提示微小核糖核酸(microRNA，miR)与细胞分化、代谢、增殖等过程有关，在PCa、肝癌、肺癌等恶性肿瘤中具有调节功能[4]。朱龙萍等[5]指出miR- 183- 5p在食管鳞状癌组织中呈高表达，其表达可能与淋巴结转移有关。还有研究发现子宫内膜癌组织中可见miR- 183- 5p表达下调，具有抗肿瘤活性[6]。这表明miR- 183- 5p表达与肿瘤发生有关，且在不同肿瘤中的表达存在特异性。Larne等[7]研究则提示miR- 183可能通过调节前列腺特异性抗原(PSA)水平影响PCa的进展。miR- 183- 5p是从miR- 183前体的5′端臂加工而来，间接推测miR- 183- 5p异常表达可能也会影响PCa患者的病情。基于此，本研究探讨PCa患者癌组织中miR- 183- 5p的表达水平及其诊断价值，以期协助该病的早期诊疗。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2018年9月至2021年5月收治的PCa患者117例作为PCa组，同期收治的良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)患者65例为BPH组。纳入标准：(1) PCa组：病理诊断为PCa的首诊患者；就诊时无急性或慢性炎症者；术前未行新辅助治疗者；自愿签署同意书者。(2) BPH组：临床诊断为BPH而行电切手术治疗者；就诊时无急性或慢性炎症者；自愿签署同意书者。排除标准：患严重心脑血管疾病(例如急性心肌梗死、脑卒中等)者；患其他部位的原发性肿瘤者；因PCa复发就诊者；既往有血液系统疾病、自身免疫性疾病、传染性病史者；急性尿潴留者。研究方案获医院伦理委员会批准，两组患者年龄、体质指数、前列腺体积、高血压史、糖尿病史等比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组患者基线资料比较

1.2 检测方法

通过手术获取组织样本，利用实时逆转录聚合酶链反应(quantitative real- time reverse transcription polymerase chain reaction，qRT- PCR)测定组织中miR- 183- 5p表达水平。主要仪器为荧光定量PCR仪(江苏迅睿生物技术有限公司，MA- 688型)、电热恒温水槽(上海森信实验仪器有限公司，DK- 8D型)、离心机(湘仪离知机仪器有限公司，YXJ- 2型)。主要试剂为乙醇、异丙醇、氯仿、逆转录试剂、PCR检测试剂，购自美国GIBCO公司。首先利用Trizol试剂对组织总RNA进行提取，取组织样本0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm，置入研钵内，并加液氮，研磨，加裂解液，待裂解充分后移至EP管内，振荡，促使组织团块消失。加入0.2 ml氯仿，4 ℃下离心15 min(12 000 r·min-1)，待离心完毕，可见3层水相，取上层无色水相置于EP管内，加入0.6 ml异丙醇，室温下反应10 min。4 ℃下离心10 min(12 000 r·min-1)，对总RNA管底沉淀物进行观察，弃上清液。加入1.0 ml 75%乙醇，4 ℃下离心5 min(12 000 r·min-1)，弃上清液。再次4 ℃下离心10 min(12 000 r·min-1)，对总RNA管底沉淀物进行观察，弃上清液。风干3 min，加入DNA酶Ⅰ 30 μl，促进溶解、混匀。检测RNA样本浓度与纯度，A260 nm/A280 nm值范围需在1.8～2.1之间，确定样本符合要求后，存至-80 ℃温度下。采用逆转录试剂对样本进行逆转录，合成cDNA，行qRT- PCR扩增，并采用荧光定量PCR仪进行检测。PCR反应条件：94 ℃ 3 min预变性；94 ℃ 30 s变性，50 ℃ 30 s退火，72 ℃ 60 s延伸，45个循环。引物序列：(1) miR- 183- 5p上、下游序列分别为5′- GGTTTCATCCAGGATCGAGCAGG- 3′、5′- ACAAAGATGGTCACGGTCTGCC- 3′；(2) 内参引物U6上、下游序列分别为5′- CTCGCTTCGGCAGCACA- 3′、5′- AACGCTTCACGAATTTGCGT- 3′。采用2-ΔΔCt法表示miR- 183- 5p相对表达量。

1.3 统计学处理

采用SPSS 20.0软件行数据分析，分别以常数(百分比)、均数±标准差表示计数、计量资料，分别行χ2、独立样本t检验。绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线分析miR- 183- 5p诊断PCa的曲线下面积(area under the curve，AUC)，利用Kappa检验分析miR- 183- 5p与病理诊断PCa的一致性，Kappa值范围-1～1，越接近-1或1表明一致性越高，通常在0～1间，该值范围0.1～0.20、0.21～0.40、0.41～0.60、0.61～0.80、≥0.81分别表示一致性极低、轻度一致性、中度一致性、高度一致性、完全一致。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组样本组织内miR- 183- 5p表达比较

miR- 183- 5p表达量PCa组为3.96±1.03，BPH组为1.86±0.76，PCa组表达量高于BPH组(t=14.397，P<0.001)。根据PCa组miR- 183- 5p表达量均值将PCa组分成高表达组(表达量>3.96，65例)与低表达组(表达量≤3.96， 52例)。

2.2 miR- 183- 5p表达与PCa病理特征的关系

miR- 183- 5p高表达组血清PSA水平≥20 ng·ml-1、Gleason评分≥7分、肿瘤低分化、肿瘤分期Ⅲ期、肿瘤直径≥3 cm、血管间隙浸润、肿瘤转移者占比均高于miR- 183- 5p低表达组(P<0.05)，见表2。

表2 miR- 183- 5p表达与PCa病理特征的关系 例

2.3 miR- 183- 5p表达量对PCa的诊断价值分析

miR- 183- 5p表达量诊断PCa的AUC为0.898(标准误=0.024，P<0.001，95%CI为0.851～0.945)，最佳界值为2.490，敏感度为86.32%，特异度为86.15%，见图1。

图1 miR- 183- 5p表达量诊断PCa的ROC曲线

2.4 miR- 183- 5p表达量与病理诊断PCa的一致性分析

纳入的182例研究对象中，病理诊断为PCa 117例，BPH 65例，而miR- 183- 5p诊断提示PCa 110例，BPH 72例。以病理诊断为金标准，经miR- 183- 5p检出的110例PCa患者中有101例与病理诊断相符，72例BPH患者中有56例与病理诊断相符。miR- 183- 5p表达水平诊断PCa的敏感度为86.32%(101/117)，特异度为86.15%(56/65)，准确率为86.26%(157/182)，阳性预测值为91.82%(101/110)，阴性预测值为77.78%(56/72)。Kappa检验提示miR- 183- 5p表达量与病理诊断PCa具有高度一致性(Kappa值=0.708，P<0.001)。

3 讨 论

PCa是中老年男性的常见病，近年来我国PCa患病率逐年增高。由于早期症状比较隐匿，导致多数患者就诊时病情已进展得比较严重，常伴有骨转移，因而治疗难度与死亡率较高[8]。研究表明，miRNA能与靶基因3′- URT结合，或者对靶基因miRNA进行降解，影响癌细胞的凋亡及增殖，发挥抑癌或促癌作用，miRNA对肿瘤细胞的调节已成为临床研究热门课题[9]。肿瘤的发生与进展过程涉及机制复杂，在肿瘤进展期间可见相关miRNA表达水平增高或下降，促进或抑制癌细胞分化、增殖与凋亡，通过分析相关miRNA在PCa组织中的表达，能为PCa的早期诊断提供依据。

miR- 183- 5p具有促癌作用，它能通过对α- 1- B糖蛋白进行靶向调控，促进癌细胞增殖与迁移[10]。另有研究指出miR- 183- 5p表达失调与PCa发生有关[11]。本研究发现与BPH组织相比，PCa组织中miR- 183- 5p表达量增高，提示miR- 183- 5p在PCa中发挥了促癌作用。miR- 183- 5p是miR- 183基因簇的重要成员，而miR- 183在肿瘤中可见异常表达[12]。miR- 183- 5p作为miR- 183基因簇中的一员，也与肿瘤疾病存在密切关系，它在膀胱癌组织中可见表达上调，其可能通过调节某些相关信号通路(例如上皮间质转化通路)，促进膀胱癌进展[13]。miR- 183- 5p可能靶向程序性细胞死亡因子4抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤进展[14]。外泌体介导的miR- 183- 5p能够从肿瘤细胞移至巨噬细胞，可对肿瘤相关巨噬细胞表型进行调节，加速肿瘤发展与转移，这可能是miR- 183- 5p的促癌机制[15]。

PCa的病理特征比较复杂，在肿瘤进展过程中，相关癌基因的表达可能受不同病理特征影响，通过明确其表达与病理特征的关系，有利于进一步明确肿瘤进展机制[16]。本研究结果显示，癌组织中miR- 183- 5p表达与PCa患者的血清PSA水平、Gleason评分、肿瘤分化程度、肿瘤分期、肿瘤直径、血管间隙浸润、肿瘤转移相关。PSA是典型的PCa标志物，对这类肿瘤筛查有一定价值，其浓度与前列腺细胞数目存在关联，当前列腺组织受损后可见血PSA水平增高，当PSA水平超过20 ng·ml-1时，提示极有可能为PCa[17]。但有研究认为单纯采用血PSA水平诊断PCa时的特异度非常低[18]。肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤直径、有无转移与浸润是评估肿瘤进展程度的常见病理特征，肿瘤进展越严重，临床分期越高，分化程度越低，生长速度越快，转移与浸润风险越大。癌组织中miR- 183- 5p表达与上述病理特征有关，原因可能为miR- 183- 5p在PCa中有促癌作用，其表达增高能促进癌细胞增殖，致病灶恶性程度增强，加速病情发展。本研究结果显示，癌组织中miR- 183- 5p表达对PCa有一定诊断价值，与病理诊断具有较高一致性。Pudova等[19]发现，miR- 183- 5p与PCa淋巴结播散有关，其参与了PCa进展。本研究则更深入阐述了癌组织中miR- 183- 5p表达对PCa的诊断价值，证实其与病理诊断一致性高，临床有望将其作为预测或诊断PCa的靶标。

综上所述，PCa组织中miR- 183- 5p表达增高，其表达变化与PCa患者多种病理特征有关，对PCa诊断有一定价值。此外，本研究也存在不足，仅分析了miR- 183- 5p在PCa组织中的表达水平，尚未进行体外实验明确miR- 183- 5p的靶基因，日后有待对此深入探讨。