2021年春季湘西州部分地区4种猪腹泻相关病毒流行病学调查与分析

王 成，王 锐，孙孟佳，黄秀菊，雷志坚，王 鹏，秦世新，向成志

（1.湘西自治州畜牧水产事务中心，湖南 吉首 416000；2.保靖县畜牧水产事务中心，湖南湘西土家族苗族自治州 416500）

腹泻在生猪养殖过程中十分常见，该病可导致生猪生长缓慢，尤其对哺乳仔猪和断奶仔猪危害巨大，可导致其严重脱水、呕吐等，并伴随高死亡率，给养猪业造成巨大的经济损失[1]。猪腹泻的病因复杂，其中包括寄生虫感染、饲料毒素中毒、病毒感染和环境因素等，而引起猪腹泻的肠道病毒种类也很多，如猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TEGV）、猪轮状病毒（PoRV）和猪德塔冠状病毒（PDCoV）等[2-3]。这4种肠道病毒在猪场十分常见，且猪群感染这些病毒后临床症状和病理变化基本一致，根据传统的临床诊断无法对致病原进行确诊，需要更加精确、高效的实验室诊断方法。

我国不同地区导致猪腹泻的肠道病毒种类和流行情况存在较大差异，其中贵阳市部分地区猪腹泻的肠道病毒为PEDV（44.2%，129/292），PoRV和TGEV阳性率仅为8.6%（25/292）和3.4%（10/292）[4]；天津地区猪腹泻肠道病毒主要是PEDV（51.28%，779/1 519）和PDCoV（27.45%，417/1 519），而PoRV和TGEV检出率仅分别为5.33%（81/1 519）和6.78%（103/1 519）[5]。笔者及团队调查结果发现，2020年湘西州部分地区腹泻样品中PoRV检出率最高，为36.9%，PEDV检出率稍低，为14.3%，但未检出TGEV，说明PEDV和PoRV广泛流行于该地区[6]。鉴于此，本研究旨在进一步调查湘西州4种常见病毒性腹泻病原感染情况，以期为该地区猪腹泻病的防治提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2021年3—5月，从湘西州7个县市（吉首市、泸溪县、凤凰县、花垣县、保靖县、永顺县和龙山县）共20个正在发生腹泻猪场随机采集腹泻粪便样品303份。每份样品约20 g，装进灭菌封口袋后标记，低温送至湘西自治州畜牧水产中心，保存于-80 ℃，待检。

1.2 主要试剂

DNA/RNA基因组提取试剂盒为天隆科技有限公司产品，腹泻相关肠道病毒（PEDV、TGEV和PoRV）三通道qPCR检测试剂盒为达安基因科技有限公司产品；PDCoV qPCR检测试剂盒为莱普生生物科技有限公司产品。

1.3 方法

取0.5 g粪便样品与适量无菌蒸馏水混合置于灭菌离心管内，反复冻融后高速离心，取上清液用于DNA/RNA基因组提取，其操作步骤参考试剂盒说明进行。以提取RNA基因组为模板，使用相应的试剂盒对样品进行检测。每次检测均设置阳性和阴性对照，根据样品对应CT值确定检测结果。

2 结果

2.1 湘西州猪腹泻猪群PoRV检测结果

本研究于2021年3—5月采用qPCR法对湘西部分地区303份猪腹泻样品中4种常见肠道病毒进行检测，结果发现所有样品中均未检测到PEDV、TGEV和PDCoV核酸；303份样品中有76份样品为PoRV核酸阳性，平均检出率为25.08%，且20个被调查的猪场PoRV场阳性率达55.0%。进一步分析发现PoRV广泛流行于被调查的7个县市，其中保靖县场阳性率最高，达100.0%，且不同地区腹泻样品PoRV检出率为18.52%～40.0%（表1）。

表1 湘西州猪腹泻猪群PoRV检测结果

2.2 不同发育阶段腹泻猪群PoRV检测结果

为分析不同发育阶段腹泻猪群PoRV感染情况是否存在差异，本研究从湘西州采集不同发育阶段猪群腹泻样品以检测PoRV感染情况。结果如表2所示，PoRV对不同发育阶段猪群均易感，但哺乳仔猪来源腹泻样品PoRV检出率最高，为49.09%（27/55），其次为保育猪和后备猪，分别为26.92%（14/52）和26.09%（12/46），而种公猪和经产母猪检出率相对最低，分别为9.43%（5/53）和16.67%（7/42）。

表2 不同发育阶段腹泻猪群PoRV检测结果

2.3 不同发育阶段猪群粪便PoRV病毒载量差异探究

为分析不同发育阶段腹泻猪群粪便中PoRV病毒载量差异，我们选择了1个不同阶段猪群均为PoRV阳性的猪场，检测粪便PoRV核酸CT值差异。结果见表3，在该PoRV阳性猪场中，哺乳仔猪粪便病毒载量对应CT值最低（19.2～22.3），而肥育猪、后备猪、经产母猪和种公猪对应CT值相对较高（28.4～33.5）。说明感染PoRV仔猪粪便病毒载量最高，但其它成年猪感染PoRV后仍可对外排毒。

表3 不同发育阶段猪群粪便PoRV病毒载量CT值统计结果

3 讨论

本研究旨在对湘西州部分地区猪腹泻样品肠道病毒感染情况进行持续性监测，结果表明2021年春季PoRV是该地区猪腹泻的主要病原，这与前期研究基本一致[6]。有趣的是，我们在2021年春季来源腹泻样品中仅检测到PoRV核酸，平均阳性率为25.08%，但未发现PEDV、TGEV或PDCoV阳性样品，而前期研究发现2020年湘西地区腹泻样品PEDV和PoRV检出率分别为14.3%和36.9%[6]，这可能与采集样品来源、数量等有关，同时也有可能是猪场提高了饲养管理水平。进一步分析发现，被调查的7个地区均存在PoRV阳性猪场，说明该病广泛流行于湘西各地区，且各地区腹泻猪场来源样品检出率为18.52%～40.0%，提示PoRV是导致该地区春季猪群腹泻的主要病因，若该地区猪场发生疑似仔猪腹泻案例，猪场应及时将样品送至相关检测中心进行病原诊断，而不是在未明确病原情况下盲目对猪群免疫接种疫苗或药物治疗，以免错过疾病防控的最佳时间。

有研究表明，PoRV可感染不同发育阶段猪群，但主要导致低龄仔猪出现严重的临床症状，而成年猪群一般为隐性感染[7]。我们的研究也发现不同发育阶段腹泻猪群PoRV感染率存在差异，其中以哺乳仔猪最高，这与前期研究基本一致[6]。值得注意的是，成年猪感染PoRV后多为隐性感染，但我们采集的样品均为腹泻猪粪便样品，这说明这些成年猪腹泻可能不是由于PoRV（或其它肠道病毒）感染引起，可能是其它原因，这需要进一步调查。此外，我们也发现PoRV阳性猪群中仔猪和保育猪粪便病毒载量较成年猪高，但这也提示成年猪感染PoRV后可能处于隐性感染，但其仍然可对外排毒，因此对于PoRV的防控不能仅防控仔猪和保育猪，而应该关注整个猪场猪群。