艾滋病患者结核杆菌感染与其免疫功能及HIV载量的关系

王新霞 吴晓美 童涌

[摘要] 目的 探討艾滋病（AIDS）患者结核杆菌感染与其免疫功能及艾滋病病毒（HIV）载量的关系。方法 选取2018年6月至2020年1月浙江大学医学院附属湖州医院 湖州市中心医院感染科收治的78例AIDS患者作为研究对象，所有患者入院后均完成首段尿、静脉血等样本采集，采用培养法和PCR法检测结核杆菌。根据患者是否发生感染分为观察组（n=38）和对照组（n=40）。采用流式细胞仪测定两组CD4+免疫功能水平;采用病毒载量分析仪测定两组HIV载量;对AIDS结核杆菌感染与患者免疫功能及HIV载量进行相关性分析，分析AIDS患者的结核杆菌感染类型及构成比、两组AIDS患者结核杆菌感染下CD4+T细胞水平、细胞因子水平、HIV载量，并完成结核杆菌感染与其免疫功能及HIV载量关系分析。结果 38例伴有结核杆菌感染AIDS患者，排在前两位的分别为肺结核和颈淋巴结核，分别占36.84%和28.95%;观察组结核杆菌感染患者CD4+T细胞中<50 mm3、50～199 mm3病例数高于对照组非感染者（P<0.05）;200～349 mm3、≥350 mm3病例数低于对照组非感染者（P<0.05）;观察组HIV载量中<1000 copy/ml、1000～4999 copy/ml病例数低于对照组（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例数高于对照组（P<0.001）;相关性分析结果表明，AIDS患者结核杆菌感染率与患者免疫功能CD4+T水平呈负相关（P<0.05）;与HIV载量呈正相关（P<0.05）。结论 结核杆菌感染能影响AIDS患者免疫功能，且与HIV载量存在相关性，积极采取有效的措施能提高机体免疫，对降低结核杆菌感染率具有重要的意义。

[关键词] 艾滋病;结核杆菌感染;免疫功能;艾滋病病毒;相关性分析

[中图分类号] R512.9          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2022）06-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between mycobacterium tuberculosis infection and the immune function and human immunodeficiency virus （HIV） load in patients with acquired immunodeficiency syndrome （AIDS）. Methods A total of 78 AIDS patients in the department of infectious diseases of Huzhou Hospital Affiliated to Zhejiang University School of Medicine， Huzhou Central Hospital from June 2018 to January 2020 were selected as the subjects. After admission， the first-void urine， venous blood sample and other samples were collected from all patients， and the mycobacterium tuberculosis was detected by culture method and polymerase chain reaction （PCR） method. The patients were divided into the observation group （n=38） and the control group （n=40） according to whether infection occurred or not. The levels of CD4+ immune function in both groups were measured by flow cytometer， and the HIV load in both groups was measured by viral load analyzer. Correlation analysis of AIDS Mycobacterium tuberculosis infection with immune function and HIV load in patients， and the type and composition ratio of mycobacterium tuberculosis infection in AIDS， the level of CD4+ T cells under mycobacterium tuberculosis infection in AIDS in both groups， the cytokine level， and HIV load were also analyzed. In addition， the analysis of the relationships between mycobacterium tuberculosis infection and the immune function and HIV load were completed. Results In 38 AIDS patients with mycobacterium tuberculosis infection， the top two were pulmonary tuberculosis and cervical lymphatic tuberculosis， accounting for 36.84% and 28.95%， respectively. The number of cases with CD4+ T-cell count <50 mm3 and 50-199 mm3 in patients with mycobacterium tuberculosis infection in the observation group was higher than that in non-infected patients in the control group （P<0.05）. The number of cases with CD4+ T-cell count 200-349 mm3 and≥350 mm3 in patients with mycobacterium tuberculosis infection in the observation group was lower than that in non-infected patients in the control group （P<0.05）. The number of cases with HIV load < 1000 copy/ml and （1000-4999） copy/ml in the observation group was lower than that in the control group（P<0.05）. The number of cases with HIV load ≥10 000 copy/ml in the observation group was higher than that in the control group （P<0.05）. The results of SPSS Pearson correlation analysis showed that the rate of mycobacterium tuberculosis infection in AIDS was negatively correlated with the CD4+T level of patients immune function （P<0.05）， and positively correlated with HIV load （P<0.05）. Conclusion Mycobacterium tuberculosis infection in AIDS can affect the immune function of patients， and there is a correlation with HIV load， so it is important to actively take effective measures to improve the immunity of the body to reduce the rate of mycobacterium tuberculosis infection.

[Key words] Acquired immunodeficiency syndrome; Mycobacterium tuberculosis infection; Immune function; Human immunodeficiency virus; Correlation analysis

艾滋病（acquired immune deficiency syndrome， AIDS）是一種危害性相对较大的传染病，是因感染艾滋病病毒（human immunodeficiency virus， HIV）引起[1]。既往研究表明[2]，HIV属于是一种能攻击人体免疫系统的病毒，能将人体免疫系统中重要的CD4+淋巴细胞作为主要的攻击目标，从而引起人体免疫功能丧失。AIDS患者免疫水平相对较低，机会接触后感染率和发生率较高，且有感染、发病和康复过程缓慢特点[3]。同时，AIDS患者属于特殊的群体，容易对患者心理产生影响，增加临床防治难度。结核杆菌最早由德国细菌学家1882年首次分离获得，该菌能侵犯人体全身系统，但是亦引起肺结核多见[4-5]。对于AIDS患者由于机体免疫水平较低，当机体感染结核杆菌后，将会增加结核病发生率。国内学者研究表明[6]，AIDS患者多以免疫为基础发挥重要作用，能提高具有免疫活性的细胞因子，但临床对于结核杆菌感染与免疫功能、HIV载量的关系研究较少。因此，本研究以AIDS患者为对象，探讨AIDS结核杆菌感染与患者免疫功能及HIV载量的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年6月至2020年1月浙江大学医学院附属湖州医院 湖州市中心医院感染科AIDS患者78例作为研究对象，根据患者是否发生结核菌感染分为观察组和对照组。观察组38例，年龄19～62岁，平均（47.98±5.61）岁;病程1～6年，平均（3.06±0.43）年;性传播28例，血液传播6例，其他4例。同期住院的无结核杆菌感染的AIDS患者共40例作为非感染组，年龄20～63岁，平均（48.11±5.65）岁;病程1～7年，平均（3.11±0.44）年;性传播32例，血液传播6例，其他2例。纳入标准：①符合AIDS诊断标准者[7];②完成结核杆菌检测者;③完成HIV载量测定及T淋巴细胞水平测定者。排除标准：①合并精神异常、凝血功能异常或器质性疾病者;②合并其他感染性疾病、自身免疫系统疾病或异位妊娠者;③合并急性阑尾炎、卵巢黄体囊肿破裂或伴有弥漫性腹膜炎者。本研究获得医院伦理委员会批准，患者/家属均签署同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集  所有患者入院后均完成结核杆菌检测;同时，患者入院后次日早晨取空腹全血2～3 ml，并将其放置在EDTA-K3抗凝管中，4 h内送实验室，完成免疫功能、HIV载量测定[8]。

1.2.2 结核杆菌检测  ①涂片及培养法。对入组患者均完成清晨痰液的采集，标本获取后对痰液给予离心沉淀法进行处理干预。由于结核杆菌的密度高于痰液，给予高速离心沉淀法收集分枝杆菌样本，集菌后取一部分进行涂片;结核杆菌具有抗酸染色特点，进行涂片染色镜检，有助于提高镜检阳性率。涂片观察后剩余的结核杆菌用于分离培养，取2 ml的菌液放置在无菌试管中，分别按顺序加入酚红指示剂、氢氧化钠后摇晃均匀，15 min水浴，温度37℃，采用硫酸中和到中性后，离心、取沉淀物，接种培养[9];②PCR法检测。采用PCR法测定结核杆菌水平，具体方法如下：将标本从-20℃冰箱中取出，充分振荡混合标本，5 min离心，速度15 000 r/pm，血清分离后去除上清，并加入裂解液30 ul，充分振荡混匀后置入55℃下完成1 h水浴，再置入95℃下5 min保温。离心1 min，速度10 000 r/pm，获得PCR扩增用模板液，在提取膜与PCR反应过程中设置阳性与阴性对照。采用实时荧光定量PCR方法测定不同标本中结核杆菌水平，设置PCR参数：30℃ 10 min;42℃ 30 min;99℃ 5 min;5℃ 5 min，连续进行35个循环，72℃ 10 min延长，获得最终产物并放入1.5%琼脂凝胶电泳，β-actin为内对照（引物由海贝博生物公司提供）[10]。

1.2.3 免疫功能及HIV载量测定  ①免疫功能测定。取上述分离的血清标本，并将其放置在20～25℃冰箱中完成8 h检测，采用流式细胞仪测定两组CD4+免疫功能水平，仪器购自于美国BD Becton Dickinson公司，仪器型号：BD FACS Cali bur GH0156，试剂盒购自于武汉安特捷生物技术公司;根据测定结果（CD4+T细胞计数）分为<50 mm3、50～199 mm3、200～349 mm3、≥350 mm3[11];②HIV载量测定。取上述抽取的全血，在6 h内进行10 min离心，速度3 000 r/pm，血清分离后放置在-80℃冰箱中，备用。采用病毒载量分析仪测定两组HIV载量，仪器购自于德国西门子公司，型号：Versant 440 Molecular system公司。根据HIV载量测定结果分为<1000、1000～4999、5000～9999、≥10 000 copy/ml四个阶段[12]。

1.3 观察指标及评价标准

1.3.1 感染部位  记录AIDS患者结核杆菌感染部位。

1.3.2 CD4+T细胞水平  记录观察组与对照组结核杆菌感染下CD4+T细胞水平。

1.3.3 细胞因子水平  记录观察组与对照组细胞因子IFN-γ及IL-4、TNF-α、IL-6及IL-10水平。

1.3.4 HIV载量  记录观察组与对照组AIDS结核杆菌感染下HIV载量情况。

1.3.5 相关性分析  对AIDS患者结核杆菌感染与其免疫功能及HIV载量进行相关性分析。

1.4统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件对数据进行分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料采用[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AIDS结核杆菌感染部位及构成比

38例患者伴有结核杆菌感染，排在前两位的分别为肺结核和颈淋巴结核，分别占36.84%和28.95%，见图1。

2.2 AIDS患者结核杆菌感染下CD4+T细胞水平比较

观察组结核杆菌感染患者CD4+T细胞中<50 mm3、50～199 mm3病例数高于对照组非感染者（P<0.05）;200～349mm3、≥350 mm3病例数低于对照组非感染者（P<0.05）。见表1。

2.3 AIDS患者结核杆菌感染与细胞因子水平比较

观察组IFN-γ及IL-4高于对照组（P<0.05）;观察组TNF-α、IL-6及IL-10与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2.4 AIDS患者结核杆菌感染下HIV载量比较

观察组与对照组HIV载量中5000～9999 copy/ml病例数差异无统计意义（P>0.05）;观察组HIV载量中<1000 copy/ml、1000～4999 copy/ml病例数低于对照组（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例数高于对照组（P<0.001）。见表3。

2.5 AIDS患者结核杆菌感染与患者免疫功能及HIV载量相关性

相关性分析结果表明，AIDS患者结核杆菌感染率与其免疫功能CD4+T水平呈负相关（r=-0.784，P<0.001）;与HIV载量呈正相关（r=0.813，P<0.001）。

3 讨论

对于早期感染HIV患者具有较长的无症状潜伏期，且任何一种传染性病原体通过刺激免疫系统均能加剧病情的发展，可降低机体免疫水平，增加结核杆菌感染率。国内学者研究表明[13]，结核杆菌感染病程相对较长，且持续的感染能引起特异性体液免疫与细胞免疫。本研究中，38例结核杆菌感染的艾滋病患者中，排在前两位的分别为肺结核和颈淋巴结核，分别占36.84%和28.95%;观察组结核杆菌感染患者CD4+T细胞中<50 mm3、50～199 mm3病例数高于对照组非感染者（P<0.05）;200～349 mm3、≥350 mm3病例数低于对照组非感染者（P<0.05），说明AIDS患者结核杆菌感染后CD4+T细胞水平较低，能引起机体免疫功能下降，增加病原体感染率。国内学者研究表明，AIDS患者感染结核杆菌感染的原因相对较多，其机制亦相对复杂，可能与机体免疫水平低下等有关，再加上发病后营养水平较低等引起免疫逃逸。机体稳定性受到的影响因素较多，而免疫平衡是其重要保证。CD4+T细胞计数是判断HIV感染患者病情发展的重要指标，随着病情的不断发展，机体免疫系统将会受到破坏，进一步造成免疫功能下降，增加结核杆菌感染发生率。国内学者研究表明[14]，AIDS患者结核杆菌感染受到的影响因素较多，如年龄、体质、营养及性别，不同因素均会造成CD4+T细胞计数减少，引起Th1/Th2细胞因子失衡，感染结核杆菌患者的外周血IL-4、IFN-γ的水平明显高于未感染结核杆菌的患者，提示结核杆菌与HIV共感染的状态会对Th1/Th2型细胞因子的动态稳定产生影响[15]。因此，积极采取有效的措施提高机体免疫，对降低结核杆菌感染率具有重要的意义[16]。

AIDS主要与HIV病毒感染有关，且患者病情的发展多与HIV病毒量存在紧密的联系[17]。HIV病毒量较高的患者，对于机体免疫系统的作用较大，患者病情越严重，能引起机体免疫平衡发生漂移，从而能加剧病情的发生、发展[18]。国内虚证研究表明[19]，当Th1状态占据优势时，则会增强机体细胞免疫，提高患者抗病毒能力;而当Th2占据优势时，将会增加HIV的易感性，导致HIV病毒量呈比例增加。因此，HIV病毒载量能反映患者的病情严重程度，且病毒载量越大，病情越严重，对于机体CD4+T细胞水平的影响越大，结核杆菌感染率越高[20]。本研究中，觀察组HIV载量中<1 000 copy/ml、（1000～4999）copy/ml病例数低于对照组（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例数高于对照组（P<0.05），说明AIDS结核杆菌感染率与病毒载量存在紧密的联系，且伴有结核杆菌感染患者病毒载量较高。为了进一步分析AIDS结核杆菌感染与免疫功能和HIV病毒载量的关系，本研究中对其关系进行相关性分析，结果表明，AIDS结核杆菌感染率与患者免疫功能CD4+T水平呈负相关（P<0.05）;与HIV载量呈正相关（P<0.05），说明AIDS结核杆菌感染与HIV载量和免疫功能存在紧密联系，应加强患者基础疾病治疗，增强机体免疫力，降低HIV载量，降低结核杆菌感染率。

[参考文献]

[1]   谢周华，吴金伟，李志峰. HIV/AIDS儿童合并肺结核的临床特征与转归[J]. 中华实验和临床病毒学杂志，2019， 33（4）：428-431.

[2]   中华医学会热带病与寄生虫学分会艾滋病学组.人类免疫缺陷病毒/艾滋病患者合并非结核分枝杆菌感染诊治专家共识[J].中华传染病杂志，2019，37（3）：167-176.

[3]   Hirano D，Oda T，Ito A，et al. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase of mycoplasma pneumoniae induces in- fection-related glomerulonephritis[J].Clinical Nephrology， 2019，92（5）：263-272.

[4]   蔡阳，吴桂辉，马瑶，等.不同年龄段HIV/AIDS合并复治肺结核双重感染患者结核分枝杆菌菌株耐药分析[J].预防医学情报杂志，2019，35（12）：80-85.

[5]   舒远路，杨翠先，张米，等.HIV/AIDS-TB患者抗结核药物治疗强化期红细胞系的变化[J].中国感染控制杂志，2019，18（5）：396-402.

[6]   袁婧，刘俊，金永梅，等.合并艾滋病的结核病患者血液结核分枝杆菌培养阳性率影响因素的分析[J].临床肺科杂志，2018，23（7）：1175-1178.

[7]   Ronda J，Gaydos C，Perin J，et al. Does mycoplasma genita- lium infection predict future sexually transmitted infec- tions in female urban adolescents and young adults[J]. Journal of Adolescent Health，2018，62（2）：S82.

[8]   代佳伟，张米，谢祺，等.3种检测方法在不同人群结核潜伏性感染诊断中的应用价值[J].检验医学与临床，2020， 17（6）：809-811.

[9]   张珍，杨学刚，孟娟，等.Tspot.TB在艾滋病合并肺结核感染诊断中的应用[J].中国艾滋病性病，2020，26（4）：100-101.

[10]  徐新民，李敏，李瑞红，等.艾滋病合并呼吸道感染患者的病原菌分布及药敏分析[J].标记免疫分析与临床，2019， 26（5）：830-832，879.

[11]  Bwala DG，Ponman S，Duncan N，et al. Assessment of mycop- lasma gallisepticum vaccine efficacy in a co-infection challenge model with QX-like infectious bronchitis virus[J]. Avian Pathology，2018，47（3）：1-28.

[12]  譚剑明.心理指导干预在艾滋病合并肺结核双重感染患者中的应用效果[J].中国当代医药，2020，27（11）：45-47，51.

[13]  刘娇，王川林，古雪，等.HIV/AIDS患者与HBV、HCV共感染对外周血病毒载量及T淋巴细胞亚群表达影响的相关性分析[J]. 川北医学院学报，2018，33（2）：184-187.