一例河蟹疾病的诊断及治疗

○汤北伟

2021年6月，我县半城镇一名养殖户塘口的河蟹和小龙虾出现了死亡，塘口面积60亩，水草部分发黑腐烂，河蟹放养密度1400只/亩，塘口自带小龙虾，河蟹每天死亡50-60只，吃食明显减少，病蟹活力较差，小龙虾也有少量死亡。笔者对病蟹、病虾的肝胰腺进行了病原分离、16SrD‐NA序列分析鉴定，并开展药敏试验；对病虾、病蟹的鳃进行白斑综合病毒的提取及PCR法分子检测技术进行鉴定，采用对症施药、调水等方法成功处理病情。

1 方法

1.1 病原菌的分离、鉴定及药敏试验

（1）病原菌的分离：用灭菌棉签蘸取河蟹、小龙虾肝胰腺，均匀涂于营养琼脂和TCBS培养基上，分别置于28℃、37℃恒温培养18-24小时后，观察菌落形态，并挑取优势菌株划线接种在营养琼脂平板和3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板上，分别置于28℃ 、37℃ 恒温培养18-24小时。

（2）细 菌的鉴定：把分离出的细菌送至生工生物工程（上海）股份有限公司，利用细菌16SrDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。

（3）药敏试验：通过南京菲恩医疗科技有限公司生产的药敏板进行药敏试验，分别测定细菌分离株对恩诺沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、盐酸多西环素、氟甲喹、磺胺间甲氧嘧啶钠的敏感程度。

1.2 白斑综合病毒核酸提取及检测

从病蟹、病虾中取约100mg鳃组织，按照生工生物工程（上海）股份有限公司的Ezup柱式动物基因组DNA抽提试剂盒的说明进行DNA提取，对白斑综合病毒DNA样本采用《GB/T28630.2-2012白斑综合征（WSD）诊断规程第2部分套式PCR检测法》进行检测。PCR扩增体系总量为50μL，分 别 为 :25μLMixTaq 酶（Takara），18μL无菌水，1μL正向引物，1μL反向引物，5μL模板。PCR产物通过1.5%的琼脂糖凝胶进行电泳分析。

2 结果

2.1 病原菌鉴定

通过细菌16SrDNA序列测序的方法，从病蟹中分离的细菌为维氏气单胞菌、拟态弧菌，从病虾中分离的细菌为弗氏柠檬酸杆菌。

2.2 病原菌的药敏试验结果

3株细菌对抗菌药物的最小抑菌浓度如表1所示。

表1 3株细菌对抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）对照表（单位：μg/mL）

参照2013年抗菌药物敏感性试验执行标准，维氏气单胞菌、拟态弧菌对恩诺沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、盐酸多西环素、氟甲喹均敏感，对磺胺间甲氧嘧啶钠耐药。弗氏柠檬酸杆菌对恩诺沙星、硫酸新霉素、盐酸多西环素、氟甲喹均敏感，对甲砜霉素中敏，对磺胺间甲氧嘧啶钠耐药。

2.3 白斑综合病毒PCR检测结果

PCR检测结果显示病虾、病蟹都感染了白斑综合病毒，如图1所示。

图1 白斑综合病毒PCR检测结果

M:DNAMarker（自上到下依次 为 2000、1000、750、500、250、100bp）；1.阴性对照；2.阳性对照；3.小龙虾样本；4.河蟹样本

3 分析与治疗

从病蟹中分离到维氏气单胞菌、拟态弧菌，这两种细菌对恩诺沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、盐酸多西环素、氟甲喹均敏感，对磺胺间甲氧嘧啶钠耐药。从病虾中分离到的弗氏柠檬酸杆菌对恩诺沙星、硫酸新霉素、盐酸多西环素、氟甲喹均敏感，对甲砜霉素中敏，对磺胺间甲氧嘧啶钠耐药，PCR结果表明病蟹和病虾都感染了白斑综合病毒。

对该塘口的死虾、死蟹，在远离养殖塘处深度掩埋，对于腐烂的水草要及时捞出，适当换水，并积极治疗。该塘口死亡数量约1只/亩，治疗方法以改善塘口环境为主。把水位降至50cm，第1天用强氧化底改1次，过硫酸氢钾粉剂（含量30%）250g/亩；第2天使用聚维酮碘（含量10%），500mL用2-3亩；第3天停药一天；第4天使用硫化氢氧化细菌改善塘底环境，方法为：水位50cm，每亩用量为0.4kg，干撒，4天用一次，连用4次。治疗期间要减少投料，并在饲料中添加壳聚糖、多维增加河蟹抵抗力。通过本次治疗，河蟹、龙虾的死亡情况明显改善。

水温20-30℃时，小龙虾极易感染白斑综合病毒，该河蟹塘口由于清塘不彻底，塘口中自带的龙虾感染白斑综合病毒后，传染给河蟹，造成河蟹感染白斑综合病毒。下年度清塘时，应加满水，水位淹没所有的龙虾洞，用菊酯类药物彻底清塘，可防止在河蟹养殖过程中混入小龙虾。