苍耳子烘制前后绿原酸含量的变化

姜 爽，李明达，刘成琳,2，武子敬,2*

（1.通化师范学院，通化 134002；2.通化师范学院吉林省长白山药用植物研究重点实验室，通化 134002）

苍耳子为菊科植物苍耳Xanthium s ibiricumPatr.的干燥成熟带总苞的果实，最早收载于《千金·食治》，又名为葈耳实，秋季果实成熟时采收，干燥，除去梗、叶等杂质。性温，味辛、苦，有毒，具有散风寒、通鼻窍、祛风湿的功能[1,2]。主要用于风寒头痛、鼻塞流涕、鼻孰、鼻渊、风疹痰痒、湿痹拘挛等。是传统的鼻科要药，亦为常用有毒中药[3-5]。苍耳子中的化学成分有多种，主要包括甾醇类、噻嗪类、倍半萜类、水溶性苷类、酚酸及其衍生物、黄酮类、蒽醌类、挥发油、生碱类等化学成分[3,5,6]。现代研究表明，苍耳子的药理作用有降血糖、抗过敏、抗菌、抗炎、镇痛、抗肿瘤的作用[7]。中医认为，苍耳子有小毒，对于苍耳子的炮制记载主要为“炮制去刺”[8]，须经炮制后才可用于临床，炒制的火候把握很重要，故本论文采用高温烘制的方法，对苍耳子进行炮制，考察其中活性成分绿原酸的含量变化情况。

1 材料与方法

1.1 材料仪器与试剂

1.1.1 材料

苍耳子购于通化医药大厦，经通化师范学院于俊林教授鉴定为菊科植物苍耳Xanthium sibiricumPatr.的干燥成熟带总苞的果实；绿原酸对照品（四川维克奇生物有限公司），供含量检测用。

取生苍耳子适量置于真空干燥箱，温度调200℃恒温，烘制15min，取出晾凉备用。

1.1.2 仪器

赛默飞高效液相色谱仪（包括自动取样器、四元泵系统、紫外检测器、工作站），精密电子天平（天津天马恒基仪器有限公司）；SG3300H超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）；DZF-6050真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）。

1.1.3 试剂

水为娃哈哈纯净水，甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯。

1.2 试验方法

1.2.1 对照品溶液制备

精密称取绿原酸对照品1.25mg,置10mL容量瓶中，加适量甲醇溶解至刻度，即得绿原酸对照品溶液（浓度为0.125mg/mL）。

1.2.2样品的制备

1.2.2.1 供试品溶液的制备

精密称取生品苍耳子、烘制苍耳子约2g，置250mL具塞锥形瓶中，加水100mL，精密称定，超声处理（250W，40kHz）1h，取出放凉，精密称定，用水补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate Polar RP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）：0.04%磷酸水（B），梯度洗脱（0~20min，10%→25%），柱温：30℃，检测波长：327nm，进样量：5μL。结果见图1、2、3，为对照品、生品和烘制品的苍耳子的供试品溶液绿原酸高效液相色谱图。

图1 绿原酸对照品HPLC图

图2 生品苍耳子供试品HPLC图

图3 烘制苍耳子供试品HPLC图

1.3.2 线性关系考察

精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20μL，按“1.3.1”项下色谱条件，连续进样5次，记录不同进样量的混合对照品溶液的峰面积和保留时间，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，Y=47.22X+1.4995，R2=0.998（n=5），线性范围在0.25~2.5μg，结果见图4。

图4 绿原酸对照品线性关系图

1.3.3 精密度试验

精密吸取同一混合生品、烘制品的供试品溶液，按“1.3.1”项下色谱条件，一天内连续进样6次，每次进样量5μL，记录峰面积并计算生品、烘制供试品溶液中绿原酸峰面积的RSD值分别为0.66%、0.62%，表明仪器精密度良好。

1.3.4 稳定性试验结果

精密吸取同一生品、烘制品的供试品溶液，按“1.3.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10h进样，每次进样量5μL，记录10h内生品、烘制品的供试品溶液中绿原酸峰面积并计算RSD值分别为0.67%、0.57%，表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

1.3.5 重复性试验

取同一批生品、烘制苍耳子药材约2g，精密称定，按“1.2.2.1”项下方法平行制备6份生品、烘制品的供试品溶液，在“1.3.1”项下色谱条件进样，每次进样量5μL，记录峰面积并计算生品、烘制品的供试品溶液含量RSD分别为0.63%、0.67%，表明该方法重复性良好。

1.3.6 回收率试验

取已知含量的生品、烘制苍耳子（其中生品、烘制品苍耳子的绿原酸的含量分别为12.01mg·g-1、24.05mg·g-1）约0.05 g，精密称定，平行6份，分别加入绿原酸对照品适量，按“1.2.2.1”项下方法制备生品、烘制品苍耳子的供试品溶液，在“1.3.1”项下色谱条件进样，测定含量，计算回收率平均值分别为99.63%、99.80%，RSD值分别为0.90%、0.43%。

2 结论与讨论

本实验采用HPLC法测定生品苍耳子和烘制品苍耳子中绿原酸的含量，该方法简便、快速、重现性好。生品苍耳子中绿原酸含量12.01 mg·g-1，烘制品苍耳子中绿原酸含量24.05 mg·g-1。可见高温烘制品绿原酸的含量明显比生品中绿原酸的含量增加，而且用高温烘制的炮制方法对苍耳子进行炮制，操作方法简单可行，这也为高温烘制法对苍耳子饮片的炮制奠定基础。