单月桂酸甘油酯及其与富马酸复配对川藏黑猪配套系商品仔猪生长性能、抗氧化能力及免疫功能的影响

2022-04-11杨加豹刘进远

中国饲料 2022年7期

陈瑾，杨加豹，邓卉，刘进远

（1.四川省畜牧科学研究院，四川成都 610066；2.动物遗传育种四川省重点实验室，四川成都 610066）

2020 年7 月1 日我国正式禁止饲料添加促生长类抗生素，因此寻找和抗生素作用效果相当的替代品迫在眉睫。中链脂肪酸（MCFA）是指碳链长度在6 ～12个的饱和脂肪酸，包括己酸、辛酸、癸酸和月桂酸等（耿春银等，2014）。体外试验已经表明，MCFAs 及其甘油一酯对致病菌、病毒及寄生虫的活性具有一定的抑制作用。单月桂酸甘油酯（GML）是其中抑菌活性最强的化合物（张希等，2016）。近年来研究表明，GML 在提高动物生长性能、改善机体健康方面具有一定的作用（蓝俊虹等，2020；刘梦芸等，2017）。同时 GML 和有机酸在体外具有抑菌增效作用（张希等，2016；Kim等，2013），但GML 和有机酸复配在仔猪上的应用研究鲜见报道。本试验旨在研究GML 及其与富马酸（FA）复配对川藏黑猪配套系商品仔猪生长性能、血清生化指标、抗氧化性能及免疫功能的影响，为禁抗后GML 及其与FA 复配在养殖业中的应用提供数据支撑。

1 材料与方法

1.1 试验材料 GML 购自杭州康源食品有限公司， FA 购自四川畜科饲料有限公司，供试仔猪和试验场地由四川绵阳明兴农业科技开发有限公司提供。

1.2 试验设计及饲养管理试验选用80 头初始体重为（14.99±1.45）kg 的健康川藏黑猪配套系商品仔猪，按照体重相近、公母各半的原则，随机分为4组，每组5个重复，每个重复4 头猪。对照组饲喂不含抗生素的基础饲粮；抗生素组在基础饲粮中添加50 mg/kg 吉他霉素、50 mg/kg 喹烯酮和75 mg/kg 金霉素；GML组在基础饲粮中添加300 mg/kg GML；GML+FA组在基础饲粮中添加 300 mg/kg GML 和 6 g/kg FA。基础饲粮参考 NRC（2012）饲养标准和我国饲料成分与营养价值进行配制，其组成及营养水平见表1。 GML+FA组用FA 替代等量玉米构成试验饲粮。试验预试期7 d，正式期30 d，四川绵阳明兴猪场进行，试验过程中猪自由采食和饮水，防疫消毒程序按猪场管理规定进行。

表1 基础日粮组成及营养水平（风干基础）

1.3 指标测定及方法

1.3.1 生长性能试验期间每天记录各圈试验猪只的采食量，分别于试验第1、15、30 天，对每头猪进行空腹称重，计算出平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。

1.3.2 腹泻程度试验期间每天早、中、晚定时观察各圈猪只的粪便情况，并给予评分。1 分为硬粪；2 分为正常粪便；3 分为软粪，部分形成粪便；4 分为半液状、浆糊状粪便；5 分为水样粪便；粪便得分为4、5 分者确定为腹泻。详细记录各圈猪只的腹泻头数及评分，计算出腹泻率，计算公式如下：

腹泻率/%=（腹泻仔猪头数×腹泻天数）/（总试验猪头数×试验天数）×100。

1.3.3 血清生化指标、免疫指标及抗氧化指标试验结束时，从每组的每个重复中随机选取2 头猪进行前腔静脉采血，分离血清，-20 ℃冰箱保存待测。送至成都市公共卫生中心用血液生化自动分析仪测定总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量以及谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）活性。依照相应商品试剂盒（南京建成生物工程研究所）的说明测定免疫球蛋白 A（IgA）、免疫球蛋白 G（IgG）、免疫球蛋白 M（IgM）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干扰素-γ（IFN-γ）含量，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性及总抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）含量。

1.4 数据分析数据采用Microsoft Excel 2007进行整理，采用SPSS 18.0 进行单因素方差分析和多重比较，P ＜ 0.05 为差异显著，P ＜ 0.01 为差异极显著。

2 结果

2.1 GML 及GML+FA 对仔猪生长性能及腹泻程度的影响由表 2 可知，在 1 ～ 14、15 ～ 30 d以及 1 ～ 30 d 阶段，各组的 ADG、ADFI、F/G 和腹泻率均无显著差异（P ＞0.05）。但从数值上来看，1 ～ 14 d GML组的 ADG 和 ADFI 为各组最低，GML+FA组的 ADG 为各组最高。 15 ～ 30 d 抗生素组、GML组和GML+FA组的ADG 比对照组分别提高了 4.76%、2.76%和 6.32%。 1 ～ 30 d 抗生素组和 GML+FA组的 ADG 相似，F/G 相同，均优于对照组。 GML+FA 的腹泻率较对照组降低26.84%，与抗生素组相当。 GML组的ADFI 在各阶段及全期均为最低。

表 2 GML 及 GML+FA 对仔猪生长性能和腹泻程度的影响

2.2 GML 及GML+FA 对仔猪血液生化指标的影响由表3 可知，与对照组相比，抗生素组的BUN 显著降低了 25.96%（P ＜ 0.05）。其余血清生化指标各组之间均无显著差异（P ＞0.05）。

表 3 GML 及 GML+FA 对仔猪血液生化指标的影响

2.3 GML 及GML+FA 对仔猪血清抗氧化能力的影响由表4 可知，与对照组相比，抗生素组的血清 T-SOD 活性提高了 29.50%（P ＜ 0.01）；GML组血清中T-SOD 活性和MDA 含量分别提高了11.98%和 55.49%（P ＜ 0.05），GSH-PX活性和 TAOC 分别降低了 10.12%（P ＜ 0.05）和 30.77%（P ＜0.01）；GML+FA组血清 MDA 含量提高了 52.47%（P ＜ 0.05）。各组仔猪血清 CAT 活性无显著差异（P ＞ 0.05）。

表 4 GML 及 GML+FA 对仔猪血清抗氧化能力的影响

2.4 GML 及GML+FA 对仔猪血清免疫指标的影响由表5 可知，与对照组相比，抗生素组血清IgM 和IL-6 含量分别降低了16.92%和20.01%（P＜ 0.05）；GML组血清免疫指标均无显著差异（P ＞0.05）；GML+FA组血清 IgA、IgG、IL-6 和 TNF-α含量分别提高了 8.38% 、27.04% 、23.97% 和21.70%（P ＜ 0.05）。 GML+FA组血清 IgA、IgG、IgM、IL-6 TNF-α 和 IFN-γ 含量均极显著或显著高于抗生素组（P ＜ 0.01 或 P ＜ 0.05）。各组仔猪血清 IL-2 含量均无显著差异（P ＞ 0.05）。

表 5 GML 及 GML+FA 对仔猪血液免疫指标的影响

3 讨论

3.1 GML 及其与FA 复配对仔猪生长性能的影响 GML 可在动物生产中作为脂肪乳化剂和抑菌添加剂应用。目前关于GML 对动物生长性能的影响结果仍存争议。蓝俊虹等（2020）研究表明，饲粮中添加1000 mg/kg GML 能显著增加仔猪ADG，显著降低F/G，提高仔猪生长性能。李涛等（2013）研究表明，饲料中添加0.4% GML 对断奶仔猪生产性能影响差异不显著。 López-Colom 等（2020）考察了从椰子油中提取的中链脂肪酸钠盐混合物（其中月桂酸占总脂肪酸的48.4%）对沙门氏菌和大肠杆菌攻毒仔猪的保护作用，结果表明，该混合物对沙门氏菌攻毒前后的仔猪生长性能无显著影响，但显著降低了大肠杆菌攻毒后4 ～8 d仔猪的日增重。在本试验中，GML 对生长性能无显著影响，但在各阶段都有降低采食量的趋势，这可能是因为GML 中含有一定量的游离月桂酸，影响了适口性，导致采食量降低。

GML 是脂肪酸及其衍生物中抑菌活性最强的化合物，和有机酸复配在体外具有抑菌增效作用（张希等，2016；Kim 和 Rhee，2013）。但 GML 和有机酸复配在仔猪上的应用研究鲜见报道。旷义文等（2018）将 MCFAs（包含月桂酸和葵酸）、甲酸钙、乳酸钙和柠檬酸添加到断奶仔猪饲粮中，并与含氧化锌的抗生素饲粮进行比较。结果表明，饲粮添加MCFAs 和有机酸的混合物替代 ZnO 有利于提高断奶仔猪的采食量和生长速度，并且不影响饲料的转化效率。本研究结果表明，GML 与FA 复配提高了日增重，降低了腹泻率，但从统计上未达到显著水平。分析原因可能和GML 的添加量有关，Gebhardt 等（2020）评价了在保育猪饲粮中添加MCFAs 促进生长的效果，结果表明MCFAs 添加量为 0.25%、0.5%、1.0%和 1.5%时，ADG、ADFI和 FCR 呈线性剂量依赖性改善（P ＜ 0.01）。本研究中GML 的添加量仅为0.03%，远低于达到显著水平的添加量。

3.2 GML 及其与FA 复配对仔猪血清生化指标的影响动物机体新陈代谢机能和组织细胞通透性的改变最终反映在血清生化指标的改变上（蒋小丰等，2009）。血清BUN 是体内蛋白质和氨基酸代谢的产物，BUN 含量降低表明氮沉积增加。本研究中，抗生素组的BUN 含量显著降低，表明抗生素能提高蛋白质代谢的利用率。 TP 和ALB 含量反映了机体蛋白质的吸收和代谢状况（郑有秀等，2018）。血清GLU 含量分别反映出机体糖代谢情况。血清中 ALT 和 AST 的水平高低反映了肝脏是否受到损伤以及损伤程度（王吉等，2017）。血清 TC、TG、HDL-C 和 LDL-C 含量是衡量机体脂类代谢的重要指标。本试验研究结果表明，GML及其与 FA 复配对血清 TP、ALB、GLU、BUN、TC、TG、HDL-C、LDL-C 含量及 ALT、AST 活性均无显著影响。表明GML 和FA 的添加不会对川藏黑猪仔猪健康状况和营养物质代谢产生负面影响。

3.3 GML 及其与FA 复配对仔猪血清抗氧化能力的影响机体的健康状况与抗氧化能力大小存在着密切的联系。体内的抗氧化系统包括T-SOD、GSH-Px、CAT 等。血清 T-AOC 是用于衡量机体抗氧化系统功能状况的综合性指标，可反映机体所具有的总抗氧化能力，MDA 含量则反映脂质过氧化程度。在蛋鸡（刘梦芸等，2017）、花鲈（孙彩云等，2021）、断奶羔羊（王贺泽等，2021）上的研究表明，GML 添加能够提高 T-AOC、SOD 和 GSH-Px 活性，提高机体抗氧化能力。然而尹彩娜等（2008）研究表明，在小鼠日粮中添加椰子油能显著提高小鼠血清MDA 浓度，显著降低 GSH-Px 活性。本研究中GML 及其与FA 复配显著提高了仔猪血清MDA含量，单独添加GML 还显著或极显著降低了血清中的GSH-PX活性和T-AOC，表明GML 可降低仔猪血清总抗氧化能力。出现不同结果的原因可能与GML 的来源、添加量和试验条件不同有关。

3.4 GML 及其与FA 复配对仔猪血清免疫功能的影响免疫球蛋白是血液和组织液中的一类糖蛋白，由B 细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生，是介导体液免疫的重要免疫因子。旷义文等（2018）研究表明，有机酸和中链脂肪酸合用可显著增加仔猪血清IgG 含量，提高免疫功能。De Keyser 等（2019）报道，仔猪饲喂辛酸和己酸的混合物后，再用脂多糖攻毒，其血清中的IgA 含量显著高于抗生素组。本研究结果也表明，GML 与FA 复配能提高仔猪血清IgA 和IgG 含量，与前人的研究结果相同。细胞因子是免疫系统的重要组成部分，IL-6 可刺激 T 细胞、B 细胞、杂交瘤细胞和干细胞增殖，促进B 细胞产生免疫球蛋白。TNF-α 能杀伤肿瘤细胞，参与免疫调节（周光炎，2019）。 Kono 等（2004）研究表明，中链脂肪酸甘油三酯能保护脂多糖诱导的大鼠肠道损伤，增强肠道 IL-6 的 mRNA 表达水平，降低 TNF-α 和 IL-18的表达水平。 Ren 等（2019）报道，在仔猪饲粮中添加0.64%甲酸、0.25%丙酸和0.2%癸酸，可缓解大肠杆菌攻毒后的炎性反应，表现为攻毒后9 h 和24 h 血浆 TNF-α 和 IFN-γ 浓度显著降低。本研究结果表明，GML 与FA 复配提高了仔猪血清IL-6和TNF-α 含量，和前人的报道有所不同，这可能和有机酸复合物的种类差异和动物健康状况有关。有机酸复合物的免疫调节作用可能与其对肠道微生物的影响有关（Zentek 等，2013），通过肠道微生物和免疫系统的互作，间接影响免疫系统。