海南地方习用药材土人参质量标准研究

陈兰 冯剑 黄梦利 孙晓玉 刘洋洋

摘要为建立海南地方习用药材土人参的质量标准，依据《国家药品标准工作手册》中药质量标准研制的要求，对土人参药材的性状、鉴别、水分、总灰分、浸出物、多糖含量等指标进行测定。结果明确了土人参药材的性状和显微结构特征，建立了具有专属性的薄层鉴别方法;规定土人参药材水分含量不得超过12.0%、总灰分含量不得超过18.0%、醇溶性浸出物含量不得少于8.0%、多糖含量不得少于9.0%。本研究可为建立土人参药材质量标准体系提供参考。

关键词土人参;质量标准;多糖

中图分类号 S649        文献标识码 A         DOI：10.12008/j.issn.1009-2196.2022.01.014

Development of Quality Standard for Talinumpaniculatum， a Native Traditional Medicine in Hainan

CHEN Lan   FENG Jian   HUANG Mengli   SUN Xiaoyu   LIU Yangyang

（Hainan Branch of the Institute ofMedicinal Plant Development， Chinese Academy ofMedical Sciences and Peking UnionMedical College/Hainan Provincial Key Laboratory for Conservation and Development ofMedicinal Plant Resources inSouth China， Haikou， Hainan 570311， China）

Abstract   Talinum paniculatum is a native medicinal plant in Hainan， and its characteristics， identification methods， and con- tents of water， total ash， extract， polysaccharides， etc were identified based on the requirements for the quality standard of crude drugs in the Working Manual of National Drug Standardization （2015 edition）. The characteristics and microstructures of T. paniculatum were identified， and an exclusive thin layer-chromatography identification method for T. paniculatum was established. The crude drug of T. paniculatum is provided for to contain no more than 12.0% of water， no more than 18.0% of total ash， no less than 8.0% of alcohol soluble extract and no less than 9.0% of polysaccharides. These results could provide reference for the establishment of quality standard system for T. paniculatum.

Keywords   Talinum paniculatum; quality control; polysaccharide

海南地方习用药材土人参为马齿苋科植物土人参Talinumpaniculatum（Jacq.）Gaertn.的干燥全株，又称栌兰、假人参、参草、土高丽参、红参、紫人参、煮饭花、力参、波世兰，一年生或多年生草本，全株无毛，高 30～100 cm ，原产热带美洲，我国中部和南部均有栽植，有的逸为野生，生于阴湿地[1]。土人参味甘、性平，根为滋补强壮药，有补中益气、润肺生津之功效，用于气虚乏力、体虚自汗、脾虚泄泻，叶消肿解毒，治疔疮疖肿[1-2]。土人参富含黄酮类、多糖、微量元素等活性物质，其叶、根部也可作为蔬菜食用，起到补血益气的药膳作用[3-6]。其中多糖具有较好的免疫调节、抗肿瘤、保肝、抗衰老、降血脂等活性[7-8]，黄酮类化合物具有较好的抗氧化作用，是良好的天然抗氧化剂[5]。此外，土人参的提取物还具有抗菌和抗氧化作用，具有较高的食用和药用价值[5，9-11]。

目前土人参的研究主要集中于其药用价值[1，4]、營养价值[12-13]、化学成分[14-15]、储藏方式[16-17]、传统栽培技术[18-22]等方面。在贵州，土人参被作为地方习用药材并收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版中，该标准较为简单，仅有性状和显微鉴别项[23]。因此，为提升土人参药材质量控制标准，本研究对土人参药材的质量控制指标进行了深入探讨，为制定海南地方习用药材土人参质量标准及深入开发和利用土人参提供理论依据。

1  材料与方法

1.1  材料

1.1.1   仪器与试剂仪器：生物显微镜（日本 Nikon ），马弗炉，紫外可见分光光度计（日本岛津）。

试剂：无水葡萄糖（批号：110833-201707，购于中国食品药品检定研究院），其余试剂均为国产分析纯。

1.1.2  实验材料 10 批实验用土人参药材样品均为野生种，采自海南海口、定安、屯昌、琼海、澄迈、保亭、万宁、陵水等地，详细信息见表1。其中，土人参对照药材（批号 TRS06）于2018 年3 月采自海南省保亭黎族苗族自治县毛感乡，除去杂质，晒干而得。原植物经广东药科大学郑希龙副研究员鉴定为马齿苋科（Portulacaceae）植物土人参T.paniculatum（ Jacq.）Gaertn.，对照药材（ TRS06）原植物凭证（腊叶）标本保存于海南省中药标本馆，凭证编号为 TRS18032806BT。

1.2  方法

1.2.1  性状检定参照《国家药品标准工作手册》的性状检定方法[24]，对10 批土人参药材的外观形状、大小、表面色泽和特征、质地、断面及气味进行检定和描述。

1.2.2  鉴别

1.2.2.1  显微鉴别参照《国家药品标准工作手册》的显微鉴别法[24]，将10批土人参药材粉碎，过四号筛;挑取少许粉末置载玻片上，滴加水合氯醛试液进行透化，加盖玻片，于生物显微镜下观察土人参药材粉末的显微结构特征。

1.2.2.2  薄层鉴别将土人参药材粉碎，过四号筛;取粉末1 g ，加石油醚（60～90℃）10 mL ，超声提取10 min，滤过，滤渣加95%乙醇25 mL  超声提取1 h，滤过;将滤液浓缩至2 mL，作为土人参薄层鉴别供试品溶液。另取土人参对照药材粉末1 g，同法制成土人参薄层鉴别对照药材溶液。参照《国家药品标准工作手册》照薄层色谱法，分别吸取上述2 种溶液各3 μL，点于同一硅胶 G 薄层板上，以正丁醇-水-冰醋酸（4 ∶1∶0.3）为展开剂，展开，取出晾干;喷以磷钼酸试液，以105℃加热至斑点清晰，置日光下检视。

1.2.3  水分、总灰分、浸出物的测定土人参水分、总灰分、浸出物参照《国家药品标准工作手册》中的测定法进行测定[24]。

1.2.4  多糖的测定

1.2.4.1  多糖对照品溶液制备取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1 mL 含0.6 mg 的溶液，即得。

1.2.4.2  标准曲线制备精密量取多糖对照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分别定容至50 mL;精密量取上述各溶液2.0 mL，分别置于10 mL 具塞试管中，迅速精密加入5%苯酚溶液1 mL 并摇匀;加入浓硫酸7 mL ，混匀后置于40℃水浴30 min，后冰浴5 min;取出，以相应的试剂为空白，参照《国家药品标准工作手册》中的紫外-可见分光光度法[24]，在490 nm 波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1.2.4.3  土人参多糖供试品溶液制备将土人参药材粉碎，过四号筛;取粉末约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水25 mL，密塞，称定重量;静置1 h 后，水浴回流1 h，放冷，再称定重量，用蒸馏水补足减失的重量;摇匀，离心，取上清液 1 mL，用蒸馏水定容至50 mL，摇匀，即得土人参多糖供试品溶液。

1.2.4.4  方法学考察（ 1）线性关系考察精密量取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分别定容至50 mL，配制成葡萄糖含量为0.0012 、0.0024、0.0036、0.0048、0.0060 mg/mL 的系列溶液，以浓度作为横坐标（ X轴），吸光度为纵坐标（ Y轴），进行线性回归，计算回归方程。

（2 ）精密度试验精密吸取供试品溶液2.0 mL，按照标准曲线制备项下的样品制备方法，连续测定6 次，考察仪器精密度。

（3 ）稳定性试验精密吸取供试品溶液 2.0 mL，按照标准曲线制备项下的样品制备方法，测定反应结束后的0 、10、20、30、40、50、60、90、120、150 min 的吸光度，考察供试品溶液的稳定性。

（4 ）重复性试验取同一批样品6 份，按供试品溶液制备的方法，测定土人参多糖的含量;取同一批样品制备6 份供试品溶液，用于测定吸光度，考察该方法重复性。

（5 ）回收率取已知含量的同一批样品6 份，每份0.2 g，精密称定，按供试品溶液制备方法，分别精密加入1 mL 标准葡萄糖溶液和1 mL 供试品溶液，定容至100 mL，测定并计算结果，考察该方法的准确度。

1.2.4.5  含量测定精密量取土人参多糖供试品溶液2 mL，置于10 mL 具塞试管中，按照标准曲线的样品制备方法，测定样品吸光度，从标准曲线上读出土人参多糖供试品溶液中无水葡萄糖的含量，经计算即得。

2  结果与分析

2.1  性状

土人参长30～100 cm。根圆锥形或长纺锤形，有的分枝;主根长5～30 cm，直径0.1～2.5 cm，表面凹凸不平，灰黑色，有纵皱纹及点状突起的须根痕;质坚硬，难折断。茎圆柱形或扁圆柱形，长5～50 cm ，直徑0.1～0.5 cm;淡棕色，具细纵棱线;质脆，断面淡棕色或灰白色，有髓或中空。单叶互生，多皱缩破碎，墨绿色至黑棕色，完整者展平后呈倒卵形或倒卵状长椭圆形，先端急尖，有时微凹，基部狭楔形，全缘。圆锥花序顶生或腋生，二叉状分枝，具长花序梗。蒴果近球形，3 瓣裂。种子多数，扁圆形。气微，味淡。

2.2  鉴别

2.2.1  显微鉴别

如图1 所示，土人参粉末呈灰黄色，木栓细胞呈长方型或类长方形。草酸钙簇晶众多，直径20～70μm ，边缘短钝。导管为梯纹导管、螺纹导管、网纹导管、具缘纹孔导管。淀粉粒单粒散在或复粒，单粒类球形或近圆形，复粒由2～5粒分粒组成，多糊化。纤维成束。

2.2.2  薄层鉴别展开后的薄层色谱板喷以磷钼酸试液，以105℃加热至斑点清晰，于日光灯下检视，如图2 所示。供试品在与对照药材薄层色谱相应位置上，均显相同灰蓝色斑点。

2.3  水分、总灰分、浸出物的测定

10批土人参样品的水分、总灰分、浸出物测定结果见表2 。10批土人参总灰分含量平均值为14.71%，其中采自陵水吊罗山乡土人参总灰分含量最高（16.68%），采自屯昌乌坡镇的最低（13.66%）。10 批土人参的水分含量平均值为7.63%，其中采自定安黄竹镇的土人参水分含量最高（9.23%），采自海口琼山区的水分含量最低（ 6.84%）。10批土人参的醇溶性浸出物含量平均值为11.05%，其中采自定安黄竹镇的土人参浸出物含量最高（12.84%），采自澄迈桥头镇的最低（ 10.17%）。

2.4  多糖含量测定

2.4.1  方法学考察

2.4.1.1  线性关系以浓度作为横坐标（ X轴），吸光度为纵坐标（ Y轴），进行线性回归，得回归方程 Y=63.833X+0.0688，R2=0.9992。结果显示，无水葡萄糖对照品在0.0012～0.0060 mg/mL 浓度范围内线性关系良好（表3 ）。

2.4.1.2  精密度试验精密度考察结果（表4 ），6次测量的 RSD 为0.00%，表明仪器精密度良好。

2.4.1.3  稳定性试验实验结果（表5 ）表明，在 150 min 内，吸光度变化不大，但 30 min 后数值略有波动，建议在20 min 内完成测定。

2.4.1.4  重复性试验结果如表6 所示，土人参多糖的吸光度 RSD 为0.92%，表明该方法重复性良好。

2.4.1.5  回收率测定结果见表7，土人参多糖含量的加样回收率为（102.22±0.88）%，RSD 值为0.86%。

2.4.2  多糖测定结果 10 批土人参多糖含量平均值为11.60%，详见表8。其中，采自海口琼山区的多糖含量最高（12.93%），而采自屯昌乌坡镇的多糖含量最低（10.17%）。

3  讨论与结论

3.1  土人参药材水分、总灰分及醇溶性浸出物含量限值的确定

10批土人参药材水分含量为6.84%～9.23%，利用10批土人参水分含量平均值乘以120%，得到其限定标准：7.63%×1.2=9.17%，但考虑海南湿度较大，拟规定土人参药材水分含量不得过12.0%。10 批土人参药材总灰分含量为13.66%～16.68%，与杨暹等[25]测得土人参总灰分为（14.30±0.13）%的结果基本一致。同理，利用10批土人参总灰分含量平均值乘以120%，得到其限定标准：14.71%×1.2=17.65%，拟规定土人参药材总灰分含量不得过18.0%。10批土人參药材浸出物含量为10.17%～12.84%，利用10批土人参浸出物含量平均值乘以80%，得到其限定标准：11.05%×0.8=8.84%，拟规定土人参药材醇溶性浸出物含量不得少于8.0%。

3.2  土人参药材多糖含量限值的确定

多糖是土人参的主要活性成分之一[7，10，26]，因此本研究将多糖含量作为土人参的质控指标之一。10 批土人参药材的多糖含量为10.17%～12.93%，利用10批土人参药材多糖含量的平均值乘以80%，得到土人参药材多糖含量限定标准：11.60×0.8=9.28%。故拟定按干燥品计算，土人参多糖含量不得少于9.0%。

本研究对海南地方习用药材土人参药材的性状、显微特征、薄层色谱、水分、总灰分、浸出物以及多糖含量等质量指标进行研究，并制定相应限值或要求，可为建立其质量标准体系提供参考，对确保土人参的临床用药安全及其作为制剂原料的安全性、有效性和稳定性具有一定的意义。

参考文献

[1]   中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志[M]. 北京： 科学出版社， 1999.

[2]   卢柳拂， 林梦瑶， 黄锁义， 等. 少数民族地区右江流域特色民族药研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志， 2018， 24（1）：191-200.

[3]   沈笑媛， 杨小生， 杨波， 等. 苗药土人参的化学成分研究[J]. 中国中药杂志， 2007， 32（10）：980-981.

[4]   王翔， 林梦瑶， 黄锁义， 等. 土人参研究的新进展[J]. 微量元素与健康研究， 2017， 34（1）：75-77.

[5]   刘晓珍， 汤艳姬， 陈斯钊， 等. 土人参黄酮类化合物的提取及其抗氧化性[J].  贵州农业科学 ， 2012， 40（11）：192-195+199.

[6]   黄礼德， 郭立强， 潘廷啟， 等. 正交设计优化土人参多糖的超声提取工艺[J]. 中国酿造， 2012， 31（3）：105-107.

[7]   潘廷啟， 文全泰， 黄礼德， 等. 土人参多糖的抗氧化活性研究[J]. 时珍国医国药， 2014， 25（1）：30-32.

[8]   乔宇彬. 中药多糖的化学与药理[M]. 北京： 人民卫生出版社， 2005.

[9]   叶玉妍， 陈晓， 杨礼香. 土人参 Actin 基因片段的克隆及序列分析[J]. 广东农业科学， 2018， 45（6）：19-24.

[10]  Cláudio Daniel Cerdeira， Jeferson J Da Silva， Manoel F RNetto， et al. Talinum paniculatum： a plant with antifungal potential  mitigates  fluconazole-induced  oxidative  dam- age-mediated growth inhibition of Candida albicans[J]. Re- vista Colombiana de CienciasQuímicoFarmacéuticas， 2020， 49（2）.

[11]  文全泰， 潘廷啟， 黄礼德， 等. 土人参提取液对 D-半乳糖所致衰老小鼠的抗氧化作用研究[J]. 天然产物研究与开发， 2014， 26（5）：662-665.

[12]  李刚凤， 杨天友， 高健强， 等. 土人参不同部位营养成分分析与评价[J]. 食品工业， 2016， 37（7）：295-298.

[13]  曹利民， 龙春林， 曹明. 江西赣南客家两种保健野菜营养成分分析[J]. 时珍国医国药， 2015， 26（11）：2 597-2599.

[14]  姚姝凤， 高建强， 成江， 等. 响应面法优化土人参根中总黄酮提取及其抗氧化活性研究[J]. 中国现代应用药学， 2017， 34（6）：858-863.

[15]  莫璐， 冯小雄， 农嵩， 等. 土人参叶的多糖提取及含量测定[J]. 微量元素与健康研究， 2015， 32（3）：29-30.

[16]  陈文， 王旭， 彭玉姣， 等. 贮藏方式对4 种药食两用植物种子萌发的影响[J]. 中国农学通报， 2018， 34（1）：85-89.

[17]  谢勇， 王鹏， 施伽，等. 不同贮藏温度对土人参叶品质特性的影响[J]. 食品安全质量检测学报， 2016， 7（12）：4 908-4912.

[18]  廖小锋， 李鹏， 谢元贵， 等. 金银花套种土人参栽培管理技术研究及效益分析[J]. 安徽农业科学， 2016， 44（23）：116-118.

[19]  廖小锋， 李鹏， 谢元贵. 喀斯特山区土人参高产栽培技术[J]. 现代农业科技， 2016（12）：108-109.

[20]  张洁慧， 王钢， 沈海琦， 等. 土人参高效安全栽培模式试验研究[J]. 现代农业科技， 2016（5）：91-92.

[21]  张平， 屠娟丽， 石玉波， 等. 土人参种子愈伤组织诱导及植株再生[J]. 现代园艺， 2016（11）：5-6.

[22]  王玲， 王钢， 沈海琦， 等. 保健野菜土人参引种试验[J].现代园艺， 2015（5）：42-43.

[23]  贵州省药品监督管理局. 贵州省中药材、民族药材質量标准[M]. 贵州： 贵州科技出版社， 2003：23.

[24]  国家药典委员会. 国家药品标准工作手册（第四版）[M].北京： 中国医药科技出版社， 2013.

[25]  杨暹， 郭巨先. 华南主要野生蔬菜的基本营养成分及营养价值评价[J]. 食品科学， 2002（11）：26121-125.

[26]  Iraê  Oliveira  Moura，  Cláudio  Carvalho  Santana，  YeseongRobert Familia Lourenço， et al. Chemical Characterization， Antioxidant Activity and Cytotoxicity of the Unconventional Food Plants： Sweet Potato [Ipomoea batatas （L.） Lam.] Leaf， Major  Gomes [Talinum  paniculatum （Jacq.） Gaertn.] andCaruru （Amaranthus  deflexus  L.）[J]. Waste  and  Biomass Valorization， 2020（12）：2407-2431.

（责任编辑林海妹）