鸡源8a 型腺病毒感染的诊断
2022-04-02吴通奎包涛涛黄智明莫兴虎
吴通奎 包涛涛* 黄智明 莫兴虎
(1.黔东南州动物疫病预防控制中心 贵州凯里 556000;2.镇远县动物疫病预防控制中心 贵州镇远 557700)
禽腺病毒(Fowl adenovivus,FAdV)是禽的一种无囊膜双链DNA 病毒,通常分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3 种亚群, 其中Ⅰ亚群和Ⅱ亚群与火鸡的出血性肠炎及鸡的相关病毒病关系较为密切, 而Ⅲ亚群则主要与禽的产蛋下降相关。 Ⅰ亚群包含5 个基因型(A、B、C、D、E),5 个基因型涵盖 12 种血清型,如 A 型中血清1 型,B 型中血清 5 型,C 型中血清 4 型和 10 型,D型中血清 2、3、9 及 11 型,E 型中血清 6、7、8a 及 8b型[1]。
目前在我国主要流行C、D、E 3 种基因型,以其中的血清 4 型、8a 型、8b 型及 11 型更为常见, 主要感染肉鸡、肉鸭及蛋鸡[2]。 2015 年在我国山东、湖北及河南等多地发生以心包积液及肝炎为典型病变的禽类疾病,经诊断为禽腺病毒感染,对养禽业造成了严重的经济损失[3]。2021 年9 月,贵州黔东南某养鸡场90 日龄鸡出现发病及异常死亡,本文对该例临床疑似腺病毒感染的患鸡开展临床症状观察、 病理剖检、细菌分离培养及病原学检测,旨在为鸡腺病毒感染的诊断提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 发病情况 2021 年9 月,贵州黔东南某林下养鸡场90 日龄鸡发病。 经调查,该养殖场前期已按场内免疫程序对全场鸡群做过禽流感H7、禽流感H9、鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡传染性法氏囊病等疫苗免疫。 饲养接近90 日龄时,场内个别鸡群开始出现精神沉郁,颈部无力而导致头部自然下垂,站立不稳,排白色稀粪,发病率约70%,病死率约65%。应养殖场主需求,对该养殖场患鸡进行检测分析。
1.2 病料来源 病料采自贵州黔东南地区某养鸡场具有典型症状的90 日龄患鸡。
1.3 主要试剂 DNA/RNA 提取试剂盒, 购自北京天根生化科技有限公司;2×Taq PCR Master Mix 及DL2000 DNA Marker,购自莫纳生物;AIV 通用型及NDV 实时荧光定量RT-PCR 检测试剂盒,购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司; 其它试验试剂均为国产分析纯。
1.4 临床症状观察及病理剖检 观察患鸡的典型临床症状,同时对患鸡进行病理剖检,记录患鸡的临床症状及病理变化情况。
1.5 细菌分离培养 无菌采集患鸡心(含心包液)、肝、脾、肺及脑等组织,划线接种于鲜血及普通琼脂培养基,置于37 ℃恒温培养箱培养24~48 h,观察是否有细菌生长。
1.6 病原学检测 采集患鸡的脑、气管、心(含心包液)、肺、肝及脾等组织,使用DNA/RNA 提取试剂盒提取病变组织中的DNA/RNA,置于-20 ℃冰柜中保存,备用。
分别对提取的核酸样本开展鸡的疑似疾病病原检测。 首先参照试剂盒说明开展禽流感病毒(AIV)及新城疫病毒(NDV)实时荧光定量RT-PCR 检测;然后参考文献分别开展禽腺病毒4 型(FAdV-4)、禽腺病毒 8a 型(FAdV-8a)、禽腺病毒 8b 型(FAdV-8b) 及禽腺病毒 11 型 (FAdV-11)PCR 检测, 所得PCR 产物于1.5%琼脂糖凝胶进行电泳分析,将试验所检出的阳性条带送测序公司测序验证。
2 结 果
2.1 临床症状及病理剖检 患鸡临床主要表现为精神沉郁、站立不稳、头部无力自然下垂及排白色稀粪;病理剖检可见患鸡心包积液明显,肝脏变性、质脆,肺部少量出血。
2.2 细菌分离培养 细菌分离培养结果显示,37 ℃恒温培养箱培养24~48 h 的鲜血及普通琼脂培养基上均未见细菌生长。
2.3 病原核酸检测 分别开展鸡的疑似疾病病原的核酸检测, 结果显示,AIV、NDV、FAdV-4、FAdV-8b 及 FAdV-11 检测结果均为阴性, 仅能检出FAdV-8a 阳性(见图1),经测序公司测 序分析,所得阳性片段与预扩增片段大小一致, 且与NCBI 上载录的FAdV-8a 序列同源性高达98%以上。
图1 FAdV-8a 扩增结果
3 讨 论
我国是农业生产大国, 畜禽养殖业在农业生产环节具有十分重要的作用, 但不可忽视的是, 近年来,随着畜禽养殖业的快速发展,禽类的疾病也开始不断增加。 其中FAdV 感染便是一种近几年在我国养禽业中一直困扰着养殖户的禽类疾病, 该病呈典型世界性分布,但自2015 年以来,关于该病在禽类养殖环节中发生的报道屡见不鲜, 不同日龄的禽类均可发病,对我国养禽业造成了严重的经济损失。
本文从一例患鸡上检出FAdV-8a 病原核酸,这就意味着在当地已存在FAdV 感染, 对当地养禽业的健康发展也带来了新的挑战。 鉴于FAdV 血清型的多样性及不同血清型致病力存在的差异, 当前市面上尚无效果特别显著的商品化疫苗。 因此, 为了有效避免该病的发生而带来的经济损失, 在日常禽类疾病防控中,一方面必须加强饲养管理,做好环境卫生消毒工作;另一方面实施动态监测,发现该病要早日送样确诊,以便制定有效的防控策略。