T细胞亚群、炎症指标及fetuin-A与慢性丙型肝炎的相关性

周伟，石磊

上海中医药大学附属曙光医院检验科，上海 200120

慢性丙型病毒性肝炎(chronic hepatitis C，CHC)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)病毒感染引起的慢性传染性疾病[1]，可导致肝脏出现慢性炎症坏死、肝纤维化，部分患者可发展为肝硬化、肝癌等，对患者的生命安全造成严重威胁。CHC的发病机制目前尚未明确，但众多研究表明，T细胞免疫异常、炎症反应、血糖代谢异常可能是诱发CHC发生、发展的影响因素[2-3]，参与了CHC引起肝组织损伤、肝纤维化的过程。HCV RNA载量反映了HCV病毒复制的活跃程度和病情变化，是CHC 诊断和抗病毒治疗的重要参考指标[4]。本研究对我院近年来收治的CHC 患者HCV-RNA 病毒载量与T 细胞亚群、炎症指标、fetuin-A 水平的相关性进行分析，旨在为进一步探讨CHC的病理机制及临床诊治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2019 年8 月至2020年10 月上海中医药大学附属曙光医院收治的140 例CHC 患者的临床资料，其中男性 61 例，女性 79 例；年龄24～71 岁，平均(48.28±5.11)岁。纳入标准：(1)均符合《丙型肝炎防治指南(2019 年版)》[5]的诊断标准；(2)病历资料完整齐全。排除标准：(1)合并其他病毒性肝炎、酒精性肝病、肝硬化等肝脏疾病；(2)恶性肿瘤、自身免疫系统疾病、代谢性疾病和严重基础疾病；(3)检查前6个月有抗病毒和免疫调节药物治疗史；(4)病历资料不全者。所有患者按照HCV RNA载量水平进行分组，其中 31 例 HCV RNA 载量＜1.00×103copies/mL的患者归为低载量组，67 例HCV RNA 载量在1.00×103～1.00×105copies/mL 的患者归为中载量组，42 例HCV RNA 载量＞1.00×105copies/mL 的患者为高载量组(42例)。本研究经我院伦理委员会批准。

1.2 检测方法

1.2.1 HCV RNA 定量检测 晨起采集所有患者的空腹静脉血3 mL，以3 000 r/min的速度离心后取血清样本在-70℃环境下保存待测。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)对血清中的HCV RNA 水平进行测定，检测仪器为美国ABI 公司生产的Prism 7300荧光定量PCR仪，试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司，所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.2 T细胞亚群检测 取EDTA 抗凝血100 μL加入流式细胞专用试管底部，加入5 μL四色荧光抗体(购自美国Beckman-Coulter公司)，混合均匀后在室温避光环境下孵育20 min，加入250 μL 红细胞溶解液，充分溶血裂解红细胞20 min 后以1 200 r/min 的速度离心5 min，去除上清液，PBS 缓冲液冲洗2次，最后采用500 μL PBS 缓冲液悬浮细胞，采用流式细胞仪FC500 检测患者外周血的 CD3+、CD4+、CD8+水平，计算CD4+/CD8+值。

1.2.3 炎症指标及fetuin-A水平检测 采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-2 (IL-2)、白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-10 (IL-10)、白细胞介素-32(IL-32)等炎症指标和人胎球蛋白A(fetuin-A)水平，炎症指标试剂盒均购自美国Genzyme公司，fetuin-A试剂盒购自上海西唐生物公司，检测仪器采用日立7600全自动生化分析仪，所有检测操作均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法 应用SPSS20统计软件进行数据统计分析。计量资料均符合正态分布，以均数±标准差()表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两间比较采用t 检验，采用Pearson 相关性分析法分析HCV-RNA病毒载量与T细胞亚群、炎症指标、fetuin-A水平的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同HCV-RNA 病毒载量CHC 患者的T 细胞亚群水平比较 不同HCV-RNA 病毒载量CHC 患者的CD3+水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)；随着HCV-RNA 病毒载量的不断增大，CHC 患者的 CD4+、CD4+/CD8+水平明显降低，CD8+水平明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 不同HCV-RNA病毒CHC患者的T细胞亚群水平比较()

表1 不同HCV-RNA病毒CHC患者的T细胞亚群水平比较()

注：与低载量组比较，aP＜0.05；与中载量组比较，bP＜0.05。

组别CD4+/CD8+例数CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)低载量组中载量组高载量组F值P值1.58±0.21 1.27±0.17a 1.06±0.11ab 88.73 0.000 1 31 67 42 77.23±9.04 76.18±8.71a 75.02±8.36ab 0.59 0.556 1 47.38±5.31 42.12±4.27a 38.33±3.84ab 37.71 0.000 1 30.23±4.42 33.71±4.82a 36.26±5.46ab 13.29 0.000 1

2.2 不同HCV-RNA 病毒载量CHC 患者的炎症指标和fetuin-A 水平比较 随着HCV-RNA 病毒载量的不断增大，CHC 患者的IL-2 水平明显降低，IL-6、IL-10、IL32 及fetuin-A 水平明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 不同HCV-RNA病毒载量CHC患者的炎症指标和fetuin-A水平比较()

表2 不同HCV-RNA病毒载量CHC患者的炎症指标和fetuin-A水平比较()

注：与低载量组比较，aP＜0.05；与中载量组比较，bP＜0.05。

组别低载量组中载量组高载量组F值P值IL-32(ng/L)145.74±42.15 237.49±61.17a 414.42±78.09ab 177.45 0.000 1例数31 67 42 IL-2(ng/L)55.38±9.31 48.82±7.12a 37.15±5.38ab 62.10 0.000 1 IL-6(ng/L)18.32±3.32 27.13±5.81a 47.91±9.28ab 202.19 0.000 1 IL-10(ng/L)156.24±31.29 223.49±45.27a 716.24±103.16ab 896.37 0.000 1 fetuin-A(g/L)5.43±1.26 7.58±1.41a 8.19±1.63ab 34.97 0.000 1

2.3 HCV-RNA 载量与T 细胞亚群、炎症指标及fetuin-A 的相关性 经Pearson 相关性分析结果显示，HCV-RNA 载量与T 细胞亚群明显相关，其中HCV-RNA 载量与 CD8+水平呈正相关(r=0.472，P=0.027)，与 CD4+、CD4+/CD8+水平均呈负相关(r 值分别为-0.505、-0.529，P 值分别为0.019、0.017)；HCV-RNA载量与炎症指标、fetuin-A 水平明显相关，其中HCV-RNA 与 IL-6、IL-10、IL-32 以及 fetuin-A 水平均呈正相关(r 值分别为 0.518、0.627、0.553，P 值分别为0.018、0.009、0.011)，与 IL-2 水平呈负相关(r=-0.509，P=0.021)。

3 讨论

CHC 具有隐匿性、慢性化和高漏诊率等特点[6-7]，患者在临床上并无明显特异性症状，处于急性发作期的患者也仅表现为全身乏力，多数CHC患者在确诊时已延误最佳治疗时机。因此、早期诊断和治疗有助于及早控制病情进展，对于减少肝硬化、肝细胞癌的发生具有重要意义[8]。

CHC 除了与HCV 病毒复制、变异等因素有关以外，机体免疫反应机制在其病情进展中也发挥重要作用[9]。机体免疫反应机制的核心是细胞免疫功能，T淋巴细胞具有识别抗原、激活并产生调节因子和趋化因子的功能[10]，其数量和各亚群比例能够反映机体细胞免疫水平，对病情发展和转归具有重要意义。本研究结果显示，随着HCV-RNA病毒载量的不断增大，CHC患者的CD4+、CD4+/CD8+水平显著降低，CD8+水平显著升高，HCV-RNA 载量与CD8+水平呈正相关，与CD4+、CD4+/CD8+水平均呈负相关。CHC 患者 CD4+水平的降低使相关免疫细胞增殖分化能力明显下降[11]，CD8+水平升高代表机体免疫攻击能力增强，CD4+/CD8+比值发生明显变化，机体免疫平衡被打破，机体清除病毒能力明显下降[12]。

另外，HCV病毒还能够对机体固有的免疫应答造成破坏，进而刺激单核巨噬细胞分泌IL-6、IL-10、IL-32等一系列炎症因子[13]，此类炎性因子可激活机体免疫细胞，引发细胞免疫和体液免疫，导致溶酶体、白介素等更多炎症因子大量释放，进而损伤肝细胞。机体肝脏的持续性损伤导致清除炎症因子的能力下降，持续存在的炎症因子损害肝脏，引发肝纤维化、肝硬化及肝癌的发生[14]。本研究结果显示，随着HCV-RNA病毒载量的不断增大，CHC 患者的IL-2 水平明显降低，IL-6、IL-10、IL-32 水平明显升高。HCV-RNA 载量与IL-6、IL-10、IL-32水平均呈正相关，与IL-2水平呈负相关。说明IL-2、IL-6、IL-10、IL-32 等炎症指标与CHC病情程度密切相关。

肝脏在机体血糖代谢中发挥重要作用，CHC的发生可影响机体胰岛素的分泌，产生胰岛素抵抗，进而引发肝源性糖尿病的发生[15]。fetuin-A 是胰岛素受体的天然抑制因子，能够与胰岛素受体的亚基结合，结合后可抑制胰岛素受体的自身磷酸化，使胰岛素信号通路中多种因子的表达受到抑制，进而使机体胰岛素抵抗得到显著增强，实现对机体糖脂代谢的调控[16]。本研究结果显示，随着HCV-RNA 病毒载量的不断增大，CHC 患者的 fetuin-A 水平明显升高，HCV-RNA 载量与fetuin-A 水平均呈正相关。上述结果提示，CHC患者的血糖代谢存在异常，胰岛素抵抗明显，其严重程度与CHC患者的病情程度密切相关。检测fetuin-A水平对于临床评价CHC患者病情、预测胰岛素抵抗发生都具有重要意义。

综上所述，HCV感染后，CHC患者的T细胞亚群、炎症指标和fetuin-A 水平均出现异常变化，其变化与CHC患者的病情程度密切相关，检测上述指标有助于了解CHC 的发病机制和慢性化过程，对于其临床诊治、疗效评价和预后转归都具有重要意义。