蔬菜中农药残留酶抑制法快速检测与气相色谱法的比较研究

张艳艳

摘 要：采用酶抑制法快速检测与气相色谱法分别对购自农贸市场的40批次蔬菜样品进行检测，通过对比快速检测方法与传统仪器方法的检测结果评价验证快速检测方法。结果表明，蔬菜中有机磷农药残留的快速检测方法与气相色谱检测方法的检测结果基本相符，可用于基层食品质量监管部门监控蔬菜质量的现场快速检测，对超标批次样品应委托有资质的检验机构通过色谱、质谱方法进一步验证。

关键词：快速检测;农药残留;蔬菜;酶抑制法

Comparative Study on Pesticide Residues in Vegetables by Enzyme Inhibition Rapid Determination and Gas Chromatography

ZHANG Yanyan

（Fushan County General Inspection and Testing Center， Linfen 042600， China）

Abstract： 40 batches of vegetable samples purchased from farmers’ markets were detected by enzyme inhibition method and gas chromatography. The rapid detection method was evaluated and verified by comparing the detection results of rapid detection method and traditional instrument method. The results show that the rapid detection method of organophosphorus pesticide residues in vegetables is basically consistent with the detection results of gas chromatography， which can be used for the on-site rapid detection of vegetable quality monitored by the grass-roots food quality supervision department. For the samples of excessive batches， qualified inspection institutions should be entrusted to further verify them by chromatography and mass spectrometry.

Keywords： rapid detection; pesticide residue; vegetables; enzyme inhibition method

有機磷农药是蔬菜生产中防治病、虫、草害的一类重要农药，使用范围广泛，导致近年来蔬菜质量抽检中有机磷类农药残留占比较高。因此，准确、快速地检测蔬菜中有机磷类农药残留成为有效控制蔬菜质量、保障人们食菜安全的关键环节[1]。农药残留量的实验室检测方法主要有气相色谱法与气相色谱-质谱联用法，二者的准确度高、特异性强，但检测周期较长、成本较高，难以在基层食品检验检测机构推广普及，且蔬菜产品批次多、货架期短，对检测时效要求高。因此，基层食品监管部门主要通过快速检测法满足日常监管的需求[2]。本研究参照国家标准GB/T 5009.199—2003中酶抑制率法对日常抽检的8种蔬菜的有机磷和氨基甲酸酯类残留进行检测，参照标准NY/T 761—2008中第1部分方法二对8种蔬菜中的8种有机磷农药残留组分进行检测，比较2种方法的检测数据，利用灵敏度与准确度较高的气相色谱法评价验证快速检测方法[3-4]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

胡萝卜、冬瓜、豆角、茄子、西葫芦、白菜、西红柿和生菜均购自某农贸市场;敌敌畏、对硫磷、辛硫磷、甲胺磷、乐果、氧化乐果、毒死蜱和乙酰甲胺磷标准溶液，农业部农村环境保护科研监测所;乙腈、丙酮，色谱纯;氯化钠，分析纯;农药残留检测试剂盒（1 250次/盒），含缓冲液、显色剂、底物、酶试剂，厦门海荭兴仪器股份有限公司。

1.2 仪器与设备

TRACE 1300（配火焰光度检测器，美国赛默飞世尔）;HHX-VD48NC农药残留检测仪（厦门海荭兴仪器股份有限公司）;JJ200 电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）;HY-4A 数显调速多用振荡器（杰瑞尔电器有限公司）;HSC-B水浴氮吹仪（天津市恒奥科技发展有限公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 快速检测方法

（1）快检试剂配制。缓冲液：将1袋缓冲液试剂倒入烧杯中，加入500 mL蒸馏水，溶解、混匀，室温保存。底物：向标有“底物”的试剂瓶中加入5.2 mL蒸馏水，溶解、混匀，0～5 ℃冰箱中冷藏贮存。显色剂：已配成溶液，可直接使用，0～5 ℃冰箱中冷藏贮存。酶试剂：向标有“酶试剂”的试剂瓶中加入5 mL蒸馏水溶解，2～4 ℃冰箱中冷藏保存。

（2）样液制备。称取2 g蔬菜样品（叶菜剪成宽1 cm菜样，块根菜取1 cm表皮样品，西红柿取整体浸提）放入三角瓶中，加入10 mL缓冲液，置于振荡器中振荡提取2 min。若提取液颜色较浅，直接转移至离心管中待测;若提取液较混浊，可离心至上层澄清后取上清液转移至离心管中待测;若提取液色素干扰严重，可加入0.1～0.5 g活性炭振荡5 min，再离心至澄清后转移至离心管中待测。

（3）样品测定。①将酶、显色剂、底物等倒入V型槽中。②用移液器在测试微孔板孔条内分别加入20 µL酶。③用移液器加入250 µL对照缓冲液或样品待测液。④将微孔板放入仪器中启动振板10 s，使酶和样品混匀，静置10 min，待酶试剂与缓冲液或待测液反应。⑤向微孔板加入10 µL显色剂。⑥再向微孔板加入10 µL底物，立即放入仪器测量。⑦仪器开机后以缓冲液为对照液，其他待测液依次测量。

（4）结果判定。试样抑制率≥50%时为阳性结果，试样抑制率<50%时为阴性结果。

1.3.2 气相色谱方法

（1）标准溶液配制。用移液器分别吸取一定量的敌敌畏等8种有机磷标准溶液，用丙酮逐一稀释配制成10 µg/mL的单一标准储备液，再根据各农药残留组分的检出限及最大残留限量用丙酮逐级稀释为8种有机磷农药残留组分的标准工作系列。

（2）试样前处理。准确称取25.0 g切碎、混匀的蔬菜试样于三角瓶中，加入50.0 mL乙腈，振荡提取30 min，用滤纸过滤，加入6 g氯化钠振摇1 min，待静置分层后，准确移取10.0 mL上层乙腈相，80 ℃下氮吹至近干，用丙酮溶解，并将备用液全部转移至10.0 mL比色管中，定容至5.0 mL，混匀待测。

（3）气相色谱条件。色谱柱：TG-17MS（30 m×0.53 mm，1.0 µm）;柱流量：10 mL/min;柱温：150 ℃保持2 min，以8 ℃/min升至250 ℃保持20 min;进样口温度：220 ℃;进样方式：不分流进样;进样量：1 µL;检测器FPD温度：250 ℃;H2流量：75 mL/min;Air流量：100 mL/min;尾吹流量：10 mL/min。

（4）样品测定。由自动进样器分别吸取标准工作系列与试样待测液注入色谱仪，以色谱峰保留时间定性，峰面积外标法定量。

2 结果与分析

2.1 实际样品不同检测方法的比较

按照1.3.1快速檢测方法和1.3.2气相色谱方法分别对40批次蔬菜样品（8种蔬菜各5批次）中农药残留进行测定，结果见表1。以气相色谱检测结果判定快检方法检测结果。对37批次快检阴性样品进行气相色谱检测，有1批次样品检测结果为阳性，该快检方法的假阴性率为2.7%。因此，经快检的蔬菜仍存在农药残留漏检隐患。原因可能是快检方法的检出限较高，样品中的农药残留含量低于快检最低检出量。对3批次快检阳性样品进行气相色谱检测，白菜（批次4）检出毒死蜱0.21 mg/kg，生菜（批次3）检出敌敌畏0.28 mg/kg和乐果0.41 mg/kg，茄子（批次3）样品为未检出有机磷农药，分析原因可能是茄子（批次3）中含有1.1中的8种有机磷农药以外的其他有机磷或氨基甲酸酯类农药。

2.2 标准溶液不同检测方法的比较

按照1.3.1快速检测方法对不同含量的敌敌畏、对硫磷、辛硫磷、甲胺磷、乐果、氧化乐果、毒死蜱和乙酰甲胺磷8种单一标准工作液进行测定，结果见表2。本研究中酶抑制快速检测方法对8种有机磷农药残留的灵敏度依次为敌敌畏、毒死蜱、辛硫磷、氧化乐果、对硫磷、乙酰甲胺磷、甲胺磷和乐果。

2.3 不同检测方法检出限的比较

以表2中8种有机磷农药残留的最低检出量为酶抑制快速检测方法的检出限，以3倍信噪比对应的有机磷农药残留目标物浓度计算气相色谱方法的检出限。快检方法的检出限分别为敌敌畏0.10 mg/kg、毒死蜱0.20 mg/kg、辛硫磷0.30 mg/kg、氧化乐果0.80 mg/kg、对硫磷1.00 mg/kg、乙酰甲胺磷1.15 mg/kg、甲胺磷2.00 mg/kg和乐果3.00 mg/kg;气相色谱法的检出限分别为敌敌畏0.01 mg/kg、毒死蜱0.02 mg/kg、辛硫磷0.30 mg/kg、氧化乐果0.02 mg/kg、对硫磷0.02 mg/kg、乙酰甲胺磷0.03 mg/kg、甲胺磷0.01 mg/kg和乐果0.02 mg/kg。因此，对硫磷、乙酰甲胺磷等4种农药残留组分快检方法的检出限≥1.00 mg/kg，超过国家标准GB 2763—2021规定的蔬菜中农药残留的最大残留限量，这也是导致快检中产生假阴性样品的原因[5]。

3 结论

综上所述，蔬菜中有机磷农药残留的快速检测方法基本与气相色谱检测方法的检测结果相符，快检方法使用成本低、检测速度快，在基层食品质量监管部门监控蔬菜质量中可作为现场检测的首选方法。但快检方法由于检出限较高，蔬菜基质复杂净化不完全等会导致假阴性和假阳性检测结果，基层食品质量监管部门抽检蔬菜时对超标批次样品应委托有资质的食品检验检测机构进行检验，省市级有检验能力的食品监管机构应加强蔬菜中易超标农药残留的重点检测，国家层面需完善相关农药残留快速检测的标准和规范，快检产品的生产研发企业应注重提升快检试剂盒、仪器的灵敏度和准确度，使快检方法能在基层食品安全抽检中发挥更大的作用。

参考文献

[1]刘姣，刘雪峰，樊宝娟，等.市售食品用农药残留快检试剂盒及仪器对18种中药材适用性验证[J].中成药，2017，39（2）：407-410.

[2]刘桂芳.蔬菜农药残留速测卡准确性和灵敏性的验证研究[J].河北省科学院学报，2016，33（1）：53-57.

[3]中华人民共和国农业部.蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定：NY/T 761—2008[S].北京：农业出版社，2008.

[4]中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测：GB/T 5009.199—2003[S].北京：中国标准出版社，2003.

[5]国家卫生健康委员会，农业农村部，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量：GB 2763—2021[S].北京：中国标准出版社，2021.