探索采用马铃薯全基质培养真菌在实验室中的应用

易筑刚，陈春旭，易金，蔡静云，王遵

(1.遵义市林业科学研究所,贵州 遵义 563000；2.遵义华粟环境设计工程有限公司，贵州 遵义 563000)

PDA培养基，即马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PotatoDextroseAgar Medium的简称)，是一种常用的基础培养基，能满足绝大多数真菌的基本生长要求。按传统方法制取马铃薯汁，其制备过程繁琐、耗时长，最主要的是扔掉了马铃薯大量的内含物和微量元素，造成极大浪费。

针对PDA培养基制备中的这些问题，市场上出现了直接用马铃薯淀粉或马铃薯浸出粉取代传统的马铃薯汁，如北京奥博星生物技术有限公司生产的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基和宁夏启元药业有限公司的霉菌培养基(专利申请号为：201310594078.6)都是采用马铃薯浸出粉代替马铃薯汁，马铃薯浸出粉是马铃薯的酶解产物，主要为微生物培养提供碳源和氮源。然而就其工艺流程来说，仍然除去了马铃薯的大部分淀粉和蛋白质等营养物质，最为主要的是生产成本高、价格相当昂贵，难以得到广泛应用。

因此，寻找一种操作简便、原料利用率高、成本低且效果较好的培养真菌方法，成为实验室工作急需解决的问题。为了解决现有技术中存在的上述技术问题，利用马铃薯富含营养物质和内含物特性，本文进行了马铃薯全营养基质培养真菌实验。

1 材料与方法

1.1 材料

松乳菇真菌纯培养液、马铃薯、滤纸、葡萄糖、中速双圈定性滤纸、载玻片、试管、打孔器。

1.2 方法

1.2.1 实验准备

(1)接种元制备：用打孔器将滤纸打成直径0.3 cm的圆片，得到接种元，将其装在试管内用胶塞塞紧管口；

(2)全营养基质制备：马铃薯洗净，切成7 cm×2.5 cm×0.2 cm切片；

(3)介质纸片制备：用中速双圈定性滤纸剪成8 cm×2.5 cm纸片；

(4)碳源制备：将葡萄糖、可溶性淀粉、80目熟玉米粉分别按40 g/L含量制备水溶液(ph值自然)

1.2.2 实验处理

(1)介质纸片在碳源溶液内充分浸湿，贴在全营养基质片上， 再贴放到载玻片上(介质朝上)， 用镊子装进试管内，沿管壁滴加1.5 mL相应碳源溶液，每种碳源设置3个重复，塞紧试管口；

(2)设置2种对照：一是用清水替换碳源溶液，二是直接用PDA固体培养基培养，分别设置3个重复；

(3)灭菌：将上述处理及接种元以0.103 MPa，121 ℃，高压蒸气灭菌30 min；

(4)接种：灭菌后的材料置无菌操作台中冷却至室温，将接种元放进真菌纯培养液内浸透，用接种针挑取接种元接种在培养介质上(2个接种元)，塞紧管口；

(5)培养：将接种好的试管，置相对湿度80%、温度28 ℃恒温恒湿培养箱内，介质纸片朝上倾斜20°～30°，静置培养。

1.2.3 观察记录

(1)采用定性描述方法记录各处理菌丝的平均生长情况，包括菌丝长度、菌丝致密程度以及菌丝扩散程度，间隔5 d记录一次，详见表1；

表1 实验观察记录

续表1 实验观察记录

(2)为便于比较它们的差异性，采取权重赋值方法分别给菌丝长度、菌丝致密程度以及菌丝扩散程度分别作0.2、0.5、0.3的权重赋值，根据记录情况对各处理分别计算其生长指数，详见表2；

表2 各处理生长指数表

2 结果与分析

本实验用3种碳源，即葡萄糖、可溶性淀粉、玉米粉通过滤纸与马铃薯结合培养，同时与2种对照设置一起培养，观察菌丝的生长情况(详见图1)。结果发现：(1) 初期阶段，即第5 d，PDA固体培养基菌丝生长好于其他培养；随着时间推移，其生长情况较其他碳源马铃薯基质培养情况呈下降趋势，到第10 d几乎持平，到第15 d马铃薯全基质培养的菌丝体浓密、健壮，明显优于PDA固体培养基；(2)不同碳源条件下马铃薯基质培养菌丝体生长呈现差异，即：葡萄糖>玉米粉>可溶性淀粉；(3)对照1初期阶段，菌丝生长很差，但10 d后其生长呈快速提高趋势。

图1 各处理生长指数图

3 结论与讨论

(1)传统PDA培养基在马铃薯汁熬制过滤过程中，一定损失了大量养分和微量元素，才导致其后续培养不像在马铃薯全基质条件下那样强劲，同时也论证了真菌的健壮生长离不开全面的营养物质。

(2)该实验为我们提供了一条新的既便捷，效果又好的培养真菌路径，同时对不同条件下培养菌丝生物量的测定提供了便捷方法。

(3)实验中松乳菇真菌经多次转接后，该方法可起到复壮该真菌的作用。

(4)本实验仅仅是用松乳菇真菌作的实验，对其他真菌是否有上述效果，仍需实验验证。

(5)对本实验不同碳源诱发松乳菇真菌在马铃薯基质上更快生长的机理需作进一步研究。