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气相色谱测定辣条中的脱氢乙酸

2022-03-23汪修意

食品安全导刊 2022年33期
关键词:辣条国标正己烷

贺 莹,汪修意,郭 纯,杨 华*

(1.湖南农业大学 生物科学技术学院,湖南长沙 410125;2.湖南省产商品质量检验研究院,湖南长沙 410029;3.湖南中医药大学第一附属医院,湖南长沙 410021)

辣条,是一类调味面制品,由于它的刺激口味和低廉价格,受到广大消费者的欢迎,特别是青少年[1]。然而,辣条制作工艺简单、许多制造商都属于无证经营,国家目前也还没有辣条的食品安全标准,很多不道德商家会非法添加防腐剂、色素、调味料等,导致辣条的食品安全有很大隐患[2-3],尤其是防腐剂的添加更为严重[4]。

脱氢乙酸作为一种防腐剂在辣条中应用较为广泛,其抗菌能力强,能有效抑制导致辣条变质的酵母菌和霉菌,并且食品的酸碱度和温度都不会使脱氢乙酸的抑菌能力受到影响,因此在辣条制作过程中应用较多[5]。然而,如果脱氢乙酸使用不当,会存在健康隐患,甚至会引起癌症[6-7]。因此对脱氢乙酸使用含量的规范尤为重要,但目前还没有专门对于辣条中脱氢乙酸检测方法的研究,建立辣条中脱氢乙酸的测定方法非常有必要。因此,本文在参考相关文献及国家标准《食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定》(GB 5009.121—2016)的基础上[8],探究检测辣条中脱氢乙酸含量的方法,为检测辣条中防腐剂的使用提供可行且准确的参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

辣条样品:用随机抽样法抽取的市售辣条;脱氢乙酸标准品:批号10048724,纯度≥99.5%,国药集团化学试剂有限公司;乙酸乙酯(色谱纯);正己烷(色谱纯);硫酸锌、氢氧化钠:分析纯,批号10017618,国药集团化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

Agilent GC 7890B(配有氢火焰离子化检测器,美国安捷伦科技有限公司);超声波清洗机KQ400DE(舒美牌KQ);超纯水仪(Pureloab Classic UVF);Z32HK 高速离心机(德国Eppendorf 公司);扣压摇摆式粉碎机16B(欧莱博);色谱柱19091N HP-INNO(Wax Polyethylene Glyco)。

1.3 试验方法

1.3.1 辣条的前处理

本试验为了探究提取辣条中脱氢乙酸的最优方法,将样本分为空白组、国标组、先定容组、去正己烷组、过碱组以及过酸组。其中,空白组的除不加样品以外,其他处理均与国标组一样,国标组处理方法依照《食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定》(GB 5009.121—2016)中的第一法气相色谱法;在此基础上,先定容组与国标组对照是超声前后的定容;去正己烷组与国标组的对照是萃取过程中是否添加正己烷;过酸组和过碱组与国标组的对照是pH值的不同。国标组的pH 值用氢氧化钠溶液(20 g·L-1)调整到7.5,过酸组的pH 值用盐酸溶液调至5.5,过碱组的pH 值用氢氧化钠调至9.5。辣条中脱氢乙酸的不同提取方法见表1。

表1 辣条中脱氢乙酸的不同提取方法

1.3.2 气相色谱条件

色谱柱:Agilent19091N-133(30 m×0.32 mm,0.25 µm);19091N HP-INNO Wax Polyethylene Glyco 260 ℃;柱温升温程序:初始温度为150 ℃,以10 °C·min-1速率升至210 °C, 以20 °C·min-1速率升至 240 °C,保持2 min;载气(氮气)流量:1.0 mL·min-1;进样方式:分流进样,分流比为10 ∶1;进样体积:1.0 μL;流速:14 mL·min-1;检测器温度:300 ℃;进样口温度:240 ℃;运行时间:9.5 min。

1.3.3 标准曲线的制作

制备脱氢乙酸标准溶液:用称量纸称取脱氢乙酸标准品0.100 0 g(精确至0.000 1 g)后,将称好的标准品置于100 mL 烧杯中,加少许乙酸乙酯,玻璃棒搅拌溶解后,转移到100 mL 容量瓶中,用乙酸乙酯定容。标准系列稀释浓度分别为1 μg·mL-1、10 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、200 μg·mL-1、300 μg·mL-1、400 μg·mL-1。将配好的溶液用滤膜过滤后移至进样瓶中,每个浓度进样1.0 µL 于气相色谱仪中,测定脱氢乙酸每个浓度的峰高。以脱氢乙酸浓度为x轴,峰高为y轴制作标准曲线图。

1.3.4 辣条样品的测定

将已经制好的辣条样品提取液过滤之后,注入到进样瓶中,根据1.3.2 的色谱条件设定后进行测定,色谱仪器软件根据相应的回归方程,直接得到辣条样品中脱氢乙酸的浓度。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

由图1 可知,在1 ~400 µg·mL-1内,脱氢乙酸的回归方程为y=0.882 185 69x-3.198 356 7,R2=0.999 66,具有较好的线性关系。

图1 脱氢乙酸标准曲线图

2.2 辣条样品前处理优化

2.2.1 辣条超声处理方式对提取脱氢乙酸含量测定的影响

GB 5009.121—2016 方法一中规定试样中脱氢乙酸的提取方式为试样超声之后再定容,然而在实际试验中发现,由于辣条极易吸水膨胀,存在超声时可流动水溶液不够现象,导致超声提取效果并不好。因此,本文针对此问题进行了改进,在超声之前进行定容,保证容器内除了辣条本身吸收的水分外,还有可流动的水溶液进行超声,并且超声完毕后,补足蒸发掉的水分,用涡混仪混匀后,再来进行下一步试验。

由表2 可知,相比于本方法的先定容组,国标组测得的辣条样品中脱氢乙酸的含量要低,其可能原因是辣条极易吸水膨胀,导致超声时提取溶剂不够,影响辣条中脱氢乙酸的提取效果,而本试验改进后的方法可以更有效地提取辣条中的脱氢乙酸,使脱氢乙酸的检测结果更加准确。

表2 辣条提取方式对脱氢乙酸含量测定的影响

2.2.2 辣条pH 值对脱氢乙酸含量测定的影响

在GB 5009.121—2016 方法一中,样品溶液需要配制20 g·L-1氢氧化钠溶液调节pH 值至7.5,但理论上脱氢乙酸性状稳定,不易受酸碱环境影响。因此,本文推测检测辣条中脱氢乙酸含量不会受酸碱度的影响。为了验证结果,从而简化检验步骤,本实验使用气相色谱仪测定样品中脱氢乙酸含量。

由表3 可知,国标组与过酸组和过碱组所测得的辣条中脱氢乙酸含量相差不大,其可能原因是脱氢乙酸本身性状稳定,不易受酸碱环境的影响,因此在提取过程中可不加盐酸或者氢氧化钠来调节酸碱度。

表3 辣条pH 对脱氢乙酸含量测定的影响

2.2.3 辣条中油脂对脱氢乙酸含量测定的影响

在GB 5009.121—2016 方法一中,样品溶液超声定容后,为了去除样品溶液中的油脂,将样液移入分液漏斗中,加入5 mL 正己烷。然而,实际操作过程中,油脂去除时,使用的有机溶剂会对辣条中脱氢乙酸的含量有损耗。因此,本实验使用气相色谱-火焰离子化检测器测定样品中的脱氢乙酸含量,并将国标组与去正己烷组进行对比。

由表4 可知,国标组相对于去正己烷组,所测的辣条中脱氢乙酸含量更低,其可能原因是使用正己烷来萃取油脂中脱氢乙酸会有大量耗损,而采用本方法去除油脂时不加正己烷,使其静置直至水油分层,这样操作同样能去除油脂,并且不会造成辣条中脱氢乙酸的损耗,使得检测结果更准确。

表4 辣条提取方式对脱氢乙酸含量测定的影响

2.2.4 本试验最优方法提取辣条中脱氢乙酸含量的结果

通过以上试验得到最优方法为将辣条用粉碎机粉碎,称取样品3 g(精确至0.001 g),再将样品放置于50 mL 离心管中,在样品中加2.5 mL 硫酸锌溶液(120 g·L-1),加纯水定容到25 mL,超声提取15 min 后,由于蒸发部分水分,再补加纯水到 25 mL。将容量瓶静置10 min 后,取上清样液移到分液漏斗中,振荡1 min,静置分层后,避开上层油脂,取下层水相移入15 mL 离心管中,用高速离心机4 000 r·min-1离心10 min,静置1 min 后,取上清液10 mL,再加1 mL 盐酸溶液(1+1,体积比)后,加5.0 mL 乙酸乙酯溶液,用涡混仪振荡2 min,静置5 min,待分层后,取上清液过滤之后用于气相色谱测定。用本方法检测辣条中脱氢乙酸的含量。由表5可知,国家标准方法测得的辣条中脱氢乙酸含量偏低,可能原因是辣条中脱氢乙酸未完全被提取出来;且脱氢乙酸在提取过程中有损耗,而本方法在一定程度上降低了这些可能性,因此检测结果更准确。

表5 辣条中脱氢乙酸含量对比

2.3 检出限

在辣条样本中加入低浓度的脱氢乙酸标准溶液,本试验方法的检出限是信噪比为3 时相对应的浓度,定量限为信噪比为10 时相对应的浓度。通过本方法测得辣条中的脱氢乙酸的检出限为0.001 09 g·kg-1,而GB 5009.121—2016 中规定的脱氢乙酸检出限为0.001 g·kg-1,本方法的检出限与国标中的检出限数值相近,因此可说明本方法测得的脱氢乙酸检出限符合国家标准方法。图2、图3 为本方法实验条件下的检测结果,其中图2 是脱氢乙酸标准液的色谱图,图3 是某品牌辣条中脱氢乙酸的色谱图,可表明本方法用于检测辣条中脱氢乙酸具有良好的分离度,便于脱氢乙酸峰的辨认和精准定量。

图2 脱氢乙酸标准品色谱图

图3 某品牌辣条色谱图

2.4 回收率及精密度试验

随机取3 份不同品牌辣条样品,每份辣条样品中加入3 个不同浓度的脱氢乙酸溶液用气相色谱仪进行测定,每个浓度平行测定6 次。由表6 可知,脱氢乙酸的回收率为82.6%~94.9%,RSD 为1.13%~1.79%。

表6 样品加标回收率与精密度表(n=6)

3 结论

为测定辣条中脱氢乙酸的含量,本文通过优化辣条样品的前处理,建立了一种高效、准确并且环保的气相色谱分析检测方法。经过重复验证,本方法的相对标准偏差是1.13%~1.79%,而回收率是在82.6%~94.9%,本方法回收率高,重复性好,测定结果准确,达到了市场上辣条中脱氢乙酸检测的质控要求。

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