异叶青兰生药学研究

谭金华，张炜，范莹莹，拜礼文，肖华，骆桂法，李玉林，陈涛，海平*

(1.青海大学医学院，青海 西宁 810016；2.青海省药品检验检测院/青海省中藏药现代化研究重点实验室/国家药品监督管理局中药藏药质量控制重点实验室，青海 西宁 810016;3.中国科学院西北高原生物研究所,青海 西宁 810008)

异叶青兰为民族地区常用藏药材，藏文名为“吉孜青保”，中文名为“白花枝子花”，现收载于《卫生部药品标准》(藏药)第一册，为唇形科植物异叶青兰DracocephalumheterophyllumBenth.的干燥地上部分，具有泻肝清热的作用，藏医常用于治疗黄疸性肝炎，口腔溃疡等疾病[1]。其生长于海拔2 km以上的山坡草地或河滩地。产地集中在西藏、青海、甘肃等地[2]。异叶青兰成分主要有挥发油类、萜类化合物、黄酮类和苯丙素类等[3-5]。《晶珠本草诠释》[6]《中国藏药》[7]《中国藏药材大全》[8]等古籍中记载异叶青兰均具有治疗口腔溃疡和抗炎的疗效。现代药理研究表明，异叶青兰具有抑制心肌肥大、抗高血压、抗炎、抗病毒等药理作用[9-12]。

在《晶珠本草诠释》[6]和《藏药志》[13]中记载个别藏医亦用甘西鼠尾草及黄花鼠尾草代替异叶青兰入药。异叶青兰在七十味松石丸、参蛤平喘胶囊等中藏药制剂中均有使用。异叶青兰作为组方药味，质量控制研究基础薄弱，现行标准中仅有性状、理化鉴别项，质量标准不完善，现对异叶青兰进行生药学研究，以期为提高异叶青兰质量标准提供更科学全面的控制依据。

1 材料

1.1 仪器

SZX-16体式荧光显微镜(日本奥利巴斯株式会社)；BX53生物显微镜(日本奥利巴斯株式会社)；HistoCore MULTICUT轮转式切片机(徕卡公司)；AUW220D电子天平(日本岛津公司)；CPA225D电子天平(德国赛多利斯公司)；Milli-Q超纯水系统(德国默克公司)；DK-S16恒温水浴锅(上海森信实验仪器有限公司)。

1.2 试药

异叶青兰为野外采集及企业提供，均由青海省药品检验检测院杨凤梅主任药师鉴定。齐墩果酸对照品(110709-201607，纯度91.7%)；迷迭香酸对照品(批号：111871-202007，纯度≥98.1%)、木犀草素对照品(批号：111520-200504)均购自中国食品药品检定研究院；甲醇(色谱纯，德国默克股份有限公司)，水为超纯水。药材来源信息详见表1。

表1 异叶青兰药材样品来源

2 方法与结果

2.1 性状鉴定

青海省药品检验检测院标本馆馆藏异叶青兰溯源腊叶标本(采集号632822140731118)于2014年7月采于青海省都兰县夏日哈镇国米村(鉴定人：骆桂法主任药师、赵国福副主任药师)。将采集到的12批次异叶青兰药材样品(表1)按照《中国植物志》第65(2)卷[14]鉴定，并与溯源腊叶标本比对，总结生药学特征有：茎四棱形，密被倒向的小毛；茎下部叶具长柄，叶片宽卵形至长卵形，先端钝或圆形，基部心形，下面疏被短柔毛或几无毛，边缘被短睫毛及浅圆齿；茎中部叶与基生叶同形，具与叶片等长或较短的叶柄，边缘具浅圆齿或尖锯齿；茎上部叶变小，叶柄变短，锯齿常具刺而与苞片相似;轮伞花序生于茎上部叶腋，花具短梗；苞片较萼稍短，倒卵形或倒披针形，疏被小毛及短睫毛，边缘每侧具3～8个小齿，齿具长刺;花萼浅绿色，外面疏被短柔毛，下部较密，边缘被短睫毛，2裂几至中部，上唇3裂至本身长度的1/3或1/4，齿几等大，三角状卵形，先端具刺，下唇2裂至本身长度的2/3处，齿披针形，先端具刺;花冠黄白色，外面密被白色或淡黄色短柔毛，二唇近等长。结论为收集的12批次样品植物基原与《中国植物志》[14]记载相符，与溯源腊叶标本比对结果一致，均属于唇形科植物异叶青兰DracocephalumheterophyllumBenth.，鉴定结果经杨凤梅主任药师复核确认无误。标本、原植物及各部位见图1。

标本照片

2.2 显微鉴别

2.2.1 横切面鉴别

使用HistoCore MULTICUT生物轮转式切片机对异叶青兰进行茎横切和叶横切，并对各个部位进行标注，发现叶表皮存在大量细胞晶体，结果见图2。

茎横切面

2.2.2 粉末显微鉴别

采用BX53生物显微镜对12批异叶青兰进行粉末显微鉴别(每批3～5片)，筛选出具有专属性的显微特征(图3A～M)。导管多为螺纹导管，见图3A；花粉粒类圆形，表面雕纹不明显，见图3B；叶下表皮细胞垂周壁弯曲，气孔不定式或不等式，见图3C；非腺毛存在于异叶青兰全身，在微绒毛部位较多，具有1～4个细胞，见图3D；花粉囊内壁细胞类椭圆形或类多角形，壁呈突起状增厚，见图3E；花表皮细胞，见图3F；花萼表皮细胞淡黄色，垂周壁波状弯曲，见图3G；栅状细胞，形状伸长成柱状，见图3H；叶片及茎中大量存在橙皮苷结晶，有偏光性，略呈扇形或不规则形，见图3I～J；花冠细胞类圆形，颜色鲜艳呈粉红色，见图3K；种皮细胞，棕黄色，形状不规则，见图3L；油滴，呈圆球形，见图3M。

2.2.3 种子鉴别

选取异叶青兰种子置于SZX-16体式荧光显微镜上进行观察，见图4。种子体积小，长约2 500 μm，宽约1 200 μm。呈黑色或棕色，圆锥形或者锥形，先端较尖，表面有微绒毛，背部有两黑色条纹，均分平面，正面中线均分种子，两侧内凹，有形如月牙白色种脐。

种子背面

2.3 薄层鉴别

2.3.1 齐墩果酸的鉴别

方法：取本品粉末0.5 g，加甲醇25 mL，超声20 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法2020年版《中国药典》四部通则0502试验，吸取上述供试品和对照品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，再喷以10%硫酸乙醇试液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光(365 nm)下检视。结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。见图5。

注：1.齐墩果酸对照品;2.青海湖海北藏族自治州;3.祁连县八宝镇;4.刚察县沙柳河镇;5.门源浩门镇;6.湟源县河南村;7.互助北山林场;8.海晏县金银滩;9.湟中县上新庄;10.海晏县三联村;11.共和县。以上地点均隶属于青海省。图5 齐墩果酸薄层色谱

2.3.2 迷迭香酸，木犀草素的鉴别

方法：取本品粉末1 g，置于100 mL锥形瓶中，精密加入50%乙醇溶液50 mL，低温冰浴超声1 h，摇匀，过滤，置水浴锅上50 ℃蒸干，残渣加50%乙醇溶解并转移至10 mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。另取迷迭香酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液；木犀草素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法2020年版《中国药典》四部通则0502试验，吸取上述供试品10 μL,迷迭香酸对照品8 μL，木犀草素4 μL，分别点于同一默克板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(2∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，再喷以3%三氯化铝试液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光(365 nm)下检视。结果：木犀草素供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点，迷迭香酸供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，青海湖、门源浩门镇、海晏县金银滩、海晏县三联村显示相同斑点，其余地方颜色相对较浅。见图6。

3 小结

作者在薄层研究中，参考了2020版中国药典第一册的研究方法，在方法上进行改进，得到了现在的薄层研究结果，该研究的创新点为将迷迭香酸和木犀草素同时在一张薄层板展示，迷迭香酸斑点深浅差别较大，应为各采集地点迷迭香酸含量较大。通过轮式切片机以及生物显微镜对异叶青兰进行了显微研究，在茎横切面和叶横切面中指认了表皮、厚角组织、韧皮部等，并通过粉末显微鉴别，找到了花粉囊内壁细胞、花粉粒、栅栏组织、气孔、非腺毛等特征细胞。

异叶青兰未见薄层，显微等相关文献研究。通过原植物的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴以期为藏药材异叶青兰的质量评价及标准制定提供参考。