用全自动化学发光免疫分析仪联合PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的价值研究

刘元钟

（电子科技大学医学院附属绵阳市中心医院医学检验科，四川 绵阳 621000）

乙型病毒性肝炎是临床上常见的一种疾病，是指患者因感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）而发生的肝脏病变。该病的传染性较高。该病患者的临床症状主要是乏力、恶心及肝区疼痛，并可伴有不同程度的肝功能损害，病情严重的患者甚至会发生肝硬化及感染[1]。乙肝两对半是判定是否发生HBV感染的血清免疫标志物。全自动化学发光免疫分析仪可用于检测乙肝两对半。HBV是一种双链DNA病毒。临床上可根据患者血清中HBV-DNA的含量判定其是否患有乙型病毒性肝炎。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增仪可用于进行HBV-DNA定量检测[2-3]。本文主要是探讨使用全自动化学发光免疫分析仪联合PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本文的研究对象为2020年1月至2021年2月期间电子科技大学医学院附属绵阳市中心医院收治的186例疑似患有乙型病毒性肝炎的患者。在这些患者中，有男性患者105例，女性患者81例；其年龄为15～78岁，平均年龄为（46.50±31.50）岁。本次研究经该医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

本次研究中使用的主要仪器和试剂为全自动化学发光免疫分析仪（品牌：西门子，型号：ADVIA Centaur CP）及配套试剂、PCR扩增仪（品牌：莱恩德，型号：LD-PCR）及配套试剂。在清晨使用真空负压采血管采集患者5 m L的空腹静脉血。将血液标本放在水浴箱中10 m in。用离心机以4000 r/m in的速度对血液标本进行离心处理。将血清低温保存。为所有患者均使用全自动化学发光免疫分析仪进行乙肝五项检测，然后根据检测结果判定其是否患有乙型病毒性肝炎。检测乙肝五项的方法是：按照试剂盒的说明书，使待检血清分别与包被乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙 型 肝 炎 病毒表面抗体（hepatitis B virus surface antibody，HBsAb）、乙 型 肝 炎 病 毒e抗 原（hepatitis B virus e antigens，HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（hepatitis B virus e antibody，HBeAb）及 乙 肝病毒核心抗体（hepatitis B virus core antibody，HBcAb）的顺磁颗粒结合，并向其中添加吖啶酯标记抗体复合物。用全自动化学发光免疫分析仪观测复合物出现的发光反应。乙肝五项检测结果为阳性的标准为：患者的血清HBsAg定量≥0.5 IU/m L、HBsAb定量＞10.00 MIU/m L、HBeAg定量＞0.100 IU/m L、HBeAb定量＞0.20 IU/m L或HBcAb定量＞0.60 IU/m L。若为这些患者使用全自动化学发光免疫分析仪检测乙肝五项的结果为阳性，则可判定其患有乙型病毒性肝炎。为所有患者均使用PCR扩增仪进行HBV-DNA定量检测，然后根据监测结果判定其是否患有乙型病毒性肝炎。进行HBV-DNA定量检测的方法是：在待检血清中加入100 μL的裂解液，混匀后静置10 min，离心25 s，去除上层清液。在获得的溶液中加入150μL的洗涤液，混匀后静置10 m in，离心25 s，去除上层清液。在获得的溶液中再次加入150μL的洗涤液，混匀后静置10 m in，离心25 s，去除上层清液。在获得的溶液中加入30 μL的反应液，并放入PCR扩增仪中。将荧光猝灭基团标记探针与荧光报告基团标记探针分别添加在HBV-DNA模板的两端，用Taq酶降解探针作为引导。当两个基团的抑制作用消失后，根据该荧光信号测定HBV-DNA的含量。HBV-DNA检测结果为阳性的标准为：患者血清中HBV-DNA的水平＞1000 copy/m L。若为这些患者使用PCR扩增仪检测HBV-DNA的结果为阳性，则可判定其患有乙型病毒性肝炎。

1.3 观察指标

观察为这些患者单独使用全自动化学发光免疫分析仪、单独使用PCR扩增仪、联合使用全自动化学发光免疫分析仪和PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的结果、敏感度、特异度和准确度。

1.4 统计学方法

对本次研究中的数据均采用SPSS 21.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比（%）表示，采用χ²检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 为这些患者使用全自动化学发光免疫分析仪诊断乙型病毒性肝炎的结果

为这些患者使用全自动化学发光免疫分析仪诊断乙型病毒性肝炎的结果显示，有119例患者患有乙型病毒性肝炎，有67例患者未患有乙型病毒性肝炎。详见表1。

表1 为这些患者使用全自动化学发光免疫分析仪诊断乙型病毒性肝炎的结果（例）

2.2 为这些患者使用PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的结果

为这些患者使用PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的结果显示，有123例患者患有乙型病毒性肝炎，有63例患者未患有乙型病毒性肝炎。详见表2。

表2 为这些患者使用PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的结果（例）

2.3 为这些患者使用全自动化学发光免疫分析仪联合PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的结果

2.4 为这些患者使用三种方法诊断乙型病毒性肝炎的效能

为这些患者使用全自动化学发光免疫分析仪联合PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的结果显示，有133例患者患有乙型病毒性肝炎，有53例患者未患有乙型病毒性肝炎。详见表3。

表3 为这些患者使用全自动化学发光免疫分析仪联合PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的结果（例）

与单独使用全自动化学发光免疫分析仪或PCR扩增仪相比，为本研究中的患者联合使用全自动化学发光免疫分析仪和PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的敏感度、特异度及准确度均较高，P＜0.05。详见表4。

表4 为这些患者使用三种方法诊断乙型病毒性肝炎的效能（%）

3 讨论

乙型病毒性肝炎是临床上常见的一种传染病。HBV的传染源主要是乙型病毒性肝炎患者及HBV携带者，传播方式包括母婴传播、血液传播及性传播。乙型病毒性肝炎患者病情的潜伏期可受到病原体种类、数量及个人免疫状态等因素的影响[4-5]。乙肝五项的检测指标可反映出患者感染HBV后的免疫状态。全自动化学发光免疫分析仪是临床上常用于检测乙肝两对的仪器，可利用化学发光法确定血液内是否存在HBsAg、HBsAb、HBeAg、HbeAb及HBcAb，为临床诊治乙型病毒性肝炎提供依据[6-7]。相关的研究结果显示，使用全自动化学发光免疫分析仪诊断乙型病毒性肝炎的准确率较高[8]。但使用全自动化学发光免疫分析仪诊断乙型病毒性肝炎无法准确地判定患者体内HBV复制及传染的情况，因此存在一定的漏诊率及误诊率。HBV属于DNA病毒，依靠HBVDNA完成复制。乙型病毒性肝炎患者体内HBVDNA的含量越高，表示其体内HBV的复制越活跃，其病情的传染性越强[9-10]。PCR扩增仪是一种可用于定量检测特定DNA片段的仪器。使用PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎可将微量的HBVDNA大幅度扩增并测定受检品中HBV-DNA水平，为临床诊断乙型病毒性肝炎提供依据[11-12]。将全自动化学发光免疫分析仪和PCR扩增仪联合用于诊断乙型病毒性肝炎，可使两种仪器相互弥补诊断过程中的不足之处，大大提高诊断的效能。

本次研究的结果证实，与单独使用全自动化学发光免疫分析仪或PCR扩增仪相比，联合使用全自动化学发光免疫分析仪和PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的敏感度、特异度及准确度均较高。