女贞子中齐墩果酸和熊果酸含量提取转移率研究

施栋磊 缪琦 袁清风

【中图分类号】R282 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）05--01

女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。冬季果实成熟时采收，除去枝叶，稍蒸或置沸水中略烫后，干燥;或直接干燥。其性味甘、苦、凉， 归肝、肾经。具有滋补肝肾、明目乌发的功效[1]。随着现代药理学和临床医学的不断发展和进步，发现女贞子不但具有保肝、改善视力的作用，还具有抗病毒、治疗绝经后骨质疏松[2]、免疫调节[3]、促进生长增强体质[4]等功能。《神农本草经》将其列之为上品，是名副其实的。目前， 从女贞子中分离到的主要化合物为苯乙醇类、裂环环烯醚萜类、三萜类及黄酮类， 其中齐墩果酸和熊果酸是女贞子中主要脂溶性成分，也是女贞子的活性成分， 两者属五环三萜类化合物， 结构极为相似。齐墩果酸毒性很低，具有多种生物活性：抗病毒、消炎、增强免疫和免疫调解、抑制血小板凝集、降血脂、降糖、保肝、护肾、抗艾滋病毒等作用[5-7]熊果酸毒性小， 具有多种生物学活性， 尤其是在抗肿瘤、抗氧化、保肝、降血脂方面作用显著[8-10]。为了提高女贞子的利用率，会将女贞子进行炮制，研究表明酒制女贞子中齐墩果酸含量升高[11]。本文比较了使用女贞子生药材与炮制品、轧扁粉碎与不粉碎、采用不同提取溶剂的时候齐墩果酸和熊果酸的提取转移率的差异，以指导女贞子用于中药制剂时提取工艺提供科学依据。

1材料与方法

1.1实验仪器

高效液相色谱仪（Agilent 1260），色谱柱（Kromasil 100-5C18， 4.6×250mm，5µm），电子天平（梅特勒，ME204）、药材粉碎机、超声波清洗器、数显恒温水浴锅。

1.2实验材料

中药女贞子和酒制女贞子均购自当地药材批发公司，各考察了三个不同批号;齐墩果酸对照品和熊果酸对照品均购自中国食品药品检定研究院;甲醇和磷酸为色谱纯，购自默克公司;三乙胺为分析纯，购自西陇科学化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1女贞子含量测定

2.1.1对照品溶液的制备

精密称取熊果酸与齐墩果酸对照品适量，加甲醇分别制成每1ml中含熊果酸50μg和齐墩果酸150μg的溶液，即得。

2.1.2供试品溶液的制备

取女贞子粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml， 称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3高效液相色谱方法

色谱条件：高效液相色谱仪;色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相：甲醇-水-磷酸-三乙胺（87：13：0.2：0.04）;检测波长：214nm：温度：25℃，流速：1.0ml/min。理论板数按齐墩果酸计应不低于10000。熊果酸与齐墩果酸分离度符合要求（≥1.5）。

2.1.4女贞子含量结果

2.2女贞子提取工艺

2.2.1提取工艺方法

将女贞子粉碎处理或者不粉碎400g，加入3倍量不同浓度的乙醇，浸泡2小时，回流提取1.5小时（完全沸腾后计时），趁热滤过，收集醇提液，药渣再用相同方法醇提1次1.5小时，合并醇提液，浓缩，定量至100ml，即得女贞子提取液。

2.2.2按照正交表设计试验

2.2.3提取液含量测定的方法

2.2.3.1对照品溶液的制备

对照品溶液同2.1.1

2.2.3.2供试品溶液的制备

提取液充分摇匀，精密量取10ml至25ml容量瓶中，甲醇超声溶解即得。

2.2.3.3高效液相色谱方法

高效液相色谱方法同2.1.3

2.2.4正交试验结果

2.3正交实验结果分析

正交试验结果显示， 3个因素对齐墩果酸和熊果酸转移率的影响不同， 以极差大小比较， 3个因素影响主次顺序为乙醇浓度、粉碎与否、药材或酒制， 由各列均值之和分析得最佳提取工艺为A2B1C1， 即酒制女贞子，经粉碎前处理，60%乙醇提取。

2.4正交试验验证

將酒制女贞子粉碎处理，加入3倍量60%乙醇，之后的工艺同2.2.1，得到提取液。用高效液相色谱法检测齐墩果酸和熊果酸含量，计算得出总转移率。

验证试验结果如下：

3讨论

对于中药制剂生产企业，选择中药提取溶剂时，在安全有效的前提下，主要考虑有效成分的溶出和成本之间的平衡。齐墩果酸、熊果酸为三萜类成分， 主要分布在女贞子的脂溶性提取液中[12] 。通过60%乙醇和80%乙醇的提取率比较，一方面验证了在60%乙醇作为提取溶剂时，有利于齐墩果酸和熊果酸能更充分溶出;一方面也为制剂企业节约了提取成本。

药材前处理在提取环节占据着重要的作用，根据药材本身具有的质地，女贞子为质地较硬实的果实，不经碎制处理影响有效成分的提取。

在选择女贞子药材或者饮片酒制品时，企业也可以权衡投入成本，从本文试验数据中，用女贞子药材经粉碎前处理，提取溶剂选择60%乙醇，齐墩果酸和熊果酸转移率为64.74%，并不比最佳提取工艺转移率低很多;另外，正交实验结果也显示药材或者酒制的影响程度较小，故企业在选择时候，可以权衡女贞子采购的成本和提取液转移率之间的关系。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部[S].北京：中国医药科技出版社， 2020：47-48.

[2]Pang ZT， Zhou ZY， Wang W， et al.The advances in research on the pharmacological effects of Fructus Ligustri Lucidi[J].Biomed Res In， 2015， 281873：1.

[3] 张明发， 沈雅琴.女贞子抗炎、抗肿瘤和免疫调节作用的研究进展 [J].现代药物与临床， 2012， 27 （5） ：536.

[4] 张明发， 沈雅琴.女贞子及其活性成分促生长增体质作用的研究进展[J].药物评价研究， 2016， 39 （3） ：474.

[5]赵晶晶， 陈素华， 方建国， 等.齐墩果酸抗豚鼠巨细胞病毒作用体外实验研究[J].时珍国医国药， 2011， 22 （12） ：2 862-2 864.

[6]张明发， 沈雅琴.齐墩果酸和熊果酸保肝药理作用的研究进展[J].抗感染药学， 2012， 9 （1） ：13-19.

[7]朱慧琼， 池鸿斐.齐墩果酸片对于围绝经期综合征免疫功能的改善作用研究[J].现代中西医结合杂志2013， 22 （14） ：1 491-1493.

[8]刘训华， 吕高飞， 张太平， 等.熊果酸的抗肿瘤作用[J].江苏医药， 2007， 33 （2） ：202-204.

[9]卢静， 张博超， 姜玮， 等.熊果酸抗氧化性能的研究[J].食品工业科技2009， 30 （4） ：126-127.

[10]林科， 张太平， 张鹤云， 等.山楂中熊果酸的提取及其对小鼠的降血脂作用[J].天然产物研究与开发， 2007， 19 （6） ：1 052-1054.

[11]李曼曼，刘永，不同炮制方法对中药女贞子化学成分的影响[J].中西医结合研究 .2020（03）：165-167.

[12]姚卫峰， 陈汀， 张丽， 等.女贞子醇提物不同极性部位的体外抗氧化活性研究[J].中国实验方剂学杂志， 2011， 17 （22） ：138-140.DOI：10.3969/j.issn.1005-9903.2011.22.040.

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