马桑叶药材质量标准的初步研究*

陈桃香，吴海燕，黄申琴，胡成刚

(贵州中医药大学药学院，贵州 贵阳 550025)

马桑来源于马桑科植物马桑CoriariasinicaMaxim多年生落叶小乔木或灌木植物，又称醉鱼草、扶桑。目前对马桑的研究相对较少，现有的研究中表明它具有一定的药用价值，马桑具有清热解毒、活血、祛风通络的功效，叶用于烫伤、黄水疮、肿毒等，研究表明马桑的叶中含有的槲皮素Q、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖(Q-Ara)等成分具有抗炎的功效[1]。马桑资源丰富，广泛分布于地中海以东至日本、新西兰、中南美洲。在我国很多省份和地区皆有马桑的分布，例如河南、四川、贵州、云南、湖南、陕西、甘肃等[2]。目前，笔者未见国家及地方标准收载马桑，调研发现多数民族地区以马桑叶入药，为适应中药材质量监督管理要求，加强该药材质量的控制，本实验建立了相关质量标准，为其规范使用提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

UV-2700紫外可见分光光度计(岛津仪器有限公司)；MODEL BX43F 光学显微镜(配成像系统)；电子天平(型号：FA1004N，厂家：上海菁海仪器有限公司)；电热鼓风干燥箱(型号：GZX-9070MBE，厂家：上海博迅实业有限公司医疗设备厂)；恒温水浴锅(型号：HWS-24型，厂家：上海一恒科学仪器有限公司)；暗箱式紫外分析仪(型号：ZF-20D，厂家：巩义市予华仪器有限责任公司)；真空干燥箱(上海博迅实业有限公司)；人工智能气候箱(型号：RQX-400B，厂家：常山市华普达教学仪器公司)；硅胶G薄层板。

1.2 材料

马桑药材均采自贵州省，共10个批次(详细信息见表1)，由贵州中医药大学药学院标本馆胡成刚教授鉴定为马桑科马桑属植物马桑CoriariasinicaMaxim的叶。槲皮素对照品(批号：C09S8Y43412，厂家：上海源叶生物科技有限公司，纯度≥98%)，乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯化铝均为分析醇。

表1 样品信息表Tab.1 Sample information

2 方法与结果

2.1 性状鉴别

本品为椭圆形或阔椭圆形，叶对生，纸质至薄革质，长3～10 cm，先端急尖，基部圆形，全缘，两面无毛或沿脉上疏被毛，基出3脉，弧形伸至顶端，在叶面微凹，叶背突起；叶短柄，长1～3 mm，疏被毛，紫色，基部具垫状突起物。

2.2 显微鉴别

叶粉末呈黄绿色。显微镜下观察呈黄绿色，可见少量单细胞和多细胞的非腺毛，有各种导管及纤维束，组织细胞及叶碎片少许，表面可见平轴式气孔，可以作为鉴定马桑药材真伪的鉴定依据。见图1。

图1 马桑药材粉末显微鉴定图Fig.1 Microscopic identification of the powder ofmedicinal Coriaria sinica leaves

2.3 TLC鉴别

2.3.1 供试品、对照品溶液的制备

精密称取马桑药材粉末5 g，置于250 mL的圆底烧瓶中，加60 mL60%乙醇，加热回流提取两次，每次1 h，过滤，合并滤液，即为供试品溶液[3]。另外精密称取槲皮素对照品5 mg，用60%乙醇溶液制成1 mL含0.5 mg的对照品溶液。

2.3.2 方法

按照2015版《中国药典》四部通则薄层色谱法(通则0502)[4]，分别吸取槲皮素对照品溶液和马桑药材的供试品溶液适量，点于已经活化及饱和后的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干后，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，置于365 nm紫外光灯下检视，在硅胶板上，槲皮素对照品溶液与不同产地的马桑样品在相应位置显示清晰颜色相同的荧光斑点，分离效果及重复性良好，具体见图2。

图2 十个产地马桑叶药材薄层鉴别图Fig.2 TLC identification of medicinal Coriaria sinica leaves from 10 producing areas

2.4 检查与浸出物的测定

按照2015版《中国药典》中各通则项下的实验要求，通则0832水分测定法(烘干法)、2302灰分测定法(总灰分和酸不溶性灰分测定法以稀盐酸测定酸不溶性灰分)、2201浸出物测定法(热浸法测定醇溶性浸出物，以75%乙醇为溶剂)测定[4]，结果见表2。

表2 样品水分、总灰分酸不溶性灰分和浸出物含有测定结果(%，n=3)Tab.2 Determination results of the contents of moisture，total ash，acid-insoluble ash and extract(%，n=3)

2.5 槲皮素的含量测定

2.5.1 对照品溶液的制备

取槲皮素对照品适量，精密称定，加60%乙醇溶液制成每1 mL中含3.2 μg槲皮素对照品溶液。

2.5.2 供试品溶液的制备

精密称取马桑粉末0.5 g，加60%乙醇超声0.5 h，冷却补重，过滤，移取0.1 mL续滤液置25 mL的容量瓶中，定容，即可得到供试品溶液[5]。

2.5.3 检测波长选择

将对照品溶液、供试品溶液分别在400～700 nm波长范围内扫描，发现供试品在274 nm处的吸收峰与对照品在257 nm处吸收峰的峰形相似，与结合所查文献资料槲皮素含量测定所选择波长254 nm及256 nm相比较，选择257 nm作为马桑叶中槲皮素含量测定的波长。

2.5.4 线性关系考察

精密称取槲皮素标准品2 mg，置于100 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶解，定容至刻度摇匀。分别取2 mL、3 mL、5 mL、10 mL、12 mL、16 mL置于25 mL容量瓶定容至刻度。按照紫外分光光度法(《中国药典》2015年版四部)，在257 nm的波长处测定吸收度，以吸光度为纵坐标，槲皮素质量浓度为横坐标，得到线性回归方程为Y=61.631X+0.0867(r=0.9997)，槲皮素质量浓度在1.6～12.8 μg/mL范围内，吸光度与浓度呈良好的线性关系。

2.5.5 精密度实验

取“2.5.1”项下制备的槲皮素对照品溶液适量，在紫外分光光度计257 nm波长下连续测定6次，RSD值为0.34%，仪器精密度良好。

2.5.6 稳定性实验

取“2.5.2”项下供试品溶液分别在10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min内测定吸光度，槲皮素含量为0.25%，RSD值为0.25%，表明样品溶液在60 min内稳定。

2.5.7 重复性实验

取马桑粉末(过二号筛)6份，精密称定，按照“2.5.2”项下的方法制备供试品，测得槲皮素含量为2.57%，RSD值为2.32%，表明该方法重复性良好。

2.5.8 加样回收实验

精密称取已知槲皮素含量的马桑粉末6份各0.25g，置于锥形瓶中，分别加入槲皮素对照品0.7 mg，按照上述“2.5.2”项下方法提取，测定其吸光度，计算槲皮素含量及回收率，槲皮素回收率在95.41%～100.33%范围内，平均回收率为97.63%，RSD值小于3%，结果见表3。

表3 槲皮素回收率结果(n=6)Tab.3 Quercetin recovery results(n=6)

2.5.9 样品含量测定

精密称取各产地马桑粉末0.5 g，平行3份，按“2.5.2”项下的方法操作，测其吸光度，计算槲皮素含量，实验结果表明不同产地的马桑药材的2-甲氧基1，4-萘醌的含量差异较大，其中，含量最高的为铜仁松桃采集的样品，含量为0.35%；含量最低的为花溪区采集的样品，含量为0.202%，10个批次样品平均含量为0.28%，结果见表4。

表4 不同产地凤仙花的含量测定(n=3)Tab.4 Content determination of quercetin in medicinal Coriariasinica leaves from different producing areas(n=3)

3 结论与讨论

本次研究分别从定性鉴别、定量测定两部分对马桑进行了研究，马桑药材比较常见，外观辨识度较高，因此主要对马桑粉末进行显微鉴定，并对10批次的马桑药材水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物进行测定，最终拟定马桑药材各检查指标含有量为水分不超过17.0%，总灰分不超过11.0%，酸不溶性灰分不超过0.72%，醇溶性浸出物不低于33.0%。

在实验研究中，对薄层展开剂、温度、湿度等条件进行考察，选择以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，常温常湿条件下，置于365 nm紫外光灯下检视。同时，考察了提取溶剂浓度、提取时间、料液比等3个单因素，在单因素考察的基础上，运用正交实验设计方法优选出马桑中槲皮素成分提取的最佳提取方法为60%乙醇，料液比为1∶12，提取时间为1 h。根据文献报道及紫外扫描显示，最大吸收波长选择257 nm作为其检测波长。