高效液相色谱法测定烫发类化妆品中巯基乙酸的方法学验证

严筱楠，高 霞，高 娟

(榆林市药品检验所，陕西 榆林 719000)

随着人民生活水平的提高，人们对自我形象管理意识越来越强，烫发已成为提升自我形象的一种普遍风尚，因此烫发类产品的质量直接关系到消费者的使用安全。巯基乙酸及其盐类作为烫发类产品的主要功效成分，通过使头发中角朊的多肽链上侧链的二硫化物键断裂，致使头发中胱氨酸的部分二硫基还原至半胱氨酸，发生一系列化学变化，使头发柔软，起到头发卷曲定型的功效[1-3]，但其毒性较大，易对人体皮肤和多种组织器官造成损伤[4-7]，《化妆品安全技术规范》(2015年版，以下简称安全技术规范)将其列为限用物质，限度为一般用总量≤8%(以巯基乙酸计)，专业用总量≤11%(以巯基乙酸计)[8]。本文结合实际检测工作条件，通过对方法的检出限、精密度、重现性和回收率进行考察，证明该方法操作简单，并具有较高的灵敏度和选择性，可满足化妆品的分析要求。

1 仪器与试药

Agilent 1260Ⅰ高效液相色谱仪(紫外检测器)，美国安捷伦公司；MS205DU电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；旋涡混匀器，德国IKA公司；超声波清洗器，浙江昆山超声仪器有限公司；PURELAB flex 2超纯水机，英国ELGA公司。

巯基乙酸对照品(STBF3702V，纯度99.1%)，乙腈(色谱纯)，均为Sigma-Aldrich西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司；磷酸二氢钾(分析纯)，盐酸(分析纯)，磷酸(优级纯)，均为天津市科密欧化学试剂有限公司；测试样品为市售三种不同品牌烫发类化妆品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

WelchC18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，检测波长：215 nm，流速：1.0 mL/min，进样量：20 μL，柱温：30 ℃，流动相：乙腈-0.01 mol/L KH2PO4(磷酸调节pH至2.5)(8:92)。

2.2 样品处理

精密称取样品0.5 g(精确到0.0001 g)于25 mL具塞刻度管中，加入20 mL乙腈水溶液(乙腈:水10:90)，涡旋使样品分散，超声(功率：400 W)提取15 min，取出，冷却至室温后用乙腈水溶液定容至25 mL刻度，混匀，取上层溶液，经0.45 μm有机滤膜过滤，滤液用乙腈水溶液稀释10倍，稀释液作为待测溶液，备用。

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线

准确称取巯基乙酸对照品0.13879 g置100 mL棕色容量瓶中，用10%乙腈水混合溶液溶解定容至刻度，配置成1000 μg/mL标准储备液，常温保存，3 d内稳定。精密吸取上述标准储备溶液，分别配制成0.687675 μg/mL、1.37535 μg/mL、2.75070 μg/mL、6.87675 μg/mL、13.7535 μg/mL、27.5070 μg/mL、68.7675 μg/mL、137.535 μg/mL、275.070 μg/mL的巯基乙酸标准系列溶液，临用时现配。混匀后，经 0.45 μm滤膜过滤，进样测定。以峰面积对浓度回归得标准曲线，Y=3.705C-0.685，相关系数为0.99999。结果表明，巯基乙酸在0.687675～275.070 μg/mL范围内，线性关系良好。

2.3.2 检出限与定量下限

取系列标准溶液最低浓度点(std1)，进样，按信噪比S/N≥3计算，巯基乙酸检出限为0.003 μg，按信噪比S/N≥10计算，巯基乙酸定量限为0.012 μg。

2.3.3 精密度

取巯基乙酸系列标准溶液的中间点(std5)，在相同的条件下，连续进样9次，计算峰面积的相对标准偏差为0.3%。

2.3.4 回收率

选择其中一批巯基乙酸含量较低的烫发类化妆品(A品牌，批号：20190828)为样品，加入不同量的巯基乙酸标准储备溶液，按照3.2的方法处理样品，根据3.3.1的标曲进行测定，计算回收率，结果见表1，符合回收率要求。

表1 巯基乙酸加标回收率结果Table 1 The recovery rate of Thioglycolic acid

2.3.5 重复性

按照3.2的样品处理方法，处理样品(B品牌，批号：20191016)6份，测定样品中巯基乙酸的含量，结果见表2，表明方法重复性良好。

表2 巯基乙酸重复性测定结果Table 2 Repeatability test results

2.3.6 实际样品的测定

按照本文的方法对市售不同品牌烫发剂(生化烫、离子烫)中巯基乙酸进行检测，主峰与相邻杂质峰分离度满足要求，基质干扰小(见图1～图3)，实验结果与样品标签标识成分吻合，均未超过安全技术规范规定的限度，表明此方法可用于烫发类化妆品中巯基乙酸的测定。

图1 样品A色谱图Fig.1 The chromatogram of sample A

图2 样品B色谱图Fig.2 The chromatogram of sample B

图3 样品C色谱图Fig.3 The chromatogram of sample C

3 结 论

(1)按照安全技术规范，流动相为乙腈-0.01 mol/L KH2PO4(磷酸调节pH至2.5)比例为10:90时，部分样品中巯基乙酸主峰与相邻杂质峰的分离度不满足要求，通过减少有机相比例，分离度满足要求，故流动相比例调整为乙腈-0.01 mol/L KH2PO4(磷酸调节pH至2.5)(8:92)。

(2)与离子色谱法比较，高效液相色谱法测定巯基乙酸的灵敏度更高，检出限低、线性范围宽[9]，本文所建立的测定方法，比安全技术规范中线性范围更宽，跨度为2000倍，且回收率试验符合要求，可以满足日常化妆品监管的要求。