一种测定蜂产品中氟胺氰菊酯残留量的方法

杨熙，周漪波，郭鹏然，林泽鹏，张云龙

1. 广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心），广东省化学危害应急检测技术重点实验室，广东省保健食品功效成分检测与风险物质快速筛查工程技术研究中心（广州 510220）；2. 广东康信检测科技有限公司（广州 510530）

蜜蜂是与人类以及大自然关系密切的社会性昆虫，它们不仅可以为人类提供营养丰富的蜂产品，还可以通过授粉模式维持生态平衡，对保护和维持生物多样性起着重要作用[1]。我国是世界第一养蜂大国。蜂蜜中农药残留源于受杀虫剂、除螨剂污染的蜜源植物，最主要的农药是拟除虫菊酯类氟胺氰菊酯（fluvalinate）、氟氯苯氰菊酯（flumethrin）和溴螨酯（bromopropylate）等[2]。氟胺氰菊酯因对蜜蜂低毒而对蜂螨有极强的杀伤力，被常用于螨害的防治中[3]。氟胺氰菊酯（fluvalinate），化学名为N-[2]-氯-4-（三氯四基）苯基]D-缬氨酸（±）-α氰基-3-酚氧苯基）-甲基酯，是我国传统用于防治蜂螨的拟除虫菊酯类杀螨剂[4]。氟胺氰菊酯最初注册的产品英文名为“Fluvalinate”，该产品是4个立体异构体的混合物[5]。而对于氟胺氰菊酯污染后存在于蜂蜜及蜂产品制品中的具体含量无法估计，只能靠有效的方法对其进行测定。我国GB 2763—2019《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》[6]对氟胺氰菊酯残留于蜂蜜及蜂产品制品中没有规定限量指标。美国EPA（Environmental protection agency）环保总局认为氟胺氰菊酯具有发育和生殖的毒性，欧盟也将其列入可疑内分泌物干扰名单，世界各国均对蜂产品中的氟胺氰菊酯残留量做出严格限定，欧盟对蜂蜜中氟胺氰菊酯的限量值定为0.01 mg/kg，美国和日本为0.05 mg/kg[7]，因此对于氟胺氰菊酯残留量的检测是有必要的。

目前，能够检测氟胺氰菊酯的方法有很多，比如GB 23200.95—2016[8]、农业部781号公告-9—2006[9]、NY/T 761—2008[10]等。前两种标准方法处理步骤繁琐、消耗溶剂量大且不利于环保、耗时较长，不适用于大批量检测。而NY/T 761—2008不适用于此次的检测对象。还有一些学者所用到的气相色谱方法[11-13]等几种方法检测的蜂产品不够全面，且检出限比此次建立的方法稍高，所以试验建立了一种选择性高、定性良好、检出限低、准确定量、操作简单的分析方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 7890B气相色谱仪配电子捕获检测器（ECD）；XW-80A微型涡旋混合仪（上海泸西分析仪器有限公司）；TDZ5-WS离心机（湖南塞特湘仪科技有限公司）；N-EVAP氮吹仪（美国Organomation）；50 mL离心试管（美国Labcon Perform RTM）；100 mL烧杯、10 mL比色管（天波玻璃仪器有限公司）；Sartor电子天平（Sartorius）。

100 μg/mL氟胺氰菊酯（农业部环境保护科研监测所）；1 000 mg/6 mL弗罗里硅土净化柱（山东青云耗材有限公司）；石油醚（沸点60～90 ℃）、丙酮、无水硫酸钠（广州化学试剂厂）。

1.2 试验方法

1.2.1 蜂蜜及蜂王浆样品处理方法

称取10 g（精确至0.000 1 g）样品置于50 mL离心试管中，加入10 mL蒸馏水混匀，加入25 mL石油醚-丙酮（4∶1，V/V）在微型漩涡混合仪振荡2 min，将有机相溶剂转移到100 mL烧杯，反复3次提取，合并所有提取液，经无水硫酸钠干燥，在氮吹仪上（水温45 ℃）浓缩至少2 mL左右，过弗罗里硅土净化柱，用10 mL溶剂分数次清洗，最后氮吹之后定容5 mL，供气相色谱分析。

1.2.2 蜂蜜样品处理方法

称取5 g（精确至0.000 1 g）样品置于50 mL离心试管中，加5～10 g无水硫酸钠搅匀，加入25 mL石油醚-丙酮（4∶1，V/V）在微型漩涡混合仪振荡2 min，将有机相溶剂转移到100 mL烧杯，反复3次提取，合并所有提取液，经无水硫酸钠干燥，在氮吹仪上（水温45 ℃）浓缩至少2 mL左右，过弗罗里硅土净化柱，用10 mL溶剂分数次清洗，最后氮吹之后定容5 mL，供气相色谱分析。

1.2.3 蜂粉样品处理方法

称取5 g（精确至0.000 1 g）样品置于50 mL离心试管中，加入25 mL石油醚∶丙酮（4∶1，V/V）在微型漩涡混合仪振荡2 min，将有机相溶剂转移到100 mL烧杯，反复提取3次，合并所有提取液，经无水硫酸钠干燥，在氮吹仪上（水温45 ℃）浓缩至少2 mL左右，过弗罗里硅土净化柱，用10 mL溶剂分数次清洗，最后氮吹之后定容5 mL，供气相色谱分析。

1.2.4 蜂胶样品处理方法

称取5 g（精确至0.000 1 g）样品置于50 mL离心试管中，于50 ℃水浴加热至溶液黏稠液状态时，加入5～10 g无水硫酸钠搅匀，加入25 mL石油醚∶丙酮（4∶1，V/V）在微型漩涡混合仪振荡2 min，将有机相溶剂转移到100 mL烧杯，反复3次提取，合并所有提取液，经无水硫酸钠干燥，在氮吹仪上（水温45 ℃）浓缩至少2 mL左右，过弗罗里硅土净化柱，用10 mL溶剂分数次清洗，最后氮吹之后定容5 mL，供气相色谱分析。

1.3 色谱条件

色谱柱HP-5 MS（30 m×320 μm×0.25 μm）；柱温150 ℃，以12 ℃/min升至280 ℃保持8 min，进样口240 ℃；采用不分流进样，进样量1 μL；FPD检测器300 ℃；载气为氮气，流量2 mL·min-1。

2 结论与探讨

2.1 溶剂的选择

可以用来作为提取溶剂的试剂有很多，如石油醚、正己烷、二氯甲烷、丙酮等。对几种溶剂的筛选，经过多次试验得出的结论：正己烷价格较高，长期使用成本高，为节约成本考虑不适用；二氯甲烷则沸点偏低，在浓缩过程中会导致挥发过快而对待测组分产生影响，会出现回收率不高的情况；而最终选用石油醚及丙酮是因为样品本身含有一定量的水分，和丙酮溶剂不能完全分开，加入一定比例的石油醚之后能够使它分层，并且石油醚价格相对较低，沸点也不会太高，最终选用石油醚及丙酮作为提取溶剂。

2.2 色谱柱选用及分离效果

在1.3小节的色谱条件下，采用毛细管柱HP-5 MS及DB 1701在电子捕获检测器分析后，两种色谱柱的分离效果均可以清晰地看到氟胺氰菊酯的峰型良好、无出现拖尾峰、无干扰，达到良好的分离效果。因分离效果不相上下，2种色谱柱均适用。但由于之前参考农业部781号公告-9-2006标准使用的色谱柱就是HP-5 MS，最终选择HP-5 MS。目标物峰的分析时间在27 min以内就全部出峰，由此可见色谱条件及色谱柱选用均是可行的。氟胺氰菊酯及阳性样品、空白样品色谱峰见图1。

2.3 测定结果

按照该方法对29种蜂蜜及多种蜂产品制品进行测定分析，得出的结果见表1。该方法对多种蜂产品进行测定结果与最新国标方法GB 23200.95—2016检测结果相比较，并没有出现差异，结果偏差在6%以内，样品呈阳性图谱详见图1。由该方法检测结果与国标方法对比之后更加证实了该方法的可行性和实用性，相比于国标方法，该方法更加节约时间、节约成本，检出限更低，更为高效。

图1

表1 该方法对多种蜂产品测试结果

2.4 标准曲线、线性范围、相关系数及检出限

将100 μg/mL氟胺氰菊酯标准溶液分别稀释成质量浓度0.025，0.050，0.10，0.20，0.50和1.00 μg·mL-1线性标准溶液，上样分析。以峰面积（Y）对应质量浓度（X）进行回归分析，计算出相应的回归方程。以3倍信噪比基线噪声为10 Pa·s，样品取样量10 g或5 g，定容体积5 mL，3倍信噪比计算该方法的检出限，结果见表2。可以看出，该方法回归方程及相关系数各项参数结果良好，检出限也要低于目前现行标准[8-9]的检出限，满足29种蜂蜜及蜂产品制品的测定研究，以及为目前国内检测氟胺氰菊酯残留量提供参考。

表2 氟胺氰菊酯的线性关系、相关系数及检出限

2.5 回收率及精密度

取10 g蜂蜜阴性样品进行加标试验，以线性浓度中间浓度3个点0.050，0.20和0.80 μg/mL为加标浓度，加标量为1 mL（即绝对含量为0.050，0.20和0.80 μg），按照1.2小节的方法进行处理分析，每个加标浓度做平行样6次（即n=6），根据标准对照品的保留时间定性，外标法定量，计算出3个加标浓度共18次平行加标的平均回收率和相对标准偏差SRSD），分析结果详见表3。结果显示，该方法精密度和准确度、重复性良好，能够满足对氟胺氰菊酯残留的检测分析。

表3 各加标浓度平均值、平均回收率及相对标准偏差（n=6）

3 结论

该方法与现行标准[8-9]相比，通过优化前处理，可以节省时间，使分析速度更快；通过改变色谱条件，使分离度更好，也使峰型变得尖锐。该试验建立了一种测定蜂产品中氟胺氰菊酯残留量的气相色谱法。试验表明：这种方法能够准确定性定量，且回收率高、精密度和重复性良好、操作简便、节约成本，也体现了该方法的适用性，为今后氟胺氰菊酯的研究提供了一种参考方案。