潍坊市售鸡蛋中灭蝇胺残留水平分析

谷翠梅 王丹

摘 要：目的：对潍坊市售鸡蛋中灭蝇胺的残留水平进行分析。方法：选取了潍坊12个县市区市场上销售的鸡蛋，对其中的灭蝇胺通过UPLC-MS/MS分析技术进行监测。结果：空白基质的加标回收率皆在56.0%～86.0%，相对标准偏差（RSD）为4.4%～9.60%。线性回归方程的相关系数r为0.999 5，表明经过MCX阳离子交换固相萃取方法处理过的灭蝇胺残留量检测在1.0～200.0 ng/mL范围内，线性关系良好。以3倍信噪比计算得到检出限为0.73 ?g/kg，10倍信噪比算得定量限为2.19 ?g/kg。试验证明，MCX阳离子交换固相萃取前方法可以作为本次研究鸡蛋中灭蝇胺残留量的检测方法。连续抽检近3年潍坊市售鸡蛋样品60份，检出2份样品中含有灭蝇胺，检出率为3.33%，残留量分别为0.22 mg/kg、0.15 mg/kg，均超出国家标准限量值。结论：鸡蛋中灭蝇胺有检出，且多出自夏季样品，跟季节性添加剂的使用有一定关系，检测值高于国家限量标准，应该引起人们的重视。畜牧养殖合规合法的饲料添加剂使用还需更规范，相关人员应加强监管力度。

关键词：鸡蛋;灭蝇胺;残留水平

Abstract： Objective： To analyze the residue level of Cyromazine in eggs sold in Weifang .Methods： Eggs sold in the markets of 12 counties and cities in Weifang were selected， and the Cyromazine was monitored by UPLC-MS/MS analysis technology. Results： The recoveries of blank matrix were in the range of 56.0%～86.0%， and the relative standard deviation （RSD） was in the range of 4.4%～9.60%. The correlation coefficients r of linear regression equation were 0.999 5 respectively， which showed that the detection of Chlorphenamine residues treated by McX cation exchange solid phase extraction had a good linear relationship in the range of 1.0～200.0 ng/mL. The detection limit calculated by 3 times signal-to-noise ratio is 0.73 ?g/kg， 10 times signal-to-noise ratio， the quantitative limit is 2.19 ?g/kg. The results show that the method before MCX cation exchange solid phase extraction can be used as a method for the determination of Chlorphenamine residues in eggs. 60 egg samples sold in Weifang City in recent three years were sampled continuously， and two samples were detected to contain Cyromazine， the detection rate was 3.33%， and the residues were 0.22 mg/kg and 0.15 mg/kg respectively， which exceeded the national standard limit. Conclusion： Cyromazine was detected in eggs， mostly from summer samples， which is related to the use of seasonal additives. The detection value is higher than the national limit standard， which should attract our attention. The use of legal feed additives in animal husbandry needs to be more standardized， and relevant personnel should strengthen supervision.

Keywords： egg; cyromazine; residual level

環丙氨嗪，又名灭蝇胺，环丙氨嗪在动物急性毒理实验中有很高的剂量效应关系，在慢性、亚慢性毒理实验中，环丙氨嗪能够造成实验动物体重下降，肝肿大，血液中血红蛋白、血细胞数减少，使动物胎儿骨骼发育迟缓、胎儿体重减轻、存活率下降[1]。近几年，环丙氨嗪被广泛地添加到动物饲料中用于控制动物厩舍内蝇蛆的生长发育，虽然取得了较好的效果，但鉴于环丙氨嗪的毒理性作用，我国2019年发布的《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》规定环丙氨嗪在禽产品中的最高残留限量为0.05 mg/kg。

目前国内普遍常用的检测方法多为农业行业标准推荐方法——高效液相色谱法[2]，本研究建立灵敏度较高的MCX阳离子交换固相萃取-超高效液相色谱/串联质谱法检测鸡蛋中的环丙氨嗪[3-4]，可作为鸡蛋中灭蝇胺药物残留量测定的技术参考，也可作为本次研究中调查潍坊市售鸡蛋中灭蝇胺残留情况的技术支持。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

超高效液相色谱三重四极杆串联质谱联用仪Aglient1290-6460，离心机（ST16R，Thermo）;氮吹仪（NEVAP，美国）;色谱柱（Aglient RRHD Eclipse plus-C18），固相萃取仪，恒温水浴锅。

1.2 材料与方法

甲醇（CH3OH）：色谱纯，甲酸（HCOOH），乙酸铵（CH3COONH4），氨水（浓度25%～28%），标准品：灭蝇胺（Cyromazine，CAS：66215-27-8），灭蝇胺-13C3（Cyromazine-13C3）同位素内标，Waters MCX小柱60 mg/3 mL。

1.3 试验方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱（Aglient RRHD Eclipse plus-C18）（100 mm×3.0 mm，1.8 ?m）;流动相A为0.05%甲酸水，流动相B为乙腈;洗脱程序为0～1 min，50% B;1～3 min，60% B;3～6.5 min，95% B;6.5～7.6 min，25% B;7.6～8.5 min，50% B;流速0.3 mL/min;柱温40 ℃;进样量10 ?L。

1.3.2 质谱条件

多反应监测正离子扫描模式，参数为干燥气温度300 ℃，流速为5 L/min;雾化器压力为40 psi;鞘气温度400 ℃;流速为11 L/min;毛细管电压为4 000 V;喷嘴电压为500 V。灭蝇胺的质谱参数见表1。

1.3.3 样品前处理

（1）样品制备。取适量鸡蛋，去壳后高速匀浆混合均匀，分装后于-18 ℃以下保存备用。

（2）样品提取和净化。①提取。称取5 g（精确到0.01 g）均质后的试样于50 mL离心管中，加入50 ?L内标工作液、10 mL甲醇和0.05 mL甲酸，涡旋振荡10 min，再超声提取10 min。之后8 000 r/min离心5 min，上清液待净化。②净化。MCX柱预先用2 mL甲醇、2 mL水和1 mL甲醇活化。取离心后的上清液1.5 mL上柱，待快流干时依次用2 mL甲醇、2 mL水和1 mL甲醇淋洗，弃去所有淋洗液，之后用2.5 mL 2%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，于50℃氮吹近干，加1 mL的0.1%甲酸10%甲醇水溶液溶解残渣，过0.22 ?m滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。

1.3.4 溶液配制

（1）内标和标准储备液配制。分别准确称取内标和标准品0.010 0 g，置于两个10 mL容量瓶中，加5 mL水和20 ?L甲酸溶解，用甲醇定容至刻度，浓度均为1 mg/mL，-20 ℃保存，有效期12个月。

（2）标准工作液配制。取适量标准储备液，用甲醇逐级稀释，配制成浓度为1 ?g/mL的标准工作液，-20 ℃保存，有效期6个月。

（3）内标工作液配制。取适量内标储备液，用甲醇逐级稀释，配制成浓度为1 ?g/mL的内标工作液，-20 ℃保存，有效期6个月。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的制作

取适量标准工作液，用0.1%甲酸、10%甲醇水溶液配制浓度为1.0～200.0 ng/mL的标准系列溶液，每mL标准溶液中加入10 ?L内标工作液，得到相当于鸡蛋中浓度为1.0～200.0 ?g/kg的标准工作系列溶液（按5 g样品加入50 ?L内标工作液计算），进样测定。以标准和内标定量离子对峰面积比值为纵坐标，浓度为横坐标绘制工作曲线，得到标准曲线回归方程、工作标准曲线及线性范围，见图1。相关系数R2为0.999 5，符合国标要求。

2.2 回收率和精密度试验

在空白基质中按0.5 ?g/kg、1.0 ?g/kg、5.0 ?g/kg和10.0 ?g/kg 4种浓度添加标准物质，并按照上述选定的分析条件进行测定，平行进样6次。测得回收率和精密度，结果见表2。

由表2可知，本法检测鸡蛋中灭蝇胺，添加标准品低、中、高浓度的回收率范围为56.0%～86.0%，精密度为4.4%～9.6%，符合国标要求。

2.3 方法的检出限和定量限

采用向空白基质中添加目标化合物的方法进行检测，进样瓶中样品浓度为5.00 ?g/L，取样量为5 g，定容至10 mL。以3倍信噪比（S/N）所对应的被测化合物的含量作为方法的检出限，以10倍信噪比所对应的被测化合物的含量作为方法的定量限。結果见表3，可知，本法灭蝇胺检出限为0.73 ?g/kg，定量限为2.19 ?g/kg，符合国标要求。

2.4 样品检测结果

由表4、表5可知，抽检市售鸡蛋样品60份，其中采集正规超市、农贸市场样品各30份。按照本文中的方法进行检测，共检出2份样品中含有灭蝇胺，均来源于农贸市场，不合格率为为6.67%，残留量为0.22 mg/kg、0.15 mg/kg，超出国家标准限量值[5]，正规超市样品合格率为100%。通过对检出样品的季节分析发现，夏季样品检出率高，可能与季节性灭蝇饲料添加有关。

3 结论与讨论

本研究采用方法线性回归方程的相关系数R2为0.999 5，空白基质的加标回收率在56.0%～86.0%，相对标准偏差（RSD）在4.4%～9.60%。检出限为0.73 ?g/kg，定量限为2.19 ?g/kg。试验证明，MCX阳离子交换固相萃取前方法各项指标符合国标要求，可以作为本次研究鸡蛋中灭蝇胺残留量的检测方法。试验样本来自于潍坊12个县市区的各大商超和集贸市场，涵盖多个季节的样品采集，共采集60批次鸡蛋样品。其中农贸市场采集样品30份，检出2份样品中含有灭蝇胺，均超过国家标准限量，且检出样品集中在夏季，相关人员考虑有季节性添加的因素。综合检出率虽然不高，但仍然应该引起重视，也提醒人们应加强养殖单位及个人对于国家相关法律法规的学习和贯彻;合理使用兽药，严格按照国家规定进行添加;加强禁用兽药的管理，提高食品安全意识，从源头进行控制;加强集贸市场的食品流通管理，为消费者提供一个安全的食品环境。

参考文献

[1]曾丹，徐桂云，魏红刚，等.蛋鸡饲料中添加灭蝇胺在鸡蛋中的残留[C]//中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）.石家庄：中国畜牧兽医学会，2009：178.

[2]中华人民共和国农业部.蔬菜中灭蝇胺残留量的测定 高效液相色谱法：NY/T 1725—2009[S].北京：中国标准出版社，2009.

[3]CARBRAS P，MELINI M，SPANEDDA L.High performance liquid chromatographic separation of cyromazine[J].Journal of Chromatography A，1990，505（2）：413-416.

[4]Yokley R A， Mayer L C， Rezaaiyan R， et al. Analytical method for the determination of cyromazine and melamine residues in soil LC-UV and GC-MSD[J].J Agric Food Chem.，2000，48：3353-3358.

[5]中华人民共和国农业农村部，国家卫生健康委员会，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量：GB 31650—2019[S].北京：中国标准出版社，2019.