结核感染T 细胞检测用于肺结核诊断的临床价值研究

吴亚光，王洁，李亚明

宜兴市人民医院检验科，江苏宜兴 214200

肺结核属于临床常见慢性肺部传染性疾病之一，是由感染结核分枝杆菌所致，严重影响患者日常工作、学习及生活。肺结核疾病症状较为复杂，部分患者症状表现较为隐匿，缺乏典型性，因此容易出现漏诊、误诊情况。每年3 月24 日为世界肺结核病防治日，据2020 年数据统计结果显示，全球新增肺结核病患者数量超过987 万例，发病率约127/10 万，我国新增肺结核病患者数量约84 万例，发病率约59/10 万[1]。及早鉴别诊断肺结核对疾病预防、控制与治疗具有重要作用。目前临床鉴别诊断肺结核疾病的方法较多，其中以痰培养结合分枝杆菌方式诊断结果为金标准，但前者对患者造成一定伤害，后者则需要较长时间的病原菌培养，操作复杂。因此，找寻一种结果准确、不对患者造成伤害、操作简单的诊断方法成为临床深入研究的内容[2]。医学研究发现，患者感染肺结核分枝杆菌后，会对T 细胞形成刺激，提高其活性，因此可通过结核感染T细胞检测技术鉴别诊断肺结核疾病。本文选取2021 年2—12 月宜兴市人民医收治的150 例疑似肺结核患者进行研究，分析结核感染T 细胞检测技术的应用与效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院接诊的疑似肺结核病住院患者150 例为研究对象，男、女分别为86 例、64 例；年龄31～76岁，平均（55.24±3.59）岁；初中及以下文化程度49例，高中文化程度65 例，大专及以上文化程度36例。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：均为首次疑似肺结核疾病；均同意配合本次诊断研究。

排除标准：合并免疫系统疾病患者；合并重度感染患者；沟通障碍、临床资料缺失或排斥本研究患者。

1.3 方法

结核抗体检验方法：在非空腹状态下即可完成外周静脉血样采集，采血点为肘窝主静脉，每人采集血样8 mL 即可。使用结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂，以胶体金法对血样中的结核杆菌抗体进行检测。取反应板，在中间孔内加入封闭液，共2 滴即可，等待薄膜将其吸入。随后取血清样本，共40 μl，加入中间孔中，等待薄膜将其吸入。随后依次加入吸活液、金标液，分别为6 滴、2 滴，待金标液被薄膜吸入后，再加入洗涤液共6 滴。观察薄膜吸入后的检测结果，如质控点显示为红色，反应孔的中间部位出现红色的斑点，则说明检测结果为阳性；如质控点显示为红色，反应孔的中间部位并无红色斑点，或仅为少量红色痕迹，则说明检测结果为阴性。

结核感染T 细胞检测方法：使用完全相同的采血方式，每人采集血样量为8 mL 左右，将其放入含有抗凝物质的真空试管内，于规定时间转运至检验科，所有操作均需在采血后8 h 内完成。要求操作全程均需在生物安全柜内完成，按照手柄方向，由左至右分别在三孔培养板内滴入对照培养液（N）、阳性对照培养液（P）、检测培养液（T），每孔内各加入100 μl 样本，并做好标记。取血样样本，缓慢上下颠倒3～5 次，使其充分混匀后分别滴入三孔内，每孔各1 mL 全血样本。滴入样本后将培养板上盖旋紧，确认无误后取出生物安全柜，并转移至恒温培养箱内孵化，箱内环境温度设定为37℃，连续孵化16～24 h 即可，整个过程中需保持培养板水平放置。培养完成后检查培养板上盖是否旋紧，确认无误后转移回生物安全柜内，静置1 min 以上。缓慢旋开上盖，将每个孔内的上清液吸出部分，开展IFN-γ 检测。注意吸取检验样本时不得深入细胞层，以免出现溶血现象。

将采集的上清液样本置入安图全自动免疫分析设备内，于450 nm 处测量吸光度，再根据试剂盒上的校准品绘制标准曲线图，从而获得IFN-γ 指标。①如N<10 U/mL，且T 和N 的差值<0.438，或>0.438 但低于N 值的25%，P 和N 的差值超过0.625，则说明样本为阴性，可能不存在结合感染T 细胞免疫反应。②如N<10 U/mL，且T 和N 的差值>0.438，并超过N 值的25%，则说明样本为阳性，可能存在结合感染T 细胞免疫反应。③如N<10 U/mL，且T和N 的差值<0.438，或>0.438 但低于N 值的25%，但P 和N 差值<0.625，则样本检测结果不确定。④如N值>10 U/mL，则不论其他检验值如何，检验均为失败，需重新对血样进行检查。

1.4 观察指标

以临床综合诊断诊断结果作为金标准，分别记录两种检测方法所得结果，计算两种检测方法灵敏度、特异度及准确度。灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100.00%；特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100.00%；准确度=（真阳性例数+真阴例数）/总例数×100.00%。

1.5 统计方法

采用SPSS 23.0 统计学软件处理数据，计数资料用[n(%)]表示，差异比较采用χ2检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法的诊断结果分析

150 例疑似肺结核住院患者经临床综合诊断结果显示，45 例患者确诊为肺结核疾病，占比30.00%，105 例患者结果为阴性，占比70.00%。见表1。

表1 两种方法的诊断结果分析

2.2 两种方法的灵敏度、特异度、准确度对比

结核感染T 细胞检测的灵敏度、特异度及准确率度均高于结核抗体检验，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 两种诊断方法的灵敏度、特异度、准确度对比（%）

3 讨论

肺结核病是目前呼吸系统传染性疾病之一，其主要是由于肺部感染结核分枝杆菌所引发的慢性传染性病变，以肺结节的发病率较高。其中结核菌体以呼吸道内的气溶胶为载体，借助空气传播至外界，可在一定时间内保持感染性，当其他人在含有感染源气溶胶的环境内呼吸，便可将结核分枝杆菌吸入呼吸道中，若自身为易感人群，则发生肺结核的概率会更高[3-4]。当结核分枝杆菌吸入人体后，免疫系统便会对其产生特异性的应答反应，刺激机体合成相应的抗体，将结核分枝杆菌快速杀灭和清除，因而接触结核分枝杆菌并不一定会染病。但其中部分菌株可能未被完全清除，这部分菌株会被肺泡中的巨噬细胞所吞噬，刺激产生正常的免疫应答，可在肺泡组织中形成肉芽肿[5-6]。在这一阶段结核菌株自身的代谢功能、自我复制等均会受到一定限制，临床也将其称为“潜伏期”。处于潜伏期的患者并不会出现临床症状，以影像学诊断胸部未见任何阴影，因而容易使患者和医生忽略病情[7-8]。而当该感染者由于自身或外界因素诱导，从而出现免疫功能下降，或肺结核分枝杆菌毒性增加的情况时，该特异性抗原便会激活，在肺泡内大量繁殖，破坏肺实质结构，使肺部功能快速下降[9-10]。

目前临床诊断肺结核的方法有结核抗体检测法，其误诊率较高，且受菌株自身潜伏性的影响[11-12]。结核感染T 细胞法则主要是以检验T 细胞为基础的体外IFN-γ 反应技术，是以T 细胞自身的免疫应答机制为基础诊断方式。当人体初次感染结核分枝杆菌后，便会对T 淋巴细胞产生影响，使其致敏[13-14]。当二次感染或体内潜伏菌株爆发后，致敏T 淋巴细胞的释放功能便会被异常激活，尤其是IFN-γ 指标，因此该指标的异常升高也视为感染结核杆菌的标志之一[15-16]。同时感染结核分枝杆菌后RD1 区的两种分泌蛋白（CFP-10、ESAT-6）功能会被激活，从而使其分泌量大幅提升，该蛋白也属于肺结核检验中特异性较强的蛋白[17-19]。

本研究结果显示，150 例疑似肺结核病患者通过结核感染T 细胞检测结果准确度（98.00%）明显高于结核抗体检测（84.67%）（P<0.05），与曹静[20]研究结果“观察组通过结核感染T 细胞检测符合率（92.55%）高于对照组结核抗体检验（符合率74.47%）（P<0.05）”相一致。

综上所述，临床鉴别诊断肺结核疾病可采取结核感染T 细胞检测技术，具有较高的准确度，能够为临床提供可靠数据支持。