舒心康对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的影响

于莹，顾媛媛，张虎娟，张晓燕，周忠光

（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040）

心肌缺血（myocardial Ischemia，MI）是指心脏的血液灌注减少，引起心肌缺氧、代谢改变、心脏功能障碍和心肌结构破坏的病理状态［1-2］。随着社会经济的发展，国民生活方式的变化，缺血性心脏病的发病人数每年不断增加，缺血性心脏病对居民健康的威胁愈加严重。缺血性心脏病是全球人口死亡的首位原因［3-4］。由于心血管病死亡的人口在农村占比46.66%，在城市占比43.81%［5］。该病已成为我国仅次于脑血管病的第二大死亡原因［6］。本研究中的舒心康由广枣15 g，丹参10 g，檀香10 g，木棉花10 g和诃子10 g组成。由内蒙古民族大学第二临床医学院蒙医科专家哈斯额尔登主任医师在治疗冠心病二十余年的实践过程当中，根据《蒙医金匮》中的经典方剂（由广枣、木棉花、苦参、檀香、沉香5味中药组成），结合当代人的体质以及方药经济性等因素，将原方中苦参及沉香调整为丹参及诃子，并命名为舒心康，用以治疗普行赫依偏盛，赫依、血运行障碍，心脉循行受阻为主所致的疾病。目前，对该方的实验研究较少，为丰富该方治疗缺血性心脏病的理论依据，本文研究了该方对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血的影响。垂体后叶素（Pit）是强烈的血管收缩剂，内含加压素，能明显使冠状动脉、毛细血管收缩，造成心肌缺血、缺氧［7-8］。本实验采用尾静脉注射Pit的方法制备大鼠急性心肌缺血模型，通过监测大鼠ECG 中S-T 段位移变化以及对大鼠血清中CK、LDH、SOD和MDA等生化指标的检测分析，对舒心康抗心肌缺血的机制进行探究。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康SD大鼠60只，雌雄各半，体质量220～250 g。由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供，许可证号：SCXK-（京）2009-0001。饲养条件：室温18～22 ℃，湿度50%～60%动物室内饲养，光照12 h 明暗周期。

1.2 仪器、试剂与药物

KY2000 半自动生化分析仪（日本岛津公司）；BL-420F 生物机能实验系统；756PC Spectrum 紫外分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。

LDH 试剂盒（批号：20181120）、CK 测试盒（批号：20181026）、SOD试剂盒（批号：20181105）、MDA试剂盒（批号：20181024），均购于南京建成生物工程研究所。

垂体后叶素（批号：101101，规格：2 mL∶1 mg，上海禾丰制药有限公司）；马来酸依那普利（规格：5 mg ×16 s，扬子江药业集团江苏制药股份有限公司）；舒心康所用广枣、丹参、檀香、诃子、木棉花的水提物，均购自哈尔滨市世一堂药店。

1.3 分组及给药

将大鼠依据随机数字表随机分为6 组，分别为正常组、模型组、阳性对照组以及舒心康高、中、低剂量组。除正常组外，其余所有大鼠采用尾静脉注射Pit（0.6 U/kg）制备急性心肌缺血模型，当大鼠心电图中S-T 段抬高趋势≥0.1 mV 时，表示急性心肌缺血模型造模成功［9-10］。按药理学实验方法学计算舒心康高、中、低剂量组的给药剂量分别为40、20、10 mg/kg；阳性对照组给药剂量为15 mg/kg；正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，每天给药1次，连续给药15 d。

1.4 检测指标及方法

1.4.1 心电图检测

大鼠末次灌胃60 min 后，采用10% 水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉后，将大鼠固定，四肢连接BL-420F 生物记录仪，记录大鼠正常状态下心电图。随后，大鼠尾静脉注射垂体后叶素（0.6 U/kg）造模，测定标准导联心电图S-T 段随时间的变化幅度［11］，观测大鼠注射垂体后叶素30 s 后心电图的S-T 位移值（mV）。

1.4.2 大鼠血清中CK、LDH水平测定

大鼠腹主动脉取血后，以3 500 r/min 的速度离心10 min，取大鼠血清。严格按照CK和LDH试剂盒的说明书内容测定其含量。

1.4.3 大鼠心肌组织中SOD、MDA含量测定

取大鼠心尖部位的组织，生理盐水冲洗，冰水浴研磨，制备10%心肌组织匀浆。严格按SOD 和MDA 试剂盒说明书操作测定其含量。

1.5 统计学处理

采用SPSS 19.0 软件对数据进行统计学分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验，以P＜0.05代表差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠ECG的变化比较

大鼠注射Pit 造模后，观察其心电图可以发现，大鼠心电图的S-T 段较注射前显著抬高，T 波明显增大，心率加快，该现象表明Pit 对大鼠的心肌造成了损伤，造模前后心电图对比见图1 和图2。通过对大鼠心电图的观察，发现各用药组S-T 段位移幅度均相对较小，舒心康给药组随着给药剂量的增加，降低趋势也越明显。与模型组相比，舒心康高剂量组和阳性对照组S-T 段位移幅度差异显著（P＜0.05）。见表1。

表1 各组急性心肌缺血大鼠心电图S-T段位移的比较（±s）

表1 各组急性心肌缺血大鼠心电图S-T段位移的比较（±s）

注：与正常组比较，▲P ＜0.05；与模型组比较，*P ＜0.05。

组别正常组模型组舒心康低剂量组舒心康中剂量组舒心康高剂量组阳性对照组n 10 10 10 10 10 10 S-T段位移值（mV）0.06±0.03 0.25±0.09▲0.22±0.05 0.19±0.03 0.13±0.04*0.12±0.03*

2.2 各组大鼠血清CK和LDH水平比较

与正常组相比，模型组大鼠血清中CK 和LDH 含量明显上升（P＜0.01）；与模型组相比，舒心康高剂量组和阳性对照组血清中的CK 和LDH 明显下降（P＜0.05）。见表2。

表2 舒心康对急性心肌缺血大鼠血清CK、LDH活性的影响（±s，n=10）

表2 舒心康对急性心肌缺血大鼠血清CK、LDH活性的影响（±s，n=10）

注：与正常组比较，▲▲P ＜0.01；与模型组比较，*P ＜0.05。

组别正常组模型组舒心康低剂量组舒心康中剂量组舒心康高剂量组阳性对照组LDH（U/L）3 176.98±628.20 5 793.81±482.89▲▲5 155.93±913.29 4 578.35±935.99 4 131.96±754.45*4 061.86±555.93*CK（U/L）643.51±53.92 1 192.26±188.73▲▲960.10±212.01 846.13±328.28 741.28±346.08*701.75±339.91*

2.3 大鼠心肌组织中SOD和MDA含量比较

与正常组相比，模型组大鼠心肌组织中的SOD 活性降低（P＜0.05），MDA 含量升高（P＜0.01）。与模型组相比，舒心康高剂量组和阳性对照组心肌组织中SOD 活力显著升高（P＜0.05），MDA 含量显著降低（P＜0.05）。见表3。

表3 舒心康对心肌缺血大鼠心肌组织中SOD、MDA 水平的影响（±s，n=10）

表3 舒心康对心肌缺血大鼠心肌组织中SOD、MDA 水平的影响（±s，n=10）

注：与正常组比较，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01；与模型组比较，*P ＜0.05。

组别正常组模型组舒心康低剂量组舒心康中剂量组舒心康高剂量组阳性对照组SOD（U/kg）223.42±40.94 155.73±28.30▲166.57±25.71 175.39±18.88 195.22±16.84*201.82±11.10*MDA（nmol/kg）2.85±0.48 5.99±0.85▲▲4.91±0.70 4.24±1.36 3.87±0.76*3.67±0.65*

3 讨论

心脏的耗氧量较身体其他器官来说比较大，所以对缺血、缺氧状态很敏感，急性心肌缺血可导致心肌组织细胞损伤［12］。活性氧自由基（ROS）代谢紊乱是缺血性心脏病的病理机制之一，过量的ROS 攻击生物膜后会诱发脂质过氧化，这一过程会导致MDA 显著增加。脂质过氧化会改变脂质的理化性质和结构，影响脂质的生物学功能，导致心肌缺血性损伤。MDA 是ROS 脂质过氧化的最终产物，MDA 水平能够反映脂质过氧化的程度以及细胞损伤程度［13-14］。SOD 是机体清除ROS的重要酶［15-16］，当体内ROS过多时，SOD既能清除过量的ROS，又能产生足够量的氧分子，这个过程可以增加机体氧分子含量，改善缺氧状态，保护心肌细胞免受损伤。SOD 既能反映出ROS 产生和消除的动态平衡能力，也能反映ROS 浓度的改变［17-18］。CK 和LDH 在心肌细胞胞浆中广泛存在，当心肌细胞缺血时，细胞生物膜通透性增高，引起细胞胞浆中重要心肌酶CK 和LDH的释放增加［19-20］。

本实验观察到大鼠口服舒心康后能比较有效地改善垂体后叶素导致的心肌组织缺血，与正常组相比，模型组大鼠的CK、LDH 和MDA 含量明显升高，SOD 活性降低，结合造模前后大鼠心电图的对比，说明模型组大鼠产生心肌损伤，造模成功。和模型组相比，舒心康高剂量组大鼠血清中的CK 和LDH 水平明显降低，大鼠心肌组织匀浆中SOD 水平升高，MDA 水平降低，各组数值差异均有统计学意义（P＜0.05）。同时，心电图的变化反映心肌缺血的程度，观察给药后大鼠心电图变化，可以发现舒心康高剂量组大鼠的心电图中S-T段位移值明显变小。

蒙药复方舒心康在临床治疗的过程中，具有改善心肌缺血以及预防和治疗冠心病的功效。综合以上实验结果，本研究也表明舒心康对垂体后叶素导致的大鼠急性心肌缺血症状有一定的抑制作用。舒心康能保护心肌免受缺血性损伤，从而具有较好的治疗缺血性心脏病的作用。