布病血清学检测对布病的诊断价值探讨

李华根

布鲁氏菌病是因布鲁氏杆菌感染而引起的一种人兽共患的疾病,这种疾病在全世界范围内存在广泛的流行性［1］,因此采取有效措施防止并控制布鲁氏菌病的感染十分重要。传统血清学和血培养检验是诊断布鲁氏菌病的主要方法,我国在进行临床诊断时初次筛查一般利用布鲁氏菌病平板凝集试验,也有患者开展虎红平板凝集试验,对检验结果阳性者进一步利用布鲁氏菌病试管凝集试验进行确诊［2］。在本次研究中主要利用虎红平板凝集试验、荧光偏振检测、试管凝集试验、半胱氨酸检测方法进行诊断,利用半胱氨酸检验方法是为了鉴别布鲁氏菌病患者的急慢性情况,以便为病情的进一步诊治提供依据。具体情况报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年3 月～2021 年3 月在本中心监测的123 例疑似布鲁氏菌病患者作为研究对象,其中男61 例,女62 例；年龄24～62 岁,平均年龄(42.16±10.31)岁。

1.2 方法 所有患者入院后采集空腹静脉血4 ml 进行布鲁氏菌病血清学试验,同时根据《布鲁氏菌病诊断》WS269-2019 进行判定。

1.2.1 虎红平板凝集试验 开展试验前需要将血清和抗原在室温条件下放置0.5～1.0 h,然后在玻璃板上标记被检血清号,添加相应的被检血清0.03 ml。在被检血清旁加虎红平板凝集抗原0.03 ml。通过牙签对血清和抗原进行搅拌,以便于充分的混合均匀。在5 min 内观察结果。每次试验均应该设置阴性血清和阳性血清进行对照［3］。

1.2.2 荧光偏振检测 通过荧光偏振检测仪、相配套的荧光偏振检测试管型抗体检测试剂盒、布鲁氏菌病试管、凝集抗原等进行检验。在开展检测时所有的方法按照说明书进行严格执行。利用荧光偏振检测试验对患者的血清进行布鲁氏杆菌和抗体检查。参照《实用临床布鲁氏菌病》进行判断,荧光偏振检测试验试管型抗体的检验结果则以毫偏振单位(mP)进行表示,并以检测值>93 mP 作为阳性［4］。

1.2.3 试管凝集试验 首先对被检测的血清进行稀释,每份被检血清用5 支凝集试管,标记检验编码后,第1管加1.15 ml稀释液,第2～5管各加入0.5 ml稀释液。取被检血清0.1 ml 加入第1 管,充分混匀。从第1 管中吸取0.5 ml 加入到第2 管,混合均匀后再从第2 管 吸取0.5 ml 加至第3 管,如此倍比稀释至第5 管,从第5 管弃去0.5 ml,稀释完毕。第1～5 管的血清稀释度分别为1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100、1∶200,然后增加抗原,将0.5 ml 20 倍稀释的抗原加入已稀释好的各血清管中,并振摇均匀；第1～5 管的血清稀释度分别为1∶25、1∶50、1∶100、1∶200、1∶400,各反应管反应总量为1 ml。最后设置对照试验进行比较［5］。

1.2.4 半胱氨酸检测 选择1∶5 稀释的被检血清 0.5 ml 和等量的0.2 M 半胱氨酸盐酸盐溶液进行混合,将其放置在37℃的温箱中保存30 min,然后通过生理盐水进行倍比稀释。然后再各自加入0.5 ml 的试管凝集抗原,同时设抗原和0.2 M 半胱氨酸处理后的血清对照。在混合均匀后放置在37℃的温箱中18～24 h,取出温室下放置2 h,对结果进行判断。1∶100 稀释,“++”及以上判定为阳性；1∶50 稀释呈现“++”及以上,判定为疑似阳性［6］。

1.3 观察指标 以细菌学检测结果作为金标准。比较不同检测方法(虎红平板凝集试验、荧光偏振检测、试管凝集试验、半胱氨酸检测)对布鲁氏菌病的检出率；分析不同检测方法(虎红平板凝集试验、荧光偏振检测、试管凝集试验、半胱氨酸检测)对布鲁氏菌病的诊断效能,即阳性预测值、阴性预测值、敏感度、特异度、准确度、约登指数、误诊率和漏诊率。阳性预测值=真阳性/(真阳性+假阳性)×100%；阴性预测值=真阴性/(假阴性+真阴性)×100%；敏感度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%；特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%；准确度=(真阳性+真阴性)/(真阳性+假阳性+假阴性+真阴性)×100%；约登指数=(灵敏度+特异度)-1；误诊率=假阳性/(假阳性+真阴性)×100%；漏诊率=假阴性/(真阳性+假阴性)× 100%。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0 统计学软件进行数据统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P<0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检测方法对布鲁氏菌病的检出率比较 123 例疑似布鲁氏菌病患者细菌学检测结果最终确诊105 例(85.37%)。虎红平板凝集试验、荧光偏振检测、试管凝集试验、半胱氨酸检测对布鲁氏菌病的检出率分别为83.74%、82.93%、83.74%、82.11%,比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同检测方法对布鲁氏菌病的检出率 比较(n,%,n=123)

2.2 不同检测方法对布鲁氏菌病的诊断效能分析 虎 红平板凝集试验对布鲁氏菌病的阳性预测值、阴性预测值、敏感度、特异度、准确度、约登指数、误诊率和漏诊率分别为94.17%(97/103)、60.00%(12/20)、92.38% (97/105)、66.67%(12/18)、88.62%(109/123)、0.5905、33.33%(6/18)、7.62%(8/105)。荧光偏振检测对布鲁氏菌病的阳性预测值、阴性预测值、敏感度、特异度、准确度、约登指数、误诊率和漏诊率分别为97.06%(99/102)、71.43%(15/21)、94.29%(99/105)、83.33%(15/18)、92.68%(114/123)、0.7762、16.67%(3/18)、5.71%(6/105)。试管凝集试验对布鲁氏菌病的阳性预测值、阴性预测值、敏感度、特异度、准确度、约登指数、误诊率和漏诊率分别为92.23%(95/103)、50.00%(10/20)、90.48% (95/105)、55.56%(10/18)、85.37%(105/123)、0.4604、44.44%(8/18)、9.52%(10/105)。半胱氨酸检测对布鲁氏菌病的阳性预测值、阴性预测值、敏感度、特异度、准确度、约登指数、误诊率和漏诊率分别为98.02% (99/101)、72.73%(16/22)、94.29%(99/105)、88.89% (16/18)、93.50%(115/123)、0.8318、11.11%(2/18)、5.71% (6/105)。见表2。

表2 不同检测方法对布鲁氏菌病的诊断效能分析(n)

3 讨论

布鲁氏菌病属于全球范围内具有较高发病率的一种人畜共患疾病,当前试验室对该疾病的检查方法主要包括分离培养方法和血清检测方法,但这两类方法也分别存在自身的优势和不足［3］。细菌学检测方法是试验室检测的金标准,其操作要求较高,并存在一定的风险,因此在临床应用时很难进行规范的使用［4］。

目前国内检测布鲁氏菌病的主要方法包括虎红平板凝集试验、荧光偏振检测、试管凝集试验、半胱氨酸检测。本研究结果显示,虎红平板凝集试验、荧光偏振检测、试管凝集试验、半胱氨酸检测对布鲁氏菌病的检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。经过虎红平板凝集试验、荧光偏振检测、试管凝集试验、半胱氨酸检测进行布鲁氏菌病血清学检测对布鲁氏菌病的阳性预测值、阴性预测值、敏感度、特异度、准确度、约登指数、误诊率和漏诊率均存在着各自的优点。由此说明通过上述检测方法对布鲁氏菌病进行血清学检测可实现对布鲁氏菌病的检出情况,但不同检测方法也存在不足之处。如荧光偏振检测属于一种新型的检测手段,国外对这种检测方法的应用早有研究［5］,我国处于起步阶段。这是一种同源性分析的技术,可以通过检测抗原抗体之间的相互作用进行确诊。半胱氨酸检测属于一种含硫基化合物,主要含有巯基-SH 成分,通过半胱氨酸处理血清能够反映出免疫球蛋白G (IgG)的成分和活性,可以应用于布鲁氏菌病人群的免疫与自然抗感染的鉴别中［6-10］。当前认为布鲁氏菌病发病早期阶段在人体中会产生对二级乙醇及半胱氨酸敏感的抗体免疫球蛋白M(IGM),之后IgG 会逐渐上 升［11］。在本次研究中,急性患者的半胱氨酸阴性值相对慢性患者要低［12］,由此也说明半胱氨酸在布鲁氏菌病患者的检测中具有较高的检测价值,并能实现对患者病情的准确分析。

综上所述,布鲁氏菌病血清学检测在布鲁氏菌病的诊断中具有重要的意义,不同血清学检测方法存在各自的诊断特点,可联合多方法综合性进行布鲁氏菌病血清学检测,对提高布鲁氏杆菌的确诊率具有重要意义。