MTHFR C677T基因多态性对H型高血压患者血压和HCY水平的影响*

张建忠，冯慧琴，孙 伟

(江苏省如东县人民医院检验科，如东 226400)

研究[1]发现，血压与心脑血管疾病风险之间呈直接和独立的正相关关系。H 型高血压是指伴有同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)水平升高的原发性高血压。HCY 是一种含硫氨基酸，是蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的一个重要中间产物。《中国高血压防治指南(2018 修订版)》[2]将高HCY 血症定义为血浆HCY≥15 μmol/L。亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)是叶酸和HCY 代谢的关键酶之一。MTHFR 基因突变，特别是C677T 位点的基因突变，可影响MTHFR 的生物学活性。另外，叶酸缺乏可导致HCY 代谢障碍和高HCY 血症。本研究通过检测H 型高血压患者MTHFR 基因型和血清HCY 水平，探讨两者之间的相关性。同时，观察MTHFR 不同基因型对H 型高血压患者血压的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2021 年7 月—2022 年4 月在如东县人民医院心内科门诊就诊及住院的H 型高血压患者162 例为观察组，非H 型高血压(HCY<15 μmol/L)患者154 例为对照组。观察组中男104 例，女58 例；年龄35～89 岁，平均(64.8±11.3)岁；体质量52～80 kg，平均(65.1±9.9) kg；病程1～18 年，平均(8.1±3.7)年。对照组中男102 例，女52 例；年龄36～87 岁，平均(65.7±10.9)岁；体质量54～82 kg，平均(65.9±10.2) kg；病程2～20 年，平均(7.7±4.1)年。两组患者性别、年龄、体质量和病程比较差异均无统计学意义(均P＞0.05)，具有可比性。本研究获如东县人民医院伦理委员会批准(2019021)，所有患者对本研究目的、内容等知情同意并本人签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：H 型高血压诊断符合2018 版《中国高血压防治指南》诊断标准。排除标准：(1)严重心脑血管疾病；(2)精神障碍及重度残疾；(3)肝肾功能严重不全者；(4)并发恶性肿瘤、结缔组织病；(5)患者依从性不足。

1.3 仪器与试剂 ABI7500 实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)仪(美国赛默飞世尔科技公司)；Eppendorf 5424R 型高速离心机(德国艾本德股份公司)；日立7600-110 型全自动生化仪(日本日立公司)；MTHFR 基因677C/T 分型试剂盒(苏州旷远生物分子技术有限公司)；HCY 检测试剂盒(中元汇吉生物技术股份有限公司)。

1.4 基因分型 采集所有受试者全血2 mL 予乙二胺四乙酸抗凝，采用离心柱法提取基因组DNA，按照MTHFR 基因677C/T、1298C/T、66C/T 分型操作程序进行基因分型。反应体系为25 μL：PCR 反应液22 μL，反应酶1 μL，待检样本DNA、阴性对照或阳性对照2 μL。反应条件：37 ℃2 min 去污染；95 ℃3 min 预变性；95 ℃30 s，56 ℃30 s，65 ℃45 s 10个循环；95 ℃30 s，56 ℃30 s，65 ℃45 s，28 个循环。目的基因检测信号为FAM、ROX、CY5，内参基因检测信号为VIC，按照人MTHFR&MTRR 基因多态性检测试剂盒(荧光PCR 法)说明书(苏州旷远生物分子技术有限公司)规定的CT 值及标准进行结果判断。

1.5 血清HCY 水平检测 所有受试者禁食12 h后，促凝真空负压血样采集管采集静脉血3 mL，静置30 min，3 000 r/min 离心15 min，酶法测定血清HCY 水平。

1.6 统计学方法 使用SPSS 20.0 统计软件进行数据分析，计量资料以表示，采用t 检验；计数资料以例数或百分率表示，采用χ2检验；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者血压和HCY 水平比较 两组患者收缩压、舒张压和HCY 水平见表1。两组舒张压水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但观察组收缩压和HCY 水平明显高于对照组(P＜0.05)。

表1 两组患者血压和HCY 水平比较()

表1 两组患者血压和HCY 水平比较()

2.2 两组患者MTHFR 基因型分布 两组患者MTHFR 基因C677T 位点检测结果见表2。观察组TT 基因型和T 等位基因频率均明显高于对照组(均P＜0.01)，提示TT 基因型和T 等位基因可能与高HCY血症相关。

表2 两组患者MTHFR 基因型分布

2.3 MTHFR 基因型与血压、HCY 水平的关系 两组不同MTHFR 基因型患者血压和HCY 水平见表3。两组不同基因型患者舒张压差异无统计学意义；但无论在观察组还是对照组，TT 型患者收缩压都高于CC 型患者(P＜0.05)，而CT 和TT 型收缩压差异均无统计学意义(均P＞0.05)，提示MTHFR C677T 基因多态性可能对收缩压产生影响。此外，两组TT 型患者血清HCY 水平也高于CC 型患者(P＜0.05)，结合H型高血压患者中TT 基因型和T 等位基因频率高于非H 型高血压患者，提示MTHFR C677T 基因多态性可能对血清HCY 水平产生影响。

表3 MTHFR C677T 不同基因型患者血压、HCY 水平比较()

表3 MTHFR C677T 不同基因型患者血压、HCY 水平比较()

注：与同组CC 型比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

3 讨论

高血压影响全球约13.9 亿成年人。高血压与颅内动脉粥样硬化的发展和严重程度相关，是中国脑卒中人群的首位危险因素，其与脑卒中发病率呈正相关[3]。因此，作为最常见的可改变心血管危险因素，预防和控制高血压可能是降低急性缺血性脑卒中风险的有效治疗策略。

高血压也是全球心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)和全因死亡率的主要可改变风险因素之一。据估计，患有高血压的30～79 岁的人数从1990年的3.31 亿女性和3.17 亿男性增加到2019 年的6.26 亿女性和6.52 亿男性[4]。遗传学和前瞻性队列研究[5]都提供了强有力的证据表明HCY 与CVD 之间存在因果关系，其中将血清HCY 浓度降低5 μmol/L可将缺血性心脏病的风险降低16%，将卒中的风险降低24%。更重要的是，血压和HCY 水平升高可能会相互增强引发CVD 风险和死亡率的能力。在我国，H 型高血压占高血压病的70.00%以上[5]。HCY 异常升高会引起肾脏损害和肾功能下降[6]，加重H 型高血压患者的病情，形成恶性循环，严重威胁患者的生命健康。MTHFR 参与HCY 的分解代谢并发挥重要作用。MTHFR 基因位点的突变可能与HCY 代谢和水平的变化有关[7]。因此，阐明MTHFR C677T 基因型在H 型高血压患者中的分布及其与患者病情的关系，对疾病的早期筛查和诊断具有一定的指导价值。本文旨在研究H 型高血压患者MTHFR C677T基因型分布及其与HCY 和血压的相关性，为提高H型高血压患者早期筛查的准确性提供数据支持，并为H 型高血压患者提供个体化的干预措施。

MTHFR 是HCY 和叶酸代谢中的主要调节酶，催化5,10-亚甲基四氢叶酸还原为5-甲基四氢叶酸。人类MTHFR 基因由11 个外显子和10 个内含子构成，共有20 多个突变位点，其中以C677T 与A1298C 两个突变位点最为常见。C677T 基因位于MTHFR 基因的第4 个外显子，由于胞嘧啶(C)突变成了胸腺嘧啶(T)，导致丙氨酸转化为缬氨酸，降低其酶活性并导致血液中高HCY 和低叶酸水平；此外，1 298 位点的腺嘌呤(A)突变为胞嘧啶(C)，导致编码的谷氨酰胺错译为丙氨酸，也可能导致酶活性显著降低[8-9]。研究[10]证实，MTHFR 基因TT 型与H 型高血压相关，年龄、性别和MTHFR C677T 多态性与H型高血压独立相关。C.ZHANG 等[11]报道，H 型高血压患者携带TT 基因型和T 等位基因的频率明显高于健康志愿者。本研究发现，TT 基因型和T 等位基因频率在H 型高血压患者中高于非H 型高血压患者，且与收缩压相关。李树刚等[12]报道，H 型高血压组患者的TT 型基因分布比例最高，而CC 型基因分布比例最低，同时H 型高血压组患者的T 等位基因频率最高，本研究得到类似结果。另外，两组中TT 基因型患者的HCY 水平均明显高于CC 基因型患者。高血压是多因素共同作用的结果，在高血压患者MTHFR基因多态性造成的影响也存在差异性。在H 型高血压患者中，TT 型的收缩压要高于非H 型TT 型高血压患者，说明MTHFR 基因多态性在H 型高血压中可能发挥更大作用，其具体机制尚待进一步研究。

本研究表明，MTHFR C677T 基因多态性，特别是TT 基因型和T 等位基因对H 型高血压患者血压和HCY 水平产生一定影响。当然，本研究尚待大规模多中心临床研究进一步证实。