长链非编码RNA-PTENP1在结直肠癌组织中的表达及意义

左仲学 王宏志 黄绪群

结直肠癌已成为导致我国居民死亡的主要癌种[1]，对人群生命安全构成严重威胁。尽管现有的诊疗手段不断进步，但患者总体预后依然改善有限[2]。有研究指出[3]，高转移性与结直肠癌患者死亡密切相关。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)作为一种长度在200 nt以上的RNA，缺乏蛋白编辑功能，但参与了多种疾病发生进展过程[4]，且在多种恶性肿瘤组织中出现表达异常[5]。10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失性基因假基因1(phosphase and tensin homology deleted onchromosome ten pseudogene 1，PTENP1)作为一种lncRNA，是抑癌基因PTEN的假基因，可通过竞争PTEN表达而发挥作用，已发现其参与了多种恶性肿瘤发生进展过程[6]。本研究检测了结直肠癌组织中PTENP1表达情况，探讨其在不同临床指标间的表达差异性，以及与患者预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2013年8月至2015年8月我院收治的结直肠癌患者为对象，共入选106例，男59例，女47例；平均年龄(59.55±10.27)岁；术中将结直肠癌和癌旁>3 cm正常肠黏膜组织(均经病理学检查排除肿瘤)，快速置于液氮中，-70℃保存。本研究通过医院伦理委员会批准，均行知情同意。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：(1)术前均未行任何放化疗治疗，术后病理学检查确证；(2)临床资料完整，均完成随访。排除标准：(1)出现远处转移，采用非根治性手术治疗者；(2)心肝肾等重要脏器严重功能障碍者；(3)合并有其他系统肿瘤者、内分泌代谢系统疾病者。

1.3 方法

1.3.1 利用RT-qPCR技术检测组织中PTENP1表达：取结直肠癌和正常肠黏膜组织，剪碎、研磨，加入细胞裂解液，使用总RNA提取试剂(美国Sigma公司)提取组织中总RNA，检测其纯度和浓度，按照逆转录试剂盒(美国Fermentas公司)说明获得cDNA，使用实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司)，按照PCR扩增试剂盒(日本Takara公司)说明对引物序列(由上海生工生物工程公司设计合成)进行扩增。序列：PTENP1：上游：5’-GGATCATTACCTCACACCATACC-3’，下游：5’-TCTAAGAAACAACTAAGCCAAAGTC-3’；β-actin：上游：5’-TCCCTGGAGAAGAGCTACG-3’，下游：5’-GTAGTTTCGTGGATGCCACA-3’。条件：94℃ 2 min，94℃ 30 s，63℃ 30 s，76℃ 30 s，38次循环。每个样品设复孔6个。用2-△△Ct法计算组织中PTENP1表达量。

1.3.2 病例随访：于术后第1天开始对病例随访，形式包括住院查房及出院后门诊、电话等，截止时间2021年8月31日，所有病例随访满5年，以死亡作为结局事件，记录患者总生存时间和5年生存率。

2 结果

2.1 PTENP1在结直肠癌和癌旁组织中的表达量 PTENP1在结直肠癌组织中的表达量为(0.24±0.09)，低于癌旁组织中的(1.02±0.13)，差异有统计学意义(t=52.036，P<0.001)。

2.2 PTENP1在不同临床病理指标结直肠癌组织中的表达差异 PTENP1在不同性别、年龄、肿瘤部位和肿瘤大小中表达量差异无统计学意义(P>0.05)，而在不同分化程度、TNM分期、浸润深度、是否发生脉管浸润和淋巴结转移中表达量有差异(P<0.05)。见表1。

表1 PTENP1在不同临床病理指标结直肠癌组织中的表达差异

2.2 结直肠癌组织中PTENP1表达量与预后的相关性 106例患者随访时间2～60个月，中位随访时间60个月，以结直肠癌组织中PTENP1表达量的均值0.24为界值，将患者分为低表达组(n=60)和高表达组(n=46)，低表达组患者平均生存时间(32.85±2.78)个月，5年生存率为35.00%，高表达组分别为(51.02±2.28)个月和71.74%，Log-Rank检验有统计学意义(χ2=17.140，P<0.01)。见图1。

图1 结直肠癌组织中PTENP1表达量与预后的相关性

2.3 结直肠癌患者生存期的危险因素分析 分化程度、TNM分期、淋巴结转移和PTENP1表达是影响患者生存期的风险因素(HR=0.518、2.061、2.342和0.424，P<0.05)。见表2。

表2 影响结直肠癌患者生存期的多因素分析

3 讨论

结直肠癌患者由于早期不易诊断，一旦出现全身症状时已进展至中晚期，错失最佳治疗时机[7]，尽管肿瘤诊疗技术取得长足发展，但结直肠癌患者生存率依然较低，转移和复发依然是造成患者死亡的主要原因[8]。lncRNA作为生物体内广泛存在但不具有蛋白翻译功能的长链RNA，已有研究显示，其与细胞增殖、迁移、分化等密切相关[9]。并且，多项研究表明，lncRNA与恶性肿瘤发生进展密切相关[10,11]。有研究指出，结直肠癌组织中存在lncRNA表达谱异常，可能参与了结直肠癌转移过程[12]。PTENP1作为一种lncRNA，是PTEN的假基因，位于人染色体9q13.3，有研究指出，其可抑制膀胱癌的进展[13]。亦有研究指出，PTENP1可作为口腔鳞癌早期标记物及治疗靶点[14]。Fan等[15]则指出，PTENP1通过抑制miR-106b抑制宫颈癌进展。本研究结果显示，结直肠癌组织中PTENP1呈低表达，提示PTENP1可能作为抑癌基因参与了结直肠发生。本研究结果显示，低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、浸润深度T3～T4、发生脉管浸润和淋巴结转移的患者组织中表达量明显降低，说明PTENP1可能参与了肿瘤恶性进展。

有研究指出，检测血清PTENP1表达水平对胃癌有潜在诊断及预后评估价值[16]。张宇华等[17]指出，血清PTENP1可用于绒毛膜癌诊断和评估预后。这些研究报道表明，PTENP1可能与恶性肿瘤患者预后关系密切。本研究结果显示，与高表达组比较，低表达组患者平均生存时间和5年生存率均显著降低，说明结直肠癌患者组织中PTENP1表达水平与患者预后密切相关。本研究结果表明，PTENP1低表达是结直肠癌患者生存期的风险因素之一，进一步说明PTENP1低表达是影响预后的危险因素，提示PTENP1可能是评估患者预后的潜在标志物。

综上所述，结直肠癌患者组织中PTENP1表达量降低，且与代表恶性进展的临床指标有关，与患者不良预后有关，有望成为患者诊疗及评估预后的标志物。