胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3表达水平及其与临床病理特征的相关性研究

米彩锋 余儒桓 李亚利 余守雅

河南省平顶山市第一人民医院消化内科，平顶山市 467000

胃癌是较为常见的消化系统恶性肿瘤，随着医学技术发展，患者生存率不断提高。胃癌起病隐匿，不易发现，多数患者在出现明显症状时已错过最佳手术时机，只能选择化疗治疗[1]。故及早发现胃癌并评估患者预后具有重大现实意义。血清DKK-1、淋巴细胞活化基因(lymphocyte activation gene，LAG)-3参与多种肿瘤的发生和发展过程，且研究发现DKK-1在肺癌、乳腺癌诊疗中具有重要的临床价值[2-3]。人附睾蛋白(human epididymis protein，HE)4主要分布于人生殖系统中，并且与多种肿瘤(如卵巢癌、肺癌等)的原发肿瘤-区域淋巴结-远处转移(tumor-node-metastasis，TNM)、预后紧密相关。多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase，PARP]-1存在于真核细胞中，近年有研究发现其在乳腺癌、子宫内膜癌、胰腺癌等筛查、治疗中具有重要意义[4]。当前关于胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3与临床病理特征的相关性的研究报告较少。本研究探讨胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3表达水平及其与患者临床病理特征的相关性，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2020年1月我院收治的60例胃癌患者作为研究组。纳入标准：(1)经胃镜活检确诊为胃癌；(2)癌组织浸润黏膜与黏膜下层；(3)患者及其家属签署研究知情同意书。排除标准：(1)合并心肝肾功能障碍；(2)合并免疫性疾病；(3)合并其他恶性肿瘤；(4)存在既往精神疾病史；(5)存在全身急慢性感染。研究组患者TNM分期Ⅰ期6例、Ⅱ期22例、Ⅲ期27例、Ⅳ期5例；印戒细胞癌15例、管状细胞癌25例、低分化腺癌14例、乳头状腺癌6例；胃癌细胞分化程度高32例、中15例、低13例；淋巴结转移33例、无转移27例。

另选同期在我院进行健康体检的体检者60例作为对照组。对照组纳入标准：(1)无消化系统疾病；(2)签署研究知情同意书。排除标准：(1)合并心肝肾功能障碍；(2)合并免疫性疾病；(3)合并精神疾病。两组研究对象性别、年龄、体质量指数差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 两组患者的基本资料比较

1.2 方法 采两组研究对象空腹静脉血2 mL，3 500 r/min离心15 min，取上层清液。采用酶联免疫吸附法检测血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平，操作步骤按照试剂盒和仪器操作说明书进行。DKK-1试剂盒购自Biomedical company，PARP-1试剂盒购自默沙克生物，HE4试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，LAG-3试剂盒购自上海法默生物科技有限公司。

1.3 统计学处理 采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析。计量资料以x±s表示，两间组均数比较采用t检验；多组间均数比较采用F检验，两两比较采用LSD-t检验。计数资料以n(%)表示，组间比较比较采用χ2检验。对影响胃癌患者预后的因素进行多因素logistic回归分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组研究对象的血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平的比较 研究组胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均高于对照组研究对象(均P<0.05)。见表2。

表2 两组研究对象的血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平的比较 (x±s，μg/L)

2.2 不同临床病理特征胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平的比较 TNM分期Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1水平均高于Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者，血清LAG-3水平低于Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者(均P<0.05)。胃癌细胞分化程度越高，患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1表达水平越高，血清LAG-3表达水平越低。伴有淋巴结转移胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均高于无淋巴结转移患者(均P<0.05)。见表3。

表3 不同临床病理特征胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平的比较 (x±s，μg/L)

2.3 胃癌患者预后影响因素的单因素分析 不同TNM分期和不同血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平的胃癌患者预后比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表4。

表4 胃癌患者预后影响因素的单因素分析 [n(%)]

2.4 胃癌患者预后影响因素的多因素logistic回归分析 将胃癌患者死亡设为因变量(存活赋值为0，死亡为1)，TNM分期和血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平设为自变量，对胃癌患者预后的影响因素进行多因素logistic回归分析，结果显示：TNM分期和血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均是胃癌患者死亡的独立危险因素(均P<0.05)。见表5和表6。

表5 自变量赋值

表6 胃癌患者预后影响因素的多因素logistic回归分析

3 讨 论

胃癌是常见消化系统恶性肿瘤，起病隐匿，患者出现明显症状时，通常已失去手术最佳时机[5]。近年来，临床上对胃癌的发生、发展和转移过程机制的研究不断深入。胃癌早期发现可提高手术切除率，对改善患者预后具有重要意义。研究[6-7]发现，LAG-3、DKK-1与肿瘤的发生、发展密切相关。其中LAG-3属于负性刺激分子蛋白，其具有阻断T淋巴细胞分化、增殖的作用，导致T淋巴细胞无法清除癌细胞，使其免疫逃逸[8]。DKK-1具有阻断Wnt信号通路和促进癌细胞增殖、迁移的作用，是促进肿瘤生长、转移的重要因子[9]。有研究[10-12]报告，HE4可促进胃癌细胞的增殖、浸润[12]。PARP-1属于一种催化酶，具有催化聚二磷酸腺苷核糖化的作用，参与细胞损伤修复、周期调整、代谢和凋亡的过程，其呈高表达时可促进癌细胞的增殖、迁移、浸润[13]。

本研究结果显示，胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均高于健康体检者，这与一些研究[14-15]的结果相似。本研究结果显示，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1水平均高于Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者，血清LAG-3水平低于Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者；胃癌细胞分化程度越高，患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1表达水平越高，血清LAG-3水平越低；伴有淋巴结转移胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均高于无淋巴结转移患者。胃癌患者TNM分期、胃癌细胞分化程度、淋巴结转移或与血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均有相关性。以上提示血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平与恶性肿瘤的发生、肿瘤迁移、浸润紧密相关。多因素logistic回归分析结果显示，TNM分期和血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均是胃癌患者死亡的独立危险因素，提示检测血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平对胃癌筛查、病情监测和预后判断具有重要的价值。

综上所述，胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3呈高表达水平，并与胃癌的临床TNM分期、淋巴结转移、癌细胞分化程度密切相关，均为胃癌患者死亡的独立危险因素。