动物炭疽病的诊断方法与防控措施

郭佳怡

内蒙古自治区通辽市科左中旗动物疫病预防控制中心，内蒙古通辽 029300

1 病原学

1.1 形态特征

炭疽杆菌是一种革兰氏阳性杆菌，是芽孢杆菌属，菌体呈大杆状，长3～10 µm、宽1～3 µm，两端平直，显微镜下观察以单杆或链状存在，链状形似竹节。炭疽杆菌无鞭毛，无法运动。在人或动物的血液、组织脏器中均可以生存繁殖，且在人或动物体内不产生芽孢，只有与空气接触，漂浮在外界有足够的氧气，温湿度适宜才会产生芽孢，芽孢在菌体中为椭圆形。

1.2 培养特性

炭疽杆菌的培养条件为需氧或兼性厌氧，适宜的生长温度为30～37 ℃。在普通琼脂培养基上生长呈灰白色、不透明、边缘粗糙表面如卷发、大而干燥，菌落直径2～6 mm。在液体培养基中呈白色絮状生长。在明胶培养基中沿穿刺线向四周放射状生长，形似松树。在血琼脂培养基上，也呈灰白色、半透明、周围无溶血环，一般情况下不溶血，有时个别菌株产生轻微溶血。在含青霉素培养基上，炭疽杆菌的细胞壁合成发生改变，显微镜下可观察到圆球状成串整齐排列的菌体。

2 流行病学

2.1 流行特征

我国将炭疽病列为二类动物疫病，主要发生在夏季的7～9月，8月的病例最多，夏季为放牧的主要时期，雨季蚊虫繁殖迅速，易引发本病，且干旱、洪涝等自然灾害频发的时期，炭疽病的发病率也呈显著升高趋势。

2.2 传播方式

传染源为草场、土壤、患病动物的分泌物、排泄物、养殖器具、圈舍、掩埋的尸体及其污染的环境等。本病的传播方式一是消化道感染，采食被污染的食草或植物，或饮用了被污染的井水、河水、生活用水等水源；二是通过皮肤感染，解剖带菌的家畜如牛、羊、猪造成手部产生创口，剪羊毛、家畜断尾、去势手术过程中造成皮肤受伤，带菌蚊虫叮咬等情况均可造成皮肤感染；三是通过呼吸道感染，由于炭疽芽孢可飘浮在空气中，吸入带菌的粉尘或气溶胶菌可感染本病。

2.3 易感动物

炭疽病的易感动物多，涵盖范围广。以牛、羊等草食动物为主，猪等杂食动物也易感，犬、狼主要是因为吞食感染动物的肉感染本病。不仅水牛、河马等草食类野生动物均可感染本病，紫貂、银黑狐、北极狐等野生动物也可感染炭疽。禽类正常情况下不感染本病。人对炭疽病易感，主要为从事养殖、屠宰、皮毛加工人员，有机会接触患病动物的尸体，或误食患病动物的肉造成感染。

3 临床症状

感染炭疽病潜伏期为1～7 d，最长潜伏期可达20 d。根据临床诊断的症状，炭疽病分为以下几个类型：①最急性型：外观正常，无明显临床症状，突然倒地死亡，常见于牛、羊。触诊可发现在牛的脖颈、胸、腰上分布炭疽肿块。有时突然死亡的羊伴随全身痉挛、摇摆、磨牙、呼吸困难、肌肉间歇性抽搐、天然孔出血，几分钟后倒地死亡；②急性型：病程为1～3 d，体温升高至42 ℃，前期精神亢奋、发出叫声、顶撞物体，后期呼吸困难，反刍减少，虚弱便血，濒死时体温急速下降，可能引发孕畜流产；③亚急性型：病程为3～8 d，常见于马属动物，体温升高，颈、胸、腹、会阴、乳房等体表可发生炭疽痈；④慢性型：主要见于猪，无显著症状，多在屠宰后发现生猪已患本病。可造成咽部发炎，淋巴结肿大，部分脏器出血和坏死。

4 病理变化

患炭疽死亡的动物，尸体迅速腐败膨胀、尸僵不全，典型剖检变化为天然孔出血，血液中含有暗红色泡沫，血液粘稠呈暗红色，俗称煤焦油样。脾脏高度肿大，是正常情况的3～5倍，包膜紧张易破碎，脾髓质呈黑红色软如泥状，脾小梁与脾小体模糊不清。淋巴结高度肿胀呈黑红色，有出血点。皮下肌肉和浆膜有黄色胶样浸润，并伴有数量不等的出血点，胃肠黏膜有出血点，肝、肾、心肿大，肺脏、呼吸道充血变性。

5 实验室诊断方法

5.1 炭疽沉淀试验

冷浸法采集动物皮张，本病不能随意解剖，最好的采集方式是疑似患病动物的耳朵，密封保存送至实验室。恒温箱37 ℃烘干皮张8～12 h，再放至高压灭菌器中灭菌，若有产生芽孢污染周围环境的危险，可颠倒烘干灭菌步骤。用灭菌剪将皮张剪成小块，尽量剪小剪碎，加入5～10倍的石炭酸生理盐水浸泡18～24 h。将浸泡皮张的液体过滤3次以上，过滤掉皮毛残渣得到澄清透明液体，即为待检抗原。

热浸法用于检测病死动物的组织脏器，对于已经剖杀、食用的动物，可以采集肝、脾、肾等脏器，研磨捣碎后加入5～10倍生理盐水，装入三角瓶中加热煮沸30～40 min，过滤步骤与冷浸法相同。

取出直径为0.4 mm的瓶口圆底小试管3支，每支均加入炭疽沉淀血清150 mL。第1支加入炭疽沉淀抗原150 mL为阳性对照；第2支加入生理盐水150 mL为阴性对照；第3支加入待检抗原。等待10 min后观察结果，可见第1支阳性对照抗原管中上下液面之间出现白色环状沉淀，为阳性；第2支阴性对照抗原管中无明显变化，为阴性；观测待检抗原结果。该方法操作时间周期长，操作简单，检出结果稳定。

5.2 青霉素串珠试验

通过炭疽杆菌细胞壁接触青霉素后由长杆变圆，且此过程中炭疽杆菌不能产生青霉素酶的特性，辨别炭疽杆菌。将可疑病料直接涂布在含有青霉素的琼脂平板上，直接涂布的方法检出率较低。或将可疑病料通过血琼脂平板或碳酸氢钠琼脂培养基分离培养，37 ℃恒温培养箱中培养12～15 h，用接种环选取可疑菌落，接种于含有青霉素0.5 IU/mL的琼脂液体培养基中，37 ℃恒温培养箱中培养2 h，将培养好的菌液滴加到载玻片上，自然干燥后加入20%甲醛固定，采用美蓝染色，显微镜下观察菌株大而圆呈链状排列，形似串珠，为阳性。

5.3 酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验简称ELISA，此种方法较为方便快捷、敏感性好，一般采用试剂盒有效期长，稳定性强。可检测人或动物的血清、组织等。主要检测样品中的D-谷氨酸荚膜抗体，通过固相吸附原理，将带荧光的羊抗兔抗体与之结合，用酶标仪450 nm的波长读出吸光度值，判定阴阳性。此种方法的特异性不高，主要取决于试剂盒中抗原的制备是否稳定。

5.4 荧光定量PCR

根据世界卫生组织（OIE）发布的诊断手册可知从病料或环境中直接取样检测PCR，均不可作为最终的检测结果，血液、组织脏器、皮毛、环境中的影响因子过多，检测结果很可能为阴性，而且死亡动物的血液组织脏器中的细菌增生，可能造成假阳性。所以需要对样本进行DNA提取。可对病料中的炭疽芽孢杆菌进行分离培养，当炭疽芽孢杆菌浓度达到2×106CFU/mL时，检测的灵敏度更高。荧光定量PCR技术与其他检测方法相比，敏感度更高，特异性更好，检测结果更加稳定。

6 防控措施

6.1 宣传教育

由于炭疽病长期存在，覆盖面广，通过电视、报纸、网络、小视频等多种方式，加强群众对炭疽病的认识，对于养殖人员、屠宰人员、兽医等相关工作者重点培训炭疽病的传染途径、临床特征、剖检变化等专业知识，禁止私屠滥宰、随意售卖不明原因死亡的动物及其产品。一旦发现与炭疽病相似症状的死亡动物，不得私自移动处理，应立即上报给相关部门，由专业人员对动物尸体进行采样及无害化处理，不危害周围环境。

6.2 疫苗免疫

炭疽的疫源地一旦形成，短期内无法根除，对于老疫区，家畜疫苗免疫接种需达到70%以上，保证疫情不反复出现，有效地保障动物健康。规模化养殖场可以自行购买炭疽疫苗进行预防，我国主要采用II号炭疽芽孢疫苗和无荚膜炭疽芽孢疫苗对动物进行免疫。按照疫苗说明书指导，做好疫苗的保存工作，每年秋季对动物进行接种注射。

6.3 疫情处置

参与疫情防护的人员，需戴好口罩、帽子，穿好防护服，在保障自身安全的前提下，深入第一现场开展工作。当某地突发本病，应立即上报动物防疫监督机构。经专业人员确诊后，划定疫点、疫区，隔离病畜、对发病地区进行封锁，直至最后一头病畜痊愈或死亡后，14 d内不再发现新病畜，方可解除封锁。

采集所需样品后，一般采用深埋焚烧的方法对病畜进行无害化处理。严禁封锁地区动物、动物产品、草料的运输和售卖，对疫区可能患病的动物及时进行炭疽检测。对未患病的动物紧急接种疫苗。

6.4 消毒

对于发病动物的圈舍、饲养器具、车辆用20%～30%漂白粉严格进行消毒，可采取5%福尔马林对动物尸体进行消毒。病畜停留污染地垫土铲除15～20 cm，覆盖20%漂白粉后再加入新土，对贩运牲畜的道路采取20%漂白粉喷洒消毒。对圈舍中其它动物的皮毛采用2%盐酸和10%食盐溶液浸泡消毒2～3 d或采用福尔马林熏蒸消毒。