‘鲁赫’刺蔷薇籽成分分析及抗氧化、抗炎活性研究

胡萌晓，翟悦，杨淞淇，马艺旃，刘莉，邹木法，赵玉红,2*

(1.东北林业大学林学院，哈尔滨150040；2.黑龙江省森林食品资源利用重点实验室，哈尔滨150040)

刺蔷薇是一种优良的绿化灌木，具有良好的观赏性，对刺蔷薇已经展开了一系列的研究，如研究了刺蔷薇耐寒、耐碱的生理特性[1-2]，扦插的培育技术[3]，叶子的光合作用[4]，种子萌发相关条件[5]和果实的生物活性[6]等。

‘鲁赫’刺蔷薇(Rosaacicularis‘Luhe’)是俄罗斯从野生刺蔷薇(RosaacicularisLindl)培育的一个新品种，由东北农业大学从俄罗斯西伯利亚中心植物园引进。该品种具有良好的抗寒、抗旱、耐重金属胁迫及盐碱胁迫的能力，对不良的生态环境适应性更强且能产生大量可育种子[1,7]。‘鲁赫’刺蔷薇观赏性强，夏季花呈粉红色，花香浓郁，秋季果实色彩鲜红，可持久悬挂，经冬覆雪不落，且其枝条冬季呈红色，是非常漂亮的园林美化树种[1]。目前关于‘鲁赫’刺蔷薇的研究主要集中在其抗逆性[1]、播种繁殖[3]，及对‘鲁赫’刺蔷薇叶的抗氧化性研究[8]和‘鲁赫’刺蔷薇花中挥发性成分分析[9]，‘鲁赫’刺蔷薇种籽在果实中所占比例较大，而关于籽的研究鲜见报道。

本研究对‘鲁赫’刺蔷薇籽的营养成分、生物活性成分和体外抗氧化、抗炎活性进行研究，为‘鲁赫’刺蔷薇籽的深加工利用提供参考，对改善‘鲁赫’刺蔷薇资源的利用现状，扩展利用范围，开发新型食品和功能性食品基料具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

‘鲁赫’刺蔷薇籽来源于黑龙江锦绣大地生物工程有限公司。将‘鲁赫’刺蔷薇籽洗净，去除附在种子表面残余的果肉及残壳，置于40 ℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥。干燥后用粉碎机将其粉碎，过60目筛，于常温、干燥的环境下密封保存。 DPPH、没食子酸标准品、牛血清白蛋白、福林酚试剂、透明质酸酶、铁氰化钾、碳酸钠、硝酸铝等试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 营养成分测定

水分测定参照GB5009.3-2016《食品中水分的测定》；灰分测定参照GB5009.4-2016《食品中灰分的测定》；总糖测定采用苯酚-硫酸法，参照蔡红梅等[10]；蛋白质测定参照GB5009.4-2016《食品中蛋白质的测定》；脂肪测定参照GB5009.6-2016《食品中脂肪的测定》；矿物质元素测定采用火焰原子吸收光谱法，参照高志勇等[11]；膳食纤维测定参照GB5009.88-2016《食品中膳食纤维的测定》。

1.2.2 活性成分含量测定

1.2.2.1 样品提取：精确称取样品2.000 g3份，分别与50 mL 60%乙醇混合，在60 ℃条件下超声提取60 min。再以4000 r/min转速离心10 min，分别将3份提取液定容至50 mL，4 ℃保存备用。

1.2.2.2 总黄酮含量测定：总黄酮含量测定采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法，参照钱慧琴等[12]方法。取样品1.0 mL于25 mL容量瓶中，分别加入0.7 mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置6 min后加入0.7 mL 10%硝酸铝溶液，摇匀，6 min后再加入10 mL 1 mol/L氢氧化钠溶液，混匀，用30%乙醇稀释至刻度，15 min后测定510 nm处吸光值。以芦丁标准溶液吸光度为纵坐标，溶液质量浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为：y=0.0165x+0.0235 (R2=0.9991)。黄酮的含量以芦丁当量表示(mg芦丁/g干质量)。

1.2.2.3 总多酚含量测定：总多酚含量测定采用福林酚法，参照黄雅等[13]方法。取提取液1.0～10 mL容量瓶，加入5.0 mL 10%福林酚试剂，反应4～8 min，加入4.0 mL 7.5%碳酸钠溶液，混匀后定容至10 mL，于25 ℃恒温水浴1 h。在765 nm下测定吸光度。在相同条件下测定不同质量浓度的没食子酸吸光度，绘制标准曲线，得到回归方程为：y=0.0159x+0.0399 (R2=0.9994)，结果以没食子酸当量表示(mg没食子酸/g干质量)。

1.2.2.4 原花青素含量测定：原花青素含量测定采用香草醛盐酸比色法，参照放茂良等[14]方法。取1 mL样液于10 mL容量瓶，然后用60%乙醇定容至5 mL，加入2.5 mL 1% 的香草醛-乙醇溶液，再加入2.5 mL 浓HCl，充分混匀后，立即在500 nm波长下测其吸光值。用60%乙醇水溶液配制浓度为1 mg/mL儿茶素标准液，绘制标准曲线。得到的回归方程为:y=4.0737x+0.0032(R2=0.9992)。

1.2.3 体外抗氧化性测定

1.2.3.1 样品提取：分别取3份2.000 g样品放入锥形瓶中，加入40 mL 60%乙醇溶液，混匀，在60 ℃的条件下进行超声波辅助提取50 min，再以4000 r/min的转速离心15 min，分别将3份提取液定容至50 mL，保存备用。

1.2.3.2 DPPH自由基清除能力测定：DPPH自由基清除能力测定参照肖作为等[15]。用无水乙醇配置0.1 mmol/L的DPPH溶液，棕色瓶保存，应现用现配；将DPPH溶液2 mL及2 mL无水乙醇加入小棕色瓶中，混匀，室温下暗处静置30 min后，在517 nm下所测的吸光度为A0，2 mL样品溶液及2 mL DPPH溶液加入到另一个棕色瓶中，摇匀，室温下暗处静置30 min后，于517 nm下测定其吸光度为A1；同时2 mL测试样品溶液和2 mL无水乙醇混合后，操作同上，所测的吸光度为A2。

1.2.3.3 羟自由基清除能力测定：羟自由基清除能力测定采用水杨酸法，参照刘怡菲等[16]。将1 mL 9 mmol/L的FeSO4加入10 mL容量瓶，同时加入1 mL 9 mmol/L乙醇-水杨酸溶液，摇匀，再加入1 mL样品液和1 mL 6 mmol/L H2O2，摇匀，放置37 ℃水浴加热30 min，所测的吸光值为AX；将1 mL样品液替换为1 mL蒸馏水，重复上述操作，所测的吸光值为A0；另一个不加 H2O2，重复上述操作，所测的吸光值为AX0。

1.2.3.4 总还原力测定：总还原力测定采用FRAP法，参照贾玮等[17]方法。将6.00 mL FRAP试剂(0.3 mol/L醋酸盐缓冲液：10 mmol/L TPTZ：0.5 mL 20 mmol/L FeCl3= 10∶1∶1)加入烧杯中，加热至37 ℃，向其中加入0.2 mL样品溶液，0.6 mLH2O，混匀、静置10 min，于593 nm下测定吸光度。总还原力以达到相同吸光值所需FeSO4的毫摩尔数衡量。

1.2.4 体外抗炎性测定

1.2.4.1 样品提取：分别取3份2.000 g样品放入锥形瓶中，加入40 mL 60%乙醇溶液，混匀，在55 ℃的条件下进行超声波辅助提取60 min，再以3000 r/min的转速离心20 min，分别将3份提取液定容至50 mL，保存备用。

1.2.4.2 透明质酸酶抑制率测定：透明质酸酶抑制率测定参照李祎等[18]和Grabowska等[19]的方法。准备四支试管A、B、C、D，将0.5 mL样液加入A、C管，0.5 mL蒸馏水加入C、D，0.5 mL透明质酸酶加入A、C管中，0.5 mL醋酸缓冲液加入B、D管中，40 ℃保温20 min；四管分别再加入0.1 mL的0.25 mmol/L CaCl2，40 ℃保温20 min；在四管分别加入0.5 mL 0.6 mg/mL透明质酸钠，40 ℃保温20 min；在四管中分别加入0.5 mL蒸馏水、0.1 mL 0.4 mol/mL NaOH溶液和0.5 mL硼酸溶液，沸水浴10 min，冰浴5 min，室温5 min；在四管分别加入1 mL P-DAB试剂，充分振荡，再分别加入4 mL无水乙醇，室温静置10 min后，于585 nm处测定吸光度值。平行测定3次，计算抑制率。

1.2.4.3 白蛋白变性抑制率测定

白蛋白变性抑制率测定参照贺子倩[20]等。取3 mL 2%牛血清蛋白(溶于pH5.5 0.1 mol/L醋酸盐缓冲液中)，于37 ℃保温20 min，后加入2 mL的待测样液于试管中，混匀，于70 ℃准确水浴10 min后迅速冷却至室温。在660 nm处测定样品吸光值。用蒸馏水代替待测样品为对照组，吸光值记为A0，试验组吸光值记为A。平行测定3次，计算抑制率。

1.3 数据处理

使用Excel 2013、SPSS Statistics和Origin 2018软件进行数据统计分析和图表绘制。

2 结果与分析

2.1 营养成分分析

‘鲁赫’刺蔷薇籽营养成分测定结果见表1。‘鲁赫’刺蔷薇籽的千粒重为(18.014 ± 0.12) g，营养成分中总糖含量最高，占(24.78 ± 0.65)%；其次是蛋白质，占(15.47 ± 0.16)%；灰分含量最少，占(2.33 ± 0.32)%；其余水分含量占(9.33 ± 0.95)%；总脂肪占(10.76 ± 0.21)%；总膳食纤维占(9.62 ± 0.42)%。考虑到‘鲁赫’刺蔷薇的种植位置、采摘季节和处理方式的不同，各成分含量数据可能存在一定偏差。

表1 ‘鲁赫’刺蔷薇籽的营养成分含量

‘鲁赫’刺蔷薇籽矿物质含量测定结果见图1。所测矿物质元素中，镁的含量最高，达到4412 mg/kg；其次是钾，含量达3234.2 mg/kg；最少的是铜，仅有0.98 mg/kg。所测的矿物质元素总值为8071.21 mg/kg，占‘鲁赫’刺蔷薇籽的0.81%。钾、镁的含量较高，均为人体所需的矿物质元素，是体内多种细胞基本生化反应的必需物质，适当摄入有助于维持神经健康、心跳规律正常，可以预防中风，并协助肌肉正常收缩。

图1 ‘鲁赫’刺蔷薇中各矿物质元素含量

2.2 活性成分分析

‘鲁赫’刺蔷薇籽活性成分测定结果见表2。‘鲁赫’刺蔷薇籽的活性成分中含有较多的原花青素，含量达到(12.84±0.65) mg/g；总多酚含量次之，为(6.08±0.55) mg/g；而总黄酮含量最少，仅有(1.13±0.11) mg/g。从数据中可以看出‘鲁赫’刺蔷薇籽的活性成分中含有较丰富的原花青素，而马嘉艺等[21]证明原花青素在抗衰老、抗氧化具有良好的作用，说明‘鲁赫’刺蔷薇籽在医用和保健等方面具有一定的利用价值。

表2 ‘鲁赫’刺蔷薇籽的活性成分含量 mg·g-1

2.3 体外抗氧化性评价

通过DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、总还原力对‘鲁赫’刺蔷薇籽的体外抗氧化性进行评估，结果见图2。随着样液的质量浓度的提高，DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、总还原力均增强。当提取液的质量浓度达到5 mg/mL时，DPPH自由基清除能力达到(88.87 ± 1.25)%、总还原能力达到(40.71 ± 0.85) mmol FeSO4/g、羟基自由基清除能力达到(89.86 ± 0.90)%。可以推测‘鲁赫’刺蔷薇籽具有较强的抗氧化能力，在医用、保健和生理等方面具有一定的利用价值。

图2 ‘鲁赫’刺蔷薇籽的体外抗氧化性

2.4 体外抗炎性评价

‘鲁赫’刺蔷薇籽的醇提物对透明质酸酶和白蛋白变性的抑制作用见图3。由图3A可以看出，随着‘鲁赫’刺蔷薇籽醇提物质量浓度的提高，其对透明质酸酶的抑制效果增强。醇提物浓度在5 mg/mL时对透明质酸酶有较高的抑制率，为(83.18±0.28)%，与阳性对照双氯芬酸钠(96.87±0.23)%相差不多。由图3B可以看出，‘鲁赫’刺蔷薇籽对白蛋白变性的抑制率随醇提物浓度的提高而增强。醇提物浓度为5 mg/mL时对白蛋白变性有较高的抑制率，为(93.29±0.36)%，与阳性对照双氯芬酸钠(95.35±0.27)%相近。由此推测‘鲁赫’刺蔷薇籽的醇提物中可能含有一些炎症抑制因子，起到抗炎作用，有潜力被用于医疗领域中炎症的舒缓。

图3 ‘鲁 赫’刺蔷薇籽的体外抗炎性

3 结论

‘鲁赫’刺蔷薇籽中含有较高含量的总糖、蛋白质、脂肪等成分，营养物质丰富；还含有原花青素、总多酚、总黄酮等生物活性物质，是良好的生物活性物质来源。‘鲁赫’刺蔷薇籽表现出良好的体外抗氧化性，具有很高的总还原力、DPPH自由基和羟基自由基清除能力。‘鲁赫’刺蔷薇籽能有效抑制透明质酸酶和白蛋白变性，具有优异的体外抗炎性。综上，‘鲁赫’刺蔷薇籽具有在功能性食品和药品领域的应用潜力，具有良好的应用前景。