牛呼吸道疾病综合征病例的病原探析

邵芳芳

（江口县闵孝镇农业服务中心，贵州 江口 554400）

0 引言

在一个养牛场当中，引进一批肉牛。当肉牛运回3d 之后就发现肉牛存在体温升高以及咳嗽和喘息等症状，而且还伴随着浆液性流鼻涕，呼吸严重困难等。在运进来的牛当中还有一部分牛的血液是比较稀的。短时间内已经有18 头牛死于这种疾病的折磨下，这对于畜养场来说损失是非常惨重的。牛存在的这些症状与感冒是非常相似的，我们为了能够预防其他的牛感染这种疾病就需要对其进行检验。在检验的过程当中利用了野间调查、病理观察以及对这种病原进行分析等。在这个基础上我们提出了相应的综合防治的措施。

1 材料与方法

1.1 材料

利用无菌方式采取病死牛的肝部以及肺部的相关组织，并进行细菌分离，同时将采取出来的肺脏组织研磨，需要注意的是在研磨的过程中要加入一定量的PPLO 支原体培养液。然后对这些样品进行冷冻，再分别对其解冻，先后3 次，将其保存在-20℃的冰箱当中。某兽医研究所细菌实验室已经分离出支原体阳性对照GL-1，并对其鉴定和保存。在实验动物中心中购买昆明种小鼠18～20g。

1.2 方法

（1）进行野外的调查，对牛的临床症状以及它的病理变化进行细致的观察，对其发病的情况进行询问，再对死后的牛进行解剖，可以用肉眼观察他们的器官的形状。

（2）对细菌进行分离以及鉴定：对生病死亡后的肉牛的肝的组织以及肺的组织进行改变，使其成为能够进行接触的组织，然后把已经制定好的接触组织进行相应的加固，然后对他们进行革兰氏的染色，把染色以后的接触组织放在显微镜下对其进行观察，之后再将肝的组织以及肺的组织分别放置在指定的兔血琼脂平板上以及TSB 的平板上，然后根据之前实验成功的方法对他们进行培养。但是培养的环境是有一定的要求的，需要在37℃下，5%的二氧化碳培养箱当中。培养24～48h 的时候需要对细菌的生长情况进行观察，对优势的菌落进行取优以及评价。

（3）对细菌分离进行生物测定我们利用的是生物降解特性实验的方法。一个菌株的当个真菌落下，对其进行生物测定。将0.2mL 的单滴接种在微生物的化学试管当中，就像葡萄糖、甘蔗、芥末糖以及乳糖等。在存有尿素等具有生物测定的试管当中，必须使用无菌的液蜡，放置37～48h 左右。对其冷却后的反应结果进行观察。

（4）支原体的分离、培养以及形态学的鉴定：把生前有病的牛的肺组织切割成研磨碗的形状，在其中加入3mL 的PPLO 支原体培养基，对其充分的研磨，4000r/min 离心十分钟，将其存在的沉淀物进行丢弃，再进行过滤。利用一次性的针头过滤器，滤液以1:10 的稀释液接种在PPLO 支原体培养基当中，在特定环境的培养箱当中培养72～96h 左右，对其进行细致的观察，如果观察到液体的介质已经发生变色的现象，就需要把线转移到PPLO固体介质之下。接种完毕以后，菌落需要在特定环境的培养箱当中放置72～96h。

2 结果与分析

2.1 现场调查、临床症状、病理变化

本次实验一共引进58 头小牛，在引入的这些小牛当中有38头是生病的，18 头是已经死亡的。牛在生病的过程当中，对其进行预防治疗以及己糖苷的治疗都是没有产生效果的，发病率以及死亡率分别是65.5%和22.4%。在这些病牛当中，他们的症状是体温偏高，咳嗦以及呼吸困难，也存在流鼻涕的症状。在解剖学当中，存在这样症状的疾病的位置一般是肺部以及胸部。解剖可以发展心脏尖端的叶子、心脏以及叶子都存在红肉退化的现象，而且肺间质肿块有明显的增加，大小一般像是黄奶酪和白奶酪那样大，在它们的气管以及支气管当中也存在像牛奶一样的白色泡沫。箱子里面有比较少的液体，一袋液体袋和液体呈现为黄色。

2.2 支原体分分离、培养及形态学鉴定

培养72h 之后会发生变色的现象，这时变色的培养基就需要利用特定的过滤针进行过滤。把过滤出来的滤液接种到PPLO 支原体液体以及固体培养基当中对其进行继代的培养。根据实验我们能够知道，随着实验时间的增加液体变色的速度就会越来越快。经过我们的观察能够看出来，这些液体会在1～2d 的时间之内颜色会彻底改变，会从红色变成褐色，但是变色之后的培养基它的颜色看起来是非常平均的，里面也没有其他的杂质。在PPLO 的固体培养基上，还可以观察到有一些和我们平常用的针头一样大小的菌落在生长。把它们放在显微镜下，都会很明显地展现出一些菌落，而且这些菌落的形状都比较像“煎蛋”。经过观察我们还能够发现它们的核心都是非常的厚的，而且普遍向下生长到中间。如果观察比较仔细的话还能够发现它们的四周环绕着一层比较薄的薄层。我们把他们和各个菌落的形态相比较，能够初步将其鉴定为牛的支原体。

2.3 病原菌的分离结果

在实验当中我们能够发现存在有比较少量的革兰阴性菌，对肺组织进行染色，但还是不可以在肝组织当中见到它。如果在实验的过程当中对一定量的兔血琼脂平板进行一定程度的提高，这样一来其中的细菌就不可以对肝的组织进行分离，如果大小是一般的，它的形状是比较圆的，表面上的肺组织就可以在一定程度上提高，这样的就是一些性质比较湿的，颜色是灰白色的细菌。我们对这些细菌进行处理净化，然后把这些净化以后的细菌进行和一些比较新鲜的血液当中的琼脂板进行接种。在指定的条件之下对这些菌落进行孵育，一般情况下是24h 左右。在24h以后我们并没有发现琼脂平板当中存在黄色的物质，而且也没有其他的细菌在生长。通过研究我们能够看出来，这些真菌都是没有颜色的，表面也是非常光滑的，里面也不像其他的菌落一样有溶血。把A 组放在一般的条件下对其进行观察，一段时间后能够明显的观察到里面有比较显明的红色素。而且TSB 组当中在经过24h 以后就会出现比较显明的沉淀物。我们把这些菌落进行更进一步的检验，发展经过净化后的菌落是革兰阴性菌。

2.4 株细菌生化特性的鉴定

在实验的过程当中我们可以利用生化特性的实验方法，对在其中分离出来的物质进行层层的鉴定，我们能够发现这些分离物可以对一些糖类进行分解，像蔗糖以及葡萄糖等等。分离出来的这些菌的性质和粘质沙雷氏菌的性质大体是一致的。

2.5 药敏实验和治疗结果

结合药敏进行实验的结果，在肉牛的机体当中有比较远见的犬毒以及新卡尼林敏感和阿替西林，而且对真菌以及青霉素是比较敏感的。但是对于多合子细菌的B-以及向下的尼西林VI 不是非常的敏感的。对于聚石灰B 以及青霉素额利福库是非常敏感的。对于先锋六号以及其他的都是没有任何的反应的物质的。在家中，有一些牛会有流眼泪的症状，与感冒的症状是差不多的，伴随有咳嗽以及稀释的情况，像这样的牛我们就需要对其进行过消毒，时刻对这些牛进行观察，如果在这个过程当中，牛产生粪便，我们可以对其进行收集并对其进行化验分析。在这个过程当中我们需要用到鹦鹉速以及比较零碎的半松树，这些可以与牛的疾病症状进行对抗。但是牛需要有流泪以及咳嗽的症状。运进来的这些牛当中还有一部分除了有以上等方面的症状之外还伴随着扩张，对于这样的牛我们就需要对其进行加上治疗，并且需要和其他的牛分离开来。在牛的肌肉上面需要进行注射，持续3～5d 的时间，这样一来可以在很大程度上避免其他的肉牛传染。也需要对其加强管理，需要增加适量的多维微量元素，这样一来就能够在一定程度上提高抗逆转。当8d 之后全部的牛都接受了治疗之后，这个时候疾病就能够得到一定程度的控制，而且没有发现其他的疾病例子。

3 结语

进行实验的这些样品并没有进行病毒的检测。这个实验室分离的牛支原体以及粘质沙雷菌会对大观霉素以及阿米卡星和庆大霉素、新霉素等有高度的敏感性。利用大观霉素以及地塞米松进行联合来对这样的疾病进行治疗，经过实验能够知道这样的方式起到的效果是比较有效的。最后，将疾病的发生率控制在一定程度之后，就没有发现存在有其他的病例。从这里可以看出来，能够引起BRDC 的病原体是支原体以及粘质沙雷氏菌的混合感染。