仁和健太易酵素对人体T淋巴细胞和免疫球蛋白的影响

张国栋，徐向荣，郑俊云，王金钱，黄武军，李 欣，王 鸿

仁和健太易酵素对人体T淋巴细胞和免疫球蛋白的影响

张国栋1，徐向荣1，郑俊云1，王金钱2*，黄武军3，李 欣3，王 鸿4

1. 江西仁仁健康产业有限公司，江西 樟树 331200 2. 景德镇学院，江西 景德镇 333000 3. 仁和（集团）发展有限公司，江西 樟树 331200 4. 天津市第三中心医院，天津 300170

探究仁和健太易酵素对人体T淋巴细胞和免疫球蛋白的影响，评价中药酵素对提高人体免疫力的作用。采用组间和试验前后对照设计比较法，按剂量口服仁和健太易酵素90 d，以白细胞计数、人体外周血T淋巴细胞亚群CD4/CD8值和人体血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量为指标，临床观察该酵素对人体免疫力的作用。口服仁和健太易酵素对受试者CD4/CD8和IgG、IgA、IgM含量以及白细胞计数，试验前后及试验90 d后较对照组均升高，差异有统计学意义（＜0.05）。仁和健太易酵素具有一定的维持和增强人体免疫力的功效。

仁和健太易酵素；细胞免疫；体液免疫；人体免疫力；CD4/CD8；免疫球蛋白

植物酵素是以可用于食品加工的植物为主要原料，经微生物发酵制得的含有特定生物活性成分可供人类食用的酵素产品[1-2]，传统酵素的主要原料为果蔬汁、食用菌等。近年来随着中医药在我国的守正创新发展，以“药食同源”中药材为原料的酵素在我国市场上逐渐占有一席之地。酵素能促进代谢和能量吸收，净化血液，抵抗外来病原菌感染，增强对细菌的抵抗力，活化与修复细胞组织，并强化细胞功能，促进人体新陈代谢营养和能量转换，从而使人体获得一种平衡状态，并以此来增强人体免疫力[3]。

仁和健太易酵素为江西仁仁健康产业有限公司研制的新一代中药酵素，处方由人参、茯苓、大枣、蜂蜜、桑椹、黄精、枸杞、覆盆子、松花粉、甘草等中药材组成，依次经乳酸发酵、酵母发酵和醋酸发酵、口感调配而成。为评价本品对提升人体免疫力的作用，天津市第三人民医院筛选125例受试者，以人体外周血T淋巴细胞亚群CD4、CD8所占的比例及CD4/CD8值，人体血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量，白细胞计数为指标，进行临床试验研究。

1 材料与方法

1.1 受试材料

仁和健太易酵素（受试品，液体，规格30 mL/瓶，批号20200901）。安慰剂（对照品，液体，规格30 mL/瓶，批号20200902）含水、糖、色素等无功效成分，在剂型、口感、外观和包装上与受试品一致。以上均由江西仁仁健康产业有限公司提供。

1.2 受试对象

1.2.1 纳入标准 （1）产品适用于18岁（含18岁）至69岁的人群。（2）经体检符合条件[4]的自愿受试者。（3）免疫相关健康评分表的综合评价得分≤60。（4）入组受试者的外周血T淋巴细胞亚群CD4/CD8值（1.4～2.0）及血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量（6～16、0.76～3.9、0.4～3.45 g/L）在正常值范围以内。（5）所有受试者均签署知情同意书。

1.2.2 排除者标准 （1）不能经口进食或不能按规定食用该产品者。（2）年龄在69岁以上者，妊娠或哺乳期妇女，对该产品不耐受或过敏者。（3）主诉不清者。（4）严重职业病等重症患者。（5）合并心、脑、肝、肾和造血系统等严重疾病及精神病患者。（6）受试者的外周血T淋巴细胞亚群CD4、CD8所占的比例及CD4/CD8值，血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量高于正常值上限或低于正常值下限。（7）受试者患有免疫相关性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、系统性血管炎、硬皮病、天疱疮、皮肌炎、混合性结缔组织病、原发性血小板紫癜、自身免疫性溶血性贫血、桥本氏甲状腺炎、原发性黏液性水肿、甲状腺机能亢进、溃疡性结肠炎等。（8）未按规定食用该产品者，资料不全影响疗效或安全性判断者。（9）短期内食用与该产品作用有关的食物或药物，影响结果判断者。

1.3 试验设计与分组

采用试验前后和组间2种对照设计法，先根据随机盲法分组，将受试者随机分为试验组和对照组，再以白细胞计数作为分层因素进行分层，将受试者按照白细胞计数≤4.2×109/L和白细胞计数＞4.2×109/L分为2层，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。本试验经天津市第三人民医院伦理委员会批准，批准号为[科伦]202006012。

1.4 试验方法

试验组口服仁和健太易酵素，2次/d，1瓶/次，食用时间90 d。对照组口服安慰剂，2次/d，1瓶/次，食用时间90 d。

1.5 仪器与试剂

Modular P全自动生化分析仪（德国罗氏诊断公司）；TBA-120全自动生化分析仪（日本东芝公司）；Sysmex-K21三分类血液分析仪（Sysmex公司）；Sysmex血细胞分析稀释液（Sysmex公司）；生化试剂盒由德国罗氏诊断有限公司生产，由德国罗氏诊断产品（上海）有限公司提供。

1.6 结局指标

1.6.1 健康状况调查 按照健康调查问卷（表1）详细询问受试者，试验组和对照组在试验开始前和试验结束后各问询1次，试验组在口服第45天进行试验期间问询，在功效指标判定时加以参考。

1.6.2 主观评价指标

（1）免疫相关健康评分：按照免疫相关健康评分表（表2）详细询问受试者，免疫相关健康评分表总分100分。在试验开始前和试验结束后各问询1次，试验组在口服第45天进行试验期间问询并评分。

（2）免疫相关健康评分判定标准：该问卷分为个体总体感受、心理感受、生理感受共3个方面。评分时要考虑每个方面的得分情况和整个问卷的得分情况，采用每个方面得分和总体得分相结合的评定方法对受试品试验前后的效果进行评价。计算每个方面的得分：按照分值的高低分为差、较差、中等、良好4个等级，每个等级有分值区间，在同一个区间内，分值越高说明越趋向免疫健康。见表3。

1.6.3 功效指标 功效指标分别在试验开始前和试验结束后各检查1次。

（1）细胞免疫指标：分别在试验前后采集试验组和对照组受试者外周血，采用流式细胞仪检测人体外周血T淋巴细胞亚群CD4、CD8所占的比例及CD4/CD8值。

表1 健康调查问卷

Table 1 Health questionnaire

编号问题答案 1您是否是过敏体质是（食物、花粉、皮毛、其他） 否 2您近1个月内是否发生过感冒是（次数：＿＿） 否 3您近2个月内是否做过核酸检测是（检测结果：阴 阳） 否 4您现阶段是否服药是（试验期间是否更换药物种类：是 否） 否 5您在试验期间是否同时服用其他保健食品是 否

表2 免疫相关健康评分问卷

Table 2 Immune-related health score questionnaire

评分项目序号相关条目从不偶有(＜15 d)少部分时间有(＜1个月，≥15 d)一半时间有(＜2个月，≥1个月) 个月，≥1个月)大部分时间有(＜3 个月，≥2个月) 个体总体感受（回忆3个月内相关感受）1我容易过敏54321 2我好像比别人容易生病54321 3干燥的天气让我不舒服54321 4潮湿的天气让我不舒服54321 5我感到身体沉重，不松快54321 6我很想睡觉，总也睡不够54321 评分项目序号相关条目从不偶有（＜3 d）少部分时间有（＜6 d，≥3 d）一半时间有（＜15 d，≥6 d）大部分时间有（≥15 d） 心理感受（回忆1个月内相关感受）1我心情很愉快12345 2我容易焦虑54321 3我精神紧张54321 4我能够集中注意力做事情12345 5我的记性不好，容易忘事54321 6失眠让我苦恼54321 7我精力充沛12345 评分项目序号相关条目从不偶有(＜3 d)少部分时间有(＜6 d，≥3 d)一半时间有(＜15 d，≥6 d)大部分时间有(≥15 d) 生理感受（回忆1个月内相关感受）1我食欲不错12345 2我感到胃部（或腹部）胀满不舒54321 3我的大便不成形54321 4我的胃脘部（或背部或腰膝部）怕怜54321 5我的脸色萎黄没有光泽54321 6呼吸时，我感到气短54321 7我体力不错，不容易感到疲乏12345

表3 免疫相关健康评分判定标准

Table 3 Criteria of immune-related health rating scale

项目差较差中等良好 个体总体感受6≤得分≤1212＜得分≤1818＜得分≤2424＜得分≤30分 生理感受7≤得分≤1414＜得分≤2121＜得分≤2828＜得分≤35分 心理感受7≤得分≤1414＜得分≤2121＜得分≤2828＜得分≤35分 综合评价20≤得分≤4040＜得分≤6060＜得分≤80，单个方面得分均需到中等，但未达到良好80＜得分≤100，单个方面得分均需达到中等或良好

（2）体液免疫指标：分别在试验前后采集试验组和对照组受试者外周血，采用免疫比浊法检测人体血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量。

（3）结果判定：白细胞计数≤4.2×109/L的分层，试验组试验前后自身对照及与对照组组间比较：白细胞计数、CD4/CD8值及IgG、IgA、IgM含量至少有一个指标升高，且有显著性差异（＜0.05），判定结果为阳性。

试验组和对照组在试验后白细胞计数、CD4/CD8值及IgG、IgA、IgM含量中的任意一项指标下降到正常值低限以下或升高到正常值范围以上，则结果判定为阴性，或出现阴性结果的受试者数量超过全部受试者的5%，则结果判定为阴性。

1.7 统计学分析

自身对照资料采用配对检验，组间均数比较采用成组检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用’检验或秩和检验；方差齐但变异系数太大（如变异系数＞50%）的资料应用秩和检验。数据采用表示。

2 结果与分析

2.1 受试者基线特征

纳入受试者125例，试验组63例、对照组62例。试验组有8例、对照组有8例未在规定时间按时复查，符合受试者排除标准，有效受试者试验组55例、对照组54例，试验组、对照组受试者脱失率分别为12.7%、12.9%。两组在生命体征和健康调查、免疫健康状况评分及细胞和体液免疫指标进行分析，结果显示两组在上述方面差异无统计学意义（＞0.05），两组具有基线可比性，符合统计要求。

2.2 主观评价

由表4可见，试验组试验后个体总体感受、生理感受、心理感受和综合评分高于试验前，差异有统计学意义（＜0.01）；试验后试验组个体总体感受、生理感受、心理感受和综合评分高于对照组，差异有统计学意义（＜0.01）。对照组试验前后比较，个体总体感受、生理感受和综合评分差异无统计学意义（＞0.05）。

表4 仁和健太易酵素对受试者免疫相关健康评分的影响()

Table 4 Effects of Renhe Jiantaiyi Enzyme on immune-related health scores in subjects ()

评分项目试验组(n = 55)对照组(n = 54)95% CIP试验前试验后95% CIP试验前试验后95% CIP 综合评分54.75±5.6759.05±5.81**##1.28～5.350.00854.07±4.4454.31±4.57−1.28～2.410.8741.31～5.670.007 个体感受17.07±2.3418.31±2.00**##0.96～2.130.00917.15±1.8417.30±1.60−0.96～1.130.9310.72～2.030.009 心理感受19.47±2.7520.69±2.30**##1.03～3.720.00719.02±2.1318.85±1.89−1.83～1.310.9461.86～2.390.007 生理感受18.16±2.7520.02±2.51**##1.83～3.670.00617.91±2.0318.17±1.77−1.75～1.370.711.74～3.380.006

与同组试验前比较：**＜0.01；与对照组试验后比较：##＜0.01

**< 0.01same group before test;##< 0.01control group after test

2.3 客观评价

2.3.1 细胞免疫、体液免疫指标 由表5可见，试验组试验后CD4/CD8值，IgG、IgA、IgM含量较试验前有上升趋势，具有统计学差异（＜0.05）；试验后试验组CD4/CD8值，IgG、IgA、IgM含量较对照组有所上升，具有统计学差异（＜0.05）。

2.3.2 白细胞计数分层后免疫指标 根据白细胞计数≤4.2×109/L分为2层，试验前白细胞计数≤4.2×109/L的受试者试验组11例，对照组12例，试验过程中分别脱失1例，所以有效白细胞计数≤4.2×109/L的分层为试验组10例，对照组11例，进行单独统计分析。

由表6可见，白细胞计数≤4.2×109/L的分层，试验组试验后CD4/CD8值，IgG、IgA、IgM含量，白细胞计数较试验前升高，差异有统计学意义（＜0.05）。试验后试验组CD4/CD8值、IgM含量、白细胞计数较对照组有所上升，差异具有统计学意义（＜0.05）。

2.4 不良反应观察

试验组、对照组均未见过敏及其他不良反应情况发生。两组试验后胸透、腹部B超、心电图、血、尿、便常规及肝肾功能各指标未见异常，两组安全可靠。

表5 仁和健太易酵素对受试者细胞免疫、体液免疫指标的影响()

Table 5 Effects of Renhe Jiantaiyi Enzyme on cellular immunity and humoral immunity in subjects ()

指标试验组(n = 55)对照组(n = 54)95% CIP试验前试验后95% CIP试验前试验后95% CIP CD4/CD81.46±0.141.85±0.20*#0.35～1.030.0351.40±0.151.44±0.20−0.81～0.620.8300.62～1.230.031 IgG/(μg·mL−1)8 040.38±569.198 233.42±715.29*#1 271.06～2 316.130.0418 033.88±597.958 040.83±687.03−1 036.16～2 637.740.9271 262.37～2 463.210.040 IgA/(μg·mL−1) 1 903.10±113.411 980.41±152.78*#361.18～1 581.610.0441 920.46±111.661 926.29±149.36−132.24～368.630.948 381.21～1 661.620.047 IgM/(μg·mL−1)1 305.07±87.871 410.28±115.55*#111.47～1 227.250.0311 310.79±82.621 292.30±101.90−381.36～281.720.913 258.52～1 174.360.029

与同组试验前比较：*＜0.05；与对照组试验后比较：#＜0.05

*< 0.05same group before test;#< 0.05control group after test

表6 仁和健太易酵素对白细胞计数≤4.2×109·L−1的受试者细胞免疫、体液免疫指标的影响()

Table 6 Effects of Renhe Jiantaiyi Enzyme on cellular immunity and humoral immunity in subjects with WBC count ≤ 4.2 × 109·L−1 ()

指标试验组(n = 10)对照组(n = 11)95% CIP试验前试验后95% CIP试验前试验后95% CIP CD4/CD81.44±0.101.87±0.19*#0.38～1.120.0371.41±0.191.40±0.14−0.63～0.790.9830.81～1.030.034 IgG/(μg·mL−1)7 855.62±631.207 908.93±776.12*1 251.31～2 459.680.0418 134.18±739.578 184.04±753.68−1 336.51～2 581.390.914−1 211.28～2 859.470.730 IgA/(μg·mL−1)1 859.98±88.241 984.46±118.71*382.72～1 438.170.0461 934.03±84.951 988.99±143.32−169.57～627.410.923−1 362.76～1 416.610.960 IgM/(μg·mL−1)1 265.56±86.991 386.67±150.02*#351.47～1 131.620.0321 302.01±78.131 307.41±124.19−338.49～1 203.720.990351.53～1 218.720.048 白细胞计数4.04±0.155.02±1.00*#1.43～1.740.0374.06±0.294.53±0.780.59～2.160.0831.37～1.840.046

与同组试验前比较：*＜0.05；与对照组试验后比较：#＜0.05

*< 0.05same group before test;#< 0.05control group after test

3 讨论

3.1 主观和客观指标

试验组试验后个体总体感受、生理感受、心理感受和综合评分高于试验前，差异有统计学意义（＜0.01）；试验后试验组个体总体感受、生理感受、心理感受和综合评分高于对照组，差异有统计学意义（＜0.01）。

试验前试验组年龄、性别、综合评价、CD4/CD8、IgG、IgA、IgM与对照组比较，差异无统计学意义（＞0.05）。试验组试验后CD4/CD8值，IgG、IgA、IgM含量较试验前有所上升，差异有统计学意义（＜0.05）；试验后试验组CD4/CD8值，IgG、IgA、IgM含量，较对照组有所上升，差异有统计学意义（＜0.05）。白细胞计数≤4.2×109/L的分层，试验组试验后CD4/CD8值、IgG、IgA、IgM含量、白细胞计数较试验前升高，差异有统计学意义（＜0.05）。试验组和对照组在试验前后CD4/CD8值及IgG、IgA、IgM含量均在正常值范围内，根据《增强免疫力功能评价检验方法修订—有助于维持正常免疫力功能人体试食试验方法程序》中的判定标准，表明仁和健太易酵素有助于维持正常免疫功能；同时根据方案中的结果判断标准，表明仁和健太易酵素达到了维持和增强人体免疫功能试验阳性结果标准的要求。

3.2 不良反应

试验前后，受试者胸透、腹部B超、心电图均基本在正常范围内；血、尿、便常规及肝肾功能各项指标均无显著性差异，且无过敏反应和其他不良反应发生。说明本品对受试者身体健康无不良影响。

以中药材为原料的酵素食品在提高抗氧化和抑菌等活性方面比传统酵素更符合现代人生活特点，服用中药酵素是全民保健的一个大趋势[5]。中药酵素含有的中药成分经微生物发酵后，能产生多种代谢成分，如大量有机酸、γ-氨基丁酸、维生素、各种氨基酸成分等，以及植物次生代谢产物，如酚类物质和皂苷类物质，风味物质、酶活性等也会发生变化。这些成分具有保健功能，能够全面改善机体免疫功能，起到强身健体作用，对特定症状有显著的改善作用[6-9]。仁和健太易酵素中的人参、茯苓、大枣、蜂蜜为君药，具有补中益气之功效；桑椹、黄精、枸杞为臣药，具有补肾填精之功效，助君药益气；覆盆子、松花粉、甘草为佐使药，益气，补肾精，能助君、臣之药以加强益气[10]。临床试验结果证明，本品具有提升免疫力的作用，为该产品的功能研究与市场开发提供了理论依据。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

[1] 工业和信息化部. 植物酵素: QB/T 5323—2018 [S]. 2018: 36-38.

[2] 中国生物发酵产业协会团体标准, 酵素产品分类导则 T/CBFIA 08001-2016 [S]. 2016: 42-46.

[3] 敖梅英, 王鑫, 范友隆, 等. 食用型酵素产品的研究进展 [J]. 安徽农业科学, 2016, 44(30): 64-66.

[4] 买欢, 方伟. 免疫功能低下人群流感病毒感染防治进展 [J]. 中华传染病杂志, 2019, 37(7): 441-445.

[5] 沈燕飞, 聂小华, 孟祥河, 等. 酵素食品加工微生物与功能特性研究进展 [J]. 浙江农业科学, 2019, 60(1): 112-116.

[6] 尹欢, 方伟. 药食两用植物酵素活性成分及发酵机理研究进展 [J]. 农产品加工, 2020(3): 89-91.

[7] 郭爽, 张佐政, 曲佳乐, 等. 敖东酵素对小鼠体液免疫功能的影响 [J]. 食品科技, 2014, 39(12): 43-46.

[8] 魏颖, 倪庆桂, 马勇等. 自制研发酵素与竞品免疫调节和抗氧化能力的比较[J]. 生物工程, 2015, 40(11): 24-27.

[9] 夏晚霞, 张尚微, 葛亚中等乳酸菌发酵转化人参皂苷[J]. 现代食品科技, 2018, 34(9): 136-142.

[10] 中国药典[S]. 一部. 2020: 231-236.

Effects of Renhe Jiantaiyi Enzyme on human T lymphocytes and immunoglobulin

ZHANG Guo-dong1, XU Xiang-rong1, ZHENG Jun-yun1, WANG Jin-qian2, HUANG Wu-jun3, LI Xin3, WANG Hong4

1. Jiangxi Renren Health Industry Co., Ltd., Zhangshu 331200, China 2. Jingdezhen University, Jingdezhen 333000, China 3. Renhe (Group) Development Co., Ltd., Zhangshu 331200, China 4. Tianjin Third Central Hospital, Tianjin 300170, China

To study the effect of Renhe Jiantaiyi Enzyme (仁和健太易酵素) on human T lymphocytes and immunoglobulin, and to evaluate the effect of traditional Chinese medicine enzyme on improving human immunity.The control design and comparison method between groups and before and after the test were used. Renhe Jiantaiyi Enzyme was orally administered for 90 d. The effects of Renhe Jiantaiyi Enzyme on human immunity were observed by the white blood cell count, CD4/CD8 value of T lymphocyte subsets in human peripheral blood and the contents of IgG, IgA and IgM in human serum as indicators.The contents of CD4/CD8, IgG, IgA, IgM and leukocyte count of subjects treated with Renhe Jiantaiyi Enzyme were significantly higher than those of the control group and before the test (< 0.05).This product has the effect of maintaining and enhancing human immunity.

Renhe Jiantaiyi Enzyme; cellular immune; humoral immunity; human immunity; CD4/CD8; immuneglobulin

R285.64

A

0253 - 2670(2022)04 - 1121 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.04.020

2021-10-20

张国栋（1982—），男，硕士，讲师，江西樟树人，主要从事食品发酵与酿造研究。Tel: 18279577366 E-mail: 250746999@qq.com

王金钱，博士，副教授，江西乐平人，主要从事中药量效关系研究。Tel: 17379828989 E-mail: 157670292@qq.com

[责任编辑 潘明佳]