太子参薄层色谱定性鉴别方法研究*

郭承军 张宁 迟名锋 张晓丽

(1.山东省运动康复研究中心,山东 济南 250101；2.山东中医药大学,山东 济南 250355)

太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellariaheterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根[1]。除1977年版《中国药典》外，其它历版均有收载。太子参性甘，味微苦、平,归脾、肺经。功能益气健脾、生津润肺，用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴不足、自汗口渴、肺燥干咳等症。现代研究表明，太子参主要含有氨基酸、多糖、三萜皂苷、环肽等活性成分[2-5]及以糠醇为代表的挥发性成分[6]，具有抗疲劳、抗缺氧、抗应激、抗衰老等药理作用[7-10]。近年来随着本品在保健品食品领域的应用不断扩大，市场需求量大增，栽培地域自山东、江苏、安徽至福建、贵州，横跨多个气候带，流通品系也日益增多。但2020年版中国药典太子参质量标准项下仍无含量测定项，定性鉴别是针对氨基酸类化合物的薄层色谱法，专属性差，对于复方中太子参的定性鉴别实际意义不大。如何有效加强太子参质量控制，制定科学的定性定量方法，已成为当务之急。

太子参环肽类成分是具有科属特征的一类成分，并具有较高的水溶性，太子参药材的质量标准曾于2010年版药典中增加了太子参环肽B的含量测定，但于2015年版药典又匆匆删掉[11-12]。有学者[13-14]曾为识别植物环蛋白的存在，研究了环蛋白的薄层层析显色方法。刘训红等[15]报道了太子参针对环肽类成分的定性鉴别方法，但其后的研究文献中再未见相关报道，刘知远等[16]针对太子参的皂苷类成分进行了定性鉴别的方法研究，但专属性较差。廖金英等[17]学者还探讨了应用HPLC建立复方中太子参的定性鉴别方法，但操作复杂，成本较高。本文在上述研究基础上，以太子参环肽类成分为目标，从供试品溶液制备、展开剂优化、显色方法、方法耐用性等方面进行了系统研究，建立了专属性强、耐用性良好的太子参定性鉴别方法，并应用建立的方法对不同产地太子参药材及市售含太子参的常用中成药进行了太子参定性鉴别，取得了满意的结果。现报告如下。

1仪器与试药

1.1仪器 ZF-2型三用紫外分析仪(上海市安亭电子仪器有限公司)；JA2603B型万分之一分析天平(上海精科天美科学仪器有限公司)；KQ-5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HHS-2S型电子恒温不锈钢水浴锅(上海虞龙仪器设备有限公司)；UPR-II-40L型超纯水机(四川优普超纯科技有限公司)；GZX-9240MBE型电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司)。

1.2试药 硅胶G板[规格：10 cm×20 cm×(0.2～0.25)mm，青岛海洋化工厂；批号：20160715]；太子参对照药材(批号：121004-201709，中国食品药品检定研究院)；太子参药材购自药材公司(样品来源见表1)，均经笔者鉴定为石竹科植物孩儿参Pseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根。复方太子参颗粒(批号：190109，福建闽东力捷迅药业有限公司)、健胃消食片(批号：18070035，江中药业股份有限公司)、儿宝颗粒(批号：20190505，江西博达药业有限公司)、肾衰宁胶囊(批号：20190614，云南雷允上理想药业有限公司)，均由市场上购得。其他所用试剂均为分析纯。

表1 太子参药材来源

2 方法与结果

2.1薄层色谱条件 点样量：各5～10 μL；薄层板：硅胶G预制板；展开剂：三氯甲烷-甲醇(4∶1)；显色方式：展开、取出、晾干后，悬置于预加入盐酸3 mL耐高温玻璃缸(容积约2 L)内，密封，置已加热至110 ℃的烘箱中，加热酸解2 h，取出，放冷，挥净盐酸，喷以0.3%茚三酮乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，即得。

2.2供试品溶液制备

2.2.1制备方法优选 太子参环肽类成分在水、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯中均有一定的溶解度，应用不同方法分别制备供试品溶液。

供试品溶液Ⅰ:取福建太子参药材粉末5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，滤过，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

供试品溶液Ⅱ:取福建太子参药材粉末5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，滤过，蒸干，残渣加水20 mL使溶解并转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

供试品溶液Ⅲ:取福建太子参药材粉末5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，滤过，蒸干，残渣加水20 mL使溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次15 mL，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，每次15 mL，弃去氨洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

供试品溶液Ⅳ:取福建太子参药材粉末5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，滤过，蒸干，残渣加水20 mL使溶解并转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

取以上各供试液，按上述薄层条件点样、展开、取出晾干后，酸解，挥干、显色。结果以供试品溶液Ⅲ得到的薄层色谱特征斑点最多，背景干扰少，作为优选供试品溶液制备方法。色谱图见图1。

1.供试品溶液Ⅱ 5 μL； 2.供试品溶液Ⅱ 8 μL;3.供试品溶液Ⅰ 5 μL； 4.供试品溶液Ⅲ 8 μL;5.供试品溶液Ⅲ 5 μL; 6.供试品溶液Ⅳ 8 μL

2.2.2各供试品溶液制备 不同产地太子参供试品溶液：取不同产地太子参药材，按供试品溶液Ⅲ的制备方法制得各药材供试液。

含太子参中成药供试品溶液：取各中成药样品约相当于太子参原药材5 g的量，按供试品溶液Ⅲ的制备方法制得各中成药供试液。

太子参对照药材溶液：取太子参对照药材5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，滤过，蒸干，残渣加水20 mL使溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次15 mL，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，每次15 mL，弃去氨洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

2.3薄层色谱制备 取以上太子参对照药材溶液、太子参供试液及中成药供试液，按上述薄层条件点样、展开、取出晾干后，酸解，挥干、显色。

2.4结果 不同产地的太子参供试品薄层色谱中，在与太子参对照药材色谱相应位置上均显相同颜色的特征斑点，只是部分特征斑点的大小及颜色深浅与太子参对照药材色谱及不同产地太子参的色谱之间均存在较大差异。薄层色谱，见图2。

1.太子参对照药材 5 μL； 2.福建产太子参 5 μL;3.贵州产太子参5 μL； 4.山东产太子参 5 μL5.江苏产太子参 5 μL

含太子参常用中成药供试品薄层色谱中，市售复方太子参颗粒与健胃消食片供试品色谱在与太子参对照药材色谱相应位置上显同颜色的特征斑点，且与太子参对照药材色谱主斑点一一对应；儿宝颗粒供试品色谱中，可检出一个相同颜色的对应斑点；肾衰胶囊供试品色谱中，有两个相对应的斑点，但颜色不一致，可能因为其他成分的干扰所致。薄层色谱见图3。

1.太子参对照药材 5 μL；2.儿宝颗粒5 μL;3.肾衰宁胶囊5 μL；4. 复方太子参颗粒5 μL5.健胃消食片 5 μL

3 讨论

本文建立了太子参薄层色谱定性鉴别一种新的方法，同时进行了系统的方法学研究：以复方太子参颗粒与健胃消食片为对象，制备了各样品太子参阴性对照溶液，研究了本方法的专属性，并对供试品溶液的制备方法、薄层条件中展开剂比例、酸解时盐酸用量、酸解温度、酸解时间等关键参数进行了优选和耐用性试验。结果显示，本方法的专属性强，耐用性良好。优选的方法参数为：盐酸用量1～2 mL·L-1，酸解温度105 ℃～120 ℃，酸解时间1.5～2.5 h，茚三酮乙醇液浓度0.2%～0.3%，均可得到满意的薄层色谱。

由不同产地太子参的薄层色谱可以看出，药材色谱图与产地、栽培品系具有显著相关性，是否可以作为太子参不同产地、栽培品系的鉴别方法尚有待更多的实验数据支持。部分特征斑点大小或缺失的差异，反映出不同生境下各环肽含量的累积差异[18-21]，但不同产地的太子参药材色谱中，在与太子参对照药材色谱相应的位置上均显相同颜色的主斑点，可作为太子参定性鉴别的依据。

本文涉及的含太子参市售中成药现行质量标准中均收载了太子参的定性鉴别，经验证，本文建立的方法得到的色谱图与原方法比较:对于复方太子参颗粒与健胃消食片，本文建立的太子参鉴别方法得到的色谱图斑点更清晰、专属性更强；肾衰宁胶囊供试品色谱图较差，有干扰，能否通过改进供试品溶液的制备方法得到改善，还需要进一步的研究。

综上所述，本文建立的太子参薄层色谱鉴别方法针对太子参环肽类特征性成分，得到的色谱图斑点清晰、分离度高，专属性强，更由于目标成分具有较高的水溶性，在大部分含太子参的中成药中含量较高，有利于目标成分的检出，为新版药典中太子参药材定性鉴别的修订提供实验依据，也为含太子参中成药的质量标准提高提供参考。