HCV-RNA和抗HCV在丙肝病毒感染检测中的临床应用

钟志辉，邓波，张岳汉，林牧

广东省高州市人民医院 检验科，广东 高州 525200

0 引言

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是引起肝癌和肝硬化的重要致病原因，全球丙肝患者高达1.8亿人，不同地区HCV发病率有显著差异，发展中国家的感染率明显高于发达国家，如埃及等地的发病率可高达15%～20%，北欧地区不超过1%[1]。我国相关流行病学数据显示，HCV发病率与人群和地区差异性相关，不超过60岁的普通群体中流行率为0.43%，属于低流行区域，但存在显著的区域差异，东南地区的感染率较低[2]。研究显示抗HCV阳性率在肾透析、静脉给药和HIV感染的患者中显著升高，随着近年来检测技术的不断发展，通过流行病学和细胞分子生物学等方面的调查和检测对HCV的发现和预防产生重要的积极影响[3]。本研究以2019年6月-2020年11月在本院就诊496例门诊和住院患者为研究对象，分析HCV-RNA和抗HCV抗体在HCV感染检测中的应用价值，为丙肝患者的临床发现及HCV传播的预防提供支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以在本院进行检查的患者496例为研究对象，年龄18～59岁，平均（33.85±19.37）岁。纳入标准：①确诊HCV感染患者符合诊断标准[4]；②对研究内容知情同意且能够配合完成。排除标准：①并发甲型或乙型感染病毒感染的患者；②肝硬化患者；③自身免疫性肝炎患者；④寄生虫感染引发的肝病患者。所有入选对象均同意此项研究，医院伦理委员会批准。

1.2 方法

取患者静脉血4mL，无菌环境下离心分离得血清，-20℃保存。使用丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（免疫荧光法，苏州新波生物技术有限公司）检测血清中抗-HCV抗体，操作严格按照说明书步骤进行；使用核酸（RNA）提取试剂盒（磁珠法）进行RNA提取，丙型肝炎病毒（HCV）核酸测定试剂盒（PCR荧光探针法，中山大学达安基因股份有限公司）对样本中的HCV-RNA进行定量，操作严格按照试剂和仪器说明书步骤进行。

1.3 统计分析

使用SPSS 20.0软件进行所有数据的统计分析。计数资料以频数或百分率表示，进行卡方检验；计量资料以均数±标准差表示，进行student'st检验。P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCV-RNA和抗HCV对HCV感染患者的检出情况

对496份样品进行检测，HCV-RNA结果显示阳性73例，阴性423例，对HCV感染患者的检测敏感性为88.75%，特异性为99.52%；抗HCV结果显示阳性96例，阴性400例，对HCV感染患者的检测敏感性为90.00%，特异性为94.23%；二者联合检测阳性122例，阴性374例，对HCV感染患者的检测敏感性为97.50%，特异性为89.42%。HCVRNA和抗HCV联合检测的敏感性高于HCV-RNA检测，特异性低于HCV-RNA检测，差异均有统计学意义（P＜0.05）；抗HCV检测的敏感性和HCV-RNA检测的敏感性间的差异无统计学意义（P＞0.05）；抗HCV检测的特异性低于HCV-RNA检测，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 HCV-RNA 和抗HCV 对HCV 感染患者筛查的敏感度和特异度比较

2.2 HCV-RNA和抗HCV的检测结果比较

80例HCV感染患者中，HCV-RNA和抗HCV检出情况间的差异有统计学意义（χ2=7.469，P＜0.05），见表2。

表2 HCV-RNA 和抗HCV 的检测结果比较

3 讨论

HCV感染可引发慢性丙型感染，前期无明显临床表现，不易被察觉，多数患者发展为慢性感染，慢性HCV感染可进展为肝细胞癌或肝硬化，给患者和家庭带来极大的经济和生活负担。HCV流行暴发的主要因素有不安全的血液制品、医源性传播和吸毒等，研究显示，全球2015年HCV慢性感染患者约7100万，每年新发感染者约175万，死于感染或相关疾病的约40万，世界卫生组织于2016年提出消除HCV危害行动以应对全球面临的这一挑战[5]。王耀等[6]研究显示二级医院等医疗机构的HCV-RNA阳性检出率仍在较低水平，强化丙肝病毒感染检测能力，提升报告数量和质量，能够为相关卫生部门提供信息以制定合理有效的防治政策。

实验室检查结果是HCV感染的重要诊断依据，抗HCV和HCV-RNA检测是为常规的检测技术，根据国家对于丙肝筛查的相关规定，应为生化指标异常和易感者提供常规筛查服务，对抗HCV阳性患者提供HCV-RNA检查。HCV抗体可通过时间分辨免疫荧光法（TRIFMA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、化学发光法和胶体金快速试验法进行检测，其中TRIFMA法特异度和灵敏度较好，操作便捷，被用作常规筛查，但是由于患者一般在HCV感染后数月内才可以产生抗HCV，且免疫抑制或透析患者体内抗HCV产生障碍，因此抗HCV检测阴性并不能排除感染的可能[7]。HCV-RNA检测阳性是病毒复制的直接指标，RNA检测对实验室环境和设备要求较高，受到操作人员技术影响，在基层医疗机构难以大范围推广普及。

本研究对在本院进行血液检查的496例患者为研究对象，HCV-RNA阳性检出率为14.72%（73/496），抗HCV阳性检出率为19.35%，HCVRNA的检测敏感性（88.75%）高于抗HCV检测（90.00%），但差异无统计学意义（P＞0.05），HCV-RNA的检测特异性显著性高于抗HCV检测，与之前的报道相一致。二者联合检测的阳性检出率为24.60%，敏感性为97.50%，显著高于单一方法检测，特异性为89.42%，低于HCV-RNA检测，有研究显示患者HCV-RNA载量和抗HCV含量呈正相关的线性关系，说明抗体和病毒载量间的相对同步性变化，提示临床上应对上述两种指标进行双重监测[8]。

在80例经临床诊断确诊为HCV感染的患者中，HCV-RNA和抗HCV双阳性患者67例，两种检测间的差异有显著性意义（P＜0.05），HCVRNA检测的特异性更高，显示出更好的诊断效能，提示核酸检测技术推广应用存在重要的临床价值[9-10]。尽管PCR检测技术已得到极大的自动化提升，但是对样本保存的高要求，检测的时间和经济成本，假阳性或假阴性等因素限制其在初诊筛查中的临床应用[11-12]。除上述两种指标，近年来HCV核心抗原检测成为重要的实验室补充诊断的指标，HCV核心抗原与HCV-RNA存在良好相关性，检测窗口期相对于抗HCV显著缩短，对于基层医疗机构不能进行HCV-RNA检测时可考虑开展抗原检测[13]。

综上所述，对HCV病毒感染的有效筛查诊断是减少丙肝病毒流行的重要手段，HCV-RNA检测相对于抗HCV检测的特异性更高，二者联合检测的敏感性得到显著提升，能够更好检测HCV感染情况，有利于丙肝流行的防治。