PD⁃L1、Beclin⁃1、P62在NSCLC中的表达与复发转移的关系

景正全 吴大富 陈明

非小细胞肺癌（non⁃small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌总数的81%［1］，临床主要表现为咳嗽、咯痰、发热、胸痛等。传统治疗策略对NSCLC的疗效大多不甚理想，导致NSCLC 患者中位生存时间仅为8～10 个月，预后较差，肿瘤侵袭转移是患者死亡的主要原因［2］。近些年分子靶向治疗、免疫治疗等新兴治疗手段逐渐受到医学工作者的青睐［3⁃4］，尤其是免疫治疗，包括免疫检查点抑制、肿瘤疫苗等方法，程序性死亡配体1（Programmed death ligand 1，PD⁃L1）正是其中主要的检查点［5］。Be⁃clin⁃1、P62 是较重要的自噬蛋白，前者作为肿瘤抑制蛋白，能调节自噬过程，后者则更多作为自噬机制与底物间的调配器。关于PD⁃L1、Beclin⁃1、P62 与NSCLC 的研究各自均有报道［6］，但联合进行深入分析的尚不多见。本研究旨在探讨三者在NSCLC 中的表达及与复发转移的关系，以期为NSCLC 的病情诊断和预后评估贡献有效的建议。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2019年7月至2020年6月于三峡大学附属仁和医院检验科接受检查的88 例NSCLC 患者作为病例组，收集所有患者的病理资料。纳入标准：①符合临床上肺癌的诊断标准［7］；经影像学检查确诊为NSCLC；②接受在本院治疗，依从性好。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②既往有放、化疗手术史；③合并其他肺部疾病；④自身免疫疾病；⑤精神类疾病；⑥临床病历资料不齐。其中男65 例、女23 例，平均年龄（60.57±10.38）岁，平均病程（1.48±0.35）年，鳞癌37 例、腺癌51 例，TNM 分期［8］Ⅰ期17 例、Ⅱ期20 例、Ⅲ期29 例、Ⅳ期22例。另选距离病例组癌组织5 cm 以上的癌旁组织作为对照组。本研究已获得院医学伦理委员会批准，受试者或家属均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 治疗及检测方法

所有患者均根据《非小细胞肺癌术后辅助治疗中国胸外科专家共识》［9］的方案在本院进行治疗。

检测方法：采集所有NSCLC 患者的肿瘤标本，对照组取病例组旁边的癌旁组织，均使用10%福尔马林固定，脱水，石蜡包裹，连续切片4 μm，切片后常规染色，再行Envision 两步法免疫组织化学染色：切片脱蜡，水化，高压修复后，使用3% H2O2灭活过氧化物酶，低温4℃24 h，再使用二氨基联苯胺（diaminobezidin，DAB）染色。同时使用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）作空白对照。所有免疫标志物PD⁃L1、Beclin⁃1、P62 抗体及免疫组化试剂盒均购自上海基因科技有限公司。

1.2.2 结果判定［10］

采用阳性细胞比和显色强度分级综合判断，由两位主治医师双盲法进行确认。染色强度：未着色0 分，浅黄色1 分，棕黄色2 分，棕褐色3 分；阳性细胞：阳性细胞<50%为1 分，>50%为2 分。乘积>1 分为阳性表达，有争议的结果经两位医师协商后进行判定。

1.3 随访

随访时间为1年，通过门诊方式随访，治疗后1 个月随访一次，随访至2021年6月或至患者死亡时截止，同时统计分析术后复发转移等情况。

1.4 统计学方法

应用IBM SPSS Statistics 24.0 软件进行统计分析，计量资料以（±s）表示，采用独立t检验；计数资料使用n（%）表示，采用χ2检验，采用COX 分析NSCLC 患者无复发生存情况的影响因素，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组PD⁃L1、Beclin⁃1、P62 表达情况比较

病例组PD⁃L1、P62 的阳性率均高于对照组，Beclin⁃1 的阳性率低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1、图1。

表1 两组PD⁃L1、Beclin⁃1、P62 表达情况比较［n（%）］Table 1 Comparison of PD⁃L1，beclin⁃1 and p62 expressions between the two groups［n（%）］

2.2 PD⁃L1、Beclin⁃1、P62 表达与NSCLC 患者临床病理特征关系

不同肿瘤直径、临床分期、分化程度和吸烟史的NSCLC 患者的PD⁃L1 阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；不同肿瘤直径、临床分期、分化程度、淋巴结转移情况、肺膜浸润和吸烟史的NSCLC 患者的Beclin⁃1 阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；不同肿瘤直径、淋巴结转移情况和肺膜浸润的NSCLC 患者的P62 阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 PD⁃L1、Beclin⁃1、P62 表达与NSCLC 患者临床病理特征关系［n（%）］Table 2 Relationship between PD⁃L1，Beclin⁃1，P62 expressions and clinicopathological features of NSCLC patients［n（%）］

2.3 复发情况

截至末次随访，88 例NSCLC 患者复发16 例（复发导致的死亡按复发计算），复发率为18.18%。

2.4 NSCLC 患者无复发生存情况单因素及多因素分析

单因素结果显示，肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、Beclin⁃1 表达（阳性）和P62 表达（阳性）为影响NSCLC 患者无复发生存情况的不良因素（P<0.05）；多因素COX 分析结果表明，临床分期、淋巴结转移和P62 表达（阳性）是影响NSCLC 患者无复发生存情况的独立因素（P<0.05）。见表3。

表3 NSCLC 患者无复发生存情况单因素及多因素分析Table 3 Univariate and multivariate analysis of recurrence⁃free survival in patients with NSCLC

3 讨论

既往国外研究认为，Beclin⁃1 在肝癌、乳腺癌中低表达，在结肠癌中呈高表达［11］。有报道提出，P62 的大量积累导致肿瘤产生，且P62 的持续表达会抑制Beclin⁃1 的表达，进而抑制肿瘤细胞的自噬过程［12］。本研究发现，NSCLC 组织PD⁃L1、P62 的阳性表达率明显高于癌旁组织，Beclin⁃1 的阳性表达率低于癌旁组织，提示NSCLC 患者存在PD⁃L1、Beclin⁃1、P62 表达异常。缪小辉等［12］研究认为，P62 在癌旁正常肺组织弱表达，而在肺癌组织高表达。

本研究显示不同肿瘤直径、临床分期、分化程度、吸烟史的NSCLC 患者，其PD⁃L1 阳性率存在明显差异；除此之外，有无淋巴结转移、肺膜浸润的NSCLC 患者Beclin⁃1 阳性率的差异比较亦有统计学意义；而P62 阳性率在不同肿瘤直径、淋巴结转移和肺膜浸润的NSCLC 患者中存在差异。结果与早前吕国义等人［13］的相关研究存在一定出入，原因可能是本研究样本量少、检测手段较单一所致。此外，本研究还发现88 例NSCLC 患者有16 例复发，复发率为18.18%。许子宜等人［14］在对221 例NSCLC 患者的预后研究中，发现其复发率为64.71%，与本研究结果出入较大，一方面可能是该研究样本量存在选取偏倚，另一方面也与NSCLC 患者临床分期相关，表明NSCLC 患者复发率较高，临床应做好随访，密切注意患者预后。

影响NSCLC 患者预后的多因素分析结果显示，临床分期、淋巴结转移、Beclin⁃1 表达（阳性）和P62 表达（阳性）是影响NSCLC 患者无复发生存情况的独立因素，提示临床分期Ⅲ、Ⅳ期、淋巴结存在转移和P62 阳性表达的NSCLC 患者术后有较大可能出现疾病进展。关于P62 阳性表达与患者预后的关系，分析是P62 的高表达能调控NFKB 细胞因子，促进肿瘤细胞转移，增加患者复发病变的风险［15］。临床应针对性加强对该类患者的术后监测，同时制定完善随访方案，以降低患者术后复发率。与本结果不同的是，吴菡等［16］发现PD⁃L1 阳性的肺癌患者化疗效果显著弱于阴性患者，提示其阳性表达与患者预后不良有关。造成这一结果原因，可能是与不同NSCLC 患者肿瘤微环境的差异以及同一时间动态表达水平有关，导致PD⁃L1阳性表达存在明显差异，这也说明了PD⁃L1 在NSCLC 患者肿瘤细胞表达可能存在时间、空间的异质性。到目前为止，关于PD⁃L1 在NSCLC 中表达的系统研究仍较少，本研究后续将扩大样本量，延长观察时间，深入分析PD⁃L1 与NSCLC 患者预后的关系。

综上，NSCLC 患者PD⁃L1、Beclin⁃1、P62 表达异常，且P62 阳性表达是影响复发转移的独立因素。