乳酸菌对仔猪生长性能、免疫功能和肠道菌群的影响

刘伟敏

（河南牧业经济学院，河南郑州 450008）

仔猪断奶后可能会发生明显的应激反应，反应症状为仔猪食欲不振、频发腹泻、生长发育缓慢，甚至死亡，严重影响养猪业发展（黄登桂等，2019）。目前，一些养殖户为了追求高效益，在饲料中违规添加抗生素提高仔猪的抗病力，但滥用抗生素会造成仔猪药物残留，且毒副作用增强，严重威胁仔猪安全（王汉星等，2020）。因此，寻找安全、环保的绿色添加剂具有重要研究价值。

乳酸菌是一种由体内乳酸糖类发酵的绿色益生菌，广泛存在于动物肠道内，可保持肠道菌群平衡，从而提高机体免疫机能（崔艺燕等，2020）。研究发现，乳酸菌是一种常见的益生菌，安全、稳定性强，具有提高动物的生长性能，改善肠道内部菌群结构，维持机体内环境稳定等作用，显著改善动物免疫机能（崔艺燕等，2016）。尽管乳酸菌在畜牧中的应用比较广泛，但有关乳酸菌作为饲料添加剂在仔猪上的研究较少，本文研究饲料中添加乳酸菌对仔猪生长性能、免疫功能和肠道菌群的影响，为仔猪饲料中乳酸菌的合适添加量提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 乳酸菌、玉米、膨化大豆、花生、矿物质预混料均在安琪酵母饲料有限公司购买，仔猪来自于当地养殖场。血清测定试剂盒采购自武汉赛维尔科技有限公司。

1.2 主要试剂与材料 豆粕、氢氧化钾（10%，1 mol/L）、醋酸（10%，0.5 mol/L），硝酸钠溶液，氯化钠，乙醇。

1.3 试验设计 试验仔猪均来自试验基地养殖厂。将360只30日龄、体重相近（约6.59 kg）的健康无伤的断奶仔猪随机分成6组，每组3个重复，每个重复20头仔猪，对照组仔猪饲喂基础饲料，试验组在基础饲料基础上添加不同添加水平（0.25%、0.5%、0.75%、1%、1.25%）乳酸菌，饲养周期为35 d。

1.4 饲料配方设计 以乳酸糖、玉米、膨化大豆、花生为仔猪基础饲料。试验饲料成分如表1所示，参照《猪饲养标准》（NY/T65-2004）配制基础饲料。

表1 基础饲料成分和水平

1.5 饲养管理 正式养殖试验开始前，对猪舍环境进行及时清理，保持内外环境整洁，干净清爽，对猪舍进行及时消毒，及时清理粪便，内外通风处理。饲养期间，仔猪每天定时投喂适量饵料，每天3次，根据仔猪当日采食状况来调整饵料，及时记录仔猪养殖情况，保持猪舍通风良好，定期消毒。

1.6 生长性能指标 饲养试验结束后，对仔猪断食24 h，仔猪空腹称量其初体重和末体重，依据相应公式计算仔猪生长发育的相关指标，计算公式如下：

料重比=动物饲料中总投喂量/动物饲养期间增加的体重；

增重率/%=（动物生长后总体重均值－动物生长前的体重均值）/动物生长时间×100；

日采食量=动物采食总量/饲养天数。

1.7 免疫指标测定 饲养试验结束后，将仔猪禁食24 h，对仔猪静脉处采血10 mL，分别加入对应荧光标记的单克隆抗体，依次加入乙二胺四乙酸抗凝的全血中孵育20 min，再加入红细胞裂解液常温离心后取上清液，及时放入4℃冰箱保存。采用相关酶联吸附试剂盒测定免疫球蛋白A，补体C3和M，检测方法参照试剂盒说明书。

仔猪饲养周期结束后，选取3只健康的仔猪进行静脉采血10 mL，采用酶联免疫吸附法（试剂盒源于武汉博士德生物工程有限公司）检测仔猪白细胞介素-8（Interleukin-8，IL-8），肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）及白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）的含量。

1.8 肠道菌群测定 收集仔猪粪便，定量称取1 g，将其放入无菌操作台上进行操作，放入培养皿进行大量培育，采用微量稀释法进行测定仔猪粪便细菌的含量。

1.9 试验数据分析 本研究所有的试验数据均采用excel表格记录，采用SPSS 22.0版本软件进行分析，P＜0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 乳酸菌对仔猪生长性能的影响 由表2可知，0.75%组仔猪的末重和平均日增重量显著高于对照组（P＜0.05），而1%、0.5%和0.25%组仔猪的末重显著高于对照组（P＜0.05）；随着饲料中乳酸菌添加水平的升高，仔猪平均日增量、日均采食量先上升后下降，0.75%组仔猪的平均日增量和日均采食量达到最大水平，分别为478.2 g/d和791.47 g/d，显著高于其他各组和对照组（P＜0.05），0.5%和1%组仔猪的平均日增量和日均采食量显著高于对照组（P＜0.05）；饲料中添加不同水平的乳酸菌对仔猪料重比无显著影响（P＞0.05）；在各饲料添加组中，0.75%组中仔猪的腹泻率最低，显著低于对照组（P＜0.05），而1%组仔猪的腹泻率显著低于对照组（P＜0.05）。

表2 饲料中添加乳酸菌对仔猪的生长性能的影响

2.2 乳酸菌对仔猪免疫指标的影响 由表3可知，在所有试验组中，0.75%组仔猪的免疫球蛋白A和M含量达到最大水平，为497.25 mg/mL和0.68 mg/mL，显著高于其他试验组和对照组（P＜0.05），0.5%和1%组仔猪的免疫球蛋白A和M含量显著高于对照组（P＜0.05）；在所有试验组中，0.75%组仔猪补体C3含量迅速上升，达到最大水平，为9.94 mg/mL，显著高于对照组（P＜0.05），0.5%和1.25%组仔猪补体C3含量明显高于对照组（P＜0.05）。

表3 饲料添加乳酸菌对仔猪免疫指标的影响 mg/ mL

由图1～3可知，随着饲料乳酸菌含量不断增加，仔猪IL-6含量先下降后恢复正常水平，0.75%组仔猪的IL-6含量最低，显著低于对照组（P＜0.05）；而仔猪IL-8含量先下降后上升，1%组仔猪的IL-8含量最低，显著低于对照组（P＜0.05）；仔猪TNF-α含量一直处于下降水平，1.25%组仔猪的TNF-α含量显著低于对照组（P＜0.05）。

图1 不同添加水平的乳酸菌饲料组中仔猪IL-6含量

2.3 饲料中添加乳酸菌对仔猪肠道菌群的影响由表4可知，随着饲料中乳酸菌添加水平的不断增高，试验组仔猪大肠杆菌和双歧杆菌的含量与对照无显著差异（P＞0.05）。

表4 饲料中添加乳酸菌对仔猪的肠道菌群测定的影响

3 讨论

图2 不同添加水平的乳酸菌饲料组中仔猪IL-8含量

图3 不同添加水平的乳酸菌饲料组中仔猪TNF-α含量

3.1 乳酸菌对仔猪生长性能的影响 乳酸菌是一种益生菌，能有效抑制有害菌群，增强有益菌活性，从而增强消化功能（李荞荞等，2019）。在本研究中，0.75%组仔猪末重和平均日增重量显著高于对照组，提示饲料中添加合适水平的乳酸菌将会显著提高仔猪生长性能，从而促进仔猪生长发育。李杰欣等（2020）试验发现，饲料中添加适量的乳酸菌将会显著提高肉鸡生长性能，其日增重和采食量显著提高；王蔚等（2019）研究发现，饲料中添加适宜水平乳酸杆菌能显著提高仔猪末重和日增重，促进仔猪生长发育，显著提高饲料利用率，有效降低腹泻率。在本研究中，随着饲料乳酸菌添加水平的不断上升，0.75%组仔猪平均日增重和平均日采食量显著上升，达到最大水平，显著高于对照组，提示饲料添加适宜水平乳酸菌（0.75%）会促进仔猪增重，促进其生长发育。

本研究评估不同水平乳酸菌对仔猪料重比无显著影响，在各饲料添加组中，0.75%组仔猪腹泻率最低，显著低于对照组，提示饲料中添加合适水平乳酸菌将会有效降低仔猪腹泻率，从而提高仔猪免疫机能。其降低仔猪腹泻率的主要原因是乳酸菌的稳定强，适应肠道内部环境，提高肠道内消化酶的活性，促进肠道消化吸收和有益菌的增殖，从而有效降低有害菌群含量，维持肠道菌群健康，从而有效减少腹泻的发生。

3.2 乳酸菌对仔猪免疫指标的影响 免疫球蛋白A和免疫球蛋白M是动物血清中抗体的有效成分，是反应机体免疫反应情况的重要指标（林裕龙等，2020）。补体C3参与机体内的免疫应答反应和炎症反应。本研究所有试验组中，0.75%组仔猪的免疫球蛋白A，M和补体C3的含量达到最大水平，显著高于对照组，提示饲料中添加适量乳酸菌可显著增加仔猪免疫球蛋白A，M和补体C3的含量，从而显著提高仔猪免疫力。

IL-6、IL-8和TNF-a是一种常见的炎症因子，反应机体内炎症因子的重要指标（陈国阳等，2020）。在本研究中，随着乳酸菌含量不断增加，仔猪IL-6和IL-8含量先下降后上升，TNF-a含量一直处在下降水平，提示饲料添加适量乳酸菌可有效降低动物的炎症因子含量，有效缓解仔猪炎症反应，从而提高体内的免疫反应。

3.3 乳酸菌对仔猪肠道菌群的影响 仔猪健康与肠道内部菌群的分布范围息息相关，肠道菌群的种类明显影响仔猪肠道。仔猪肠道微生物处于动态平衡，机体受到外界刺激后，会导致仔猪体内肠道菌群失调，使动物出现腹泻现象。在本研究中，饲料添加不同水平乳糖菌对仔猪大肠杆菌和双歧杆菌的含量无显著影响，提示饲料中添加适量乳酸菌对仔猪大肠杆菌和双歧杆菌无显著影响。但其乳酸菌能有效缓解腹泻的原因可能是乳酸菌抑制有害菌的生长，保持肠道内部菌群稳定，维护动物肠道健康。