小花棘豆生物碱中毒对小白鼠免疫器官脏器生长指数的影响

张建军 牟文慧

临沂市农业学校，山东莒南 276600

小花棘豆（Oxytropis glabra）又称醉马草，是豆科棘豆属多年生草本植物，整株植物均有毒性[1-2]。Molyneux 等[3]研究认为，苦马豆素（Swainsonine ，SW）是小花棘豆中毒的主要有毒成分，SW 通过抑制细胞内溶酶体α-甘露糖苷酶（α-mannosdase，AMA）活性，从而使低聚寡糖（Oligosaccharides）代谢发生障碍[4-5]，同时SW 也可以通过抑制高尔基体内α-甘露糖苷酶Ⅱ的活性，从而影响N-糖蛋白（N-glycoprotein）的新陈代谢过程[6-7]。杨桂云等[8]、于荣敏等[9]从小花棘豆中提取出了黄花碱等8 种生物碱，并确定了生物碱是主要毒性成分。黄花碱（Thermopsine，Ts）属于多羟基喹诺里西啶（Polyhydroxyquinolizidine）类生物碱的一种，对动物的神经节、延髓及大脑皮层等均有抑制作用[10-11]。家畜小花棘豆中毒的临床症状主要有反应迟钝，目光呆滞，运动失调，同时后肢向外弯曲，严重者瘫痪，头部水平震颤或左右摇动，直至死亡[12-13]。此外，还会造成母畜不孕、流产、死胎和胎儿畸形，同时造成公畜不育，严重影响动物繁殖机能和品种改良[14-15]，给我国草原畜牧业的发展带来巨大经济损失[16]。免疫器官的脏器生长指数是衡量机体免疫功能的初步指标[17]，胸腺和脾脏是动物机体重要的免疫器官，胸腺是机体内T 淋巴细胞分化成熟的场所，脾脏内的主要免疫细胞是B 淋巴细胞，T 淋巴细胞主要参与细胞免疫，B 淋巴细胞主要参与体液免疫[17]。

1 材料与方法

1.1 材 料

1）试验动物。昆明系小白鼠80 只，雌雄各半，体重（22±2）g，购于临沂大学实验动物中心。

2）试验试剂和仪器。SW、Ts 由临沂大学毒理实验室从小花棘豆中提取，其纯度为99.8%；生理盐水购自安徽丰原药业股份有限公司；BSA224S 电子分析天平购自德国赛多利斯公司。

1.2 方 法

1）动物试验模型建立。试验用小白鼠随机平均分为4 个大组（每组雌雄各半），分别是3 个试验组（SW 组、Ts 组、H 组）和1 个对照组（D 组），每组小白鼠20 只。生物碱（SW、Ts 和二者混合物）用去离子水稀释成0.5 mg/mL 的浓度，试验组按照上述浓度胃内灌服生物碱，对照组胃内灌服去离子水。先将小白鼠适应性饲养1 周，空腹称其体重，按体重的0.01 mL/g 胃内灌服相应浓度的生物碱或去离子水，并自由采食、饮水，每隔3 d 称取小白鼠体重以调整灌服生物碱的量，于试验的第7、14、21、28 和35 天每组分别随机取4 只小白鼠称量体重后脱颈处死，解剖取胸腺和脾脏。

2）小白鼠免疫器官脏器指数检测。将解剖取出的胸腺和脾脏，去除其表面的血渍和多余的结缔组织，用电子天平称胸腺和脾脏的质量（g），计算胸腺（脾脏）生长指数。胸腺（脾脏）生长指数=胸腺（脾脏）质量（g）×103/小鼠体重（g）。

1.3 数据处理

采用SPSS 18.0 方差分析中的单因素方差分析，数据采用平均值±标准差（±SD）形式表示，采用方差分析进行差异显著性检验，当＜0.05 时有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 胸腺生长指数测定结果

整个试验周期，胸腺生长指数的测定结果见表1。由表1可知，在试验第7 天，3 个试验组（SW组、Ts 组和H 组）的胸腺生长指数与D 组相比较均没有产生明显的差异；在试验第14 天，SW、Ts 组与D 组相比较能够显著降低胸腺生长指数，而H 组与D 组相比较差异不显著；在试验第21 天，3 个试验组的结果均显著低于D 组；在试验第28 天，SW、H组与D 组相比较胸腺生长指数极显著降低，Ts 组与D 组相比较胸腺生长指数显著降低；在试验第35天，3 个试验组与D 组相比较，结果均极显著降低。

表1 胸腺生长指数

2.2 脾脏生长指数测定结果

整个试验周期，脾脏生长指数的测定结果见表2。由表2可知，在第7 天，SW 组与D 组相比较，能够显著提高脾脏生长指数，Ts、H 组与D 组相比较没有产生明显的差异；在试验第14 天，3 个试验组的脾脏生长指数与D 组相比较结果均差异不显著，但SW 组的结果比D 组要高，而Ts、H 组的结果比D 组要低；在试验第21 天，SW 组与D 组比较差异不显著，而Ts、H 组与D 组相比较脾脏生长指数显著降低；在试验第28 天，脾脏生长指数与胸腺生长指数的结果类似；在试验第35 天，3 个试验组与D组相比较，结果均极显著降低。

表2 脾脏生长指数

3 讨 论

家畜采食小花棘豆出现慢性中毒，对神经系统和生殖系统产生损伤，同时对一些内脏实质器官（如肝脏、肾脏和脾脏等）也会带来损伤作用[18]。脏器生长指数作为毒理学观察亚慢性中毒的一个重要指标，它的变化能够说明动物的某个脏器受到毒物损伤的程度，能够为进一步更深入的检查指明方向。

本试验通过胸腺（脾脏）生长指数研究发现，SW和Ts 都能对胸腺（脾脏）产生毒性作用。在试验初期，SW 组能够提高胸腺（脾脏）生长指数，说明SW在短时间内能够促进动物胸腺（脾脏）的生长，从而促进动物机体免疫器官的生长；随着试验时间的延长，胸腺（脾脏）生长指数不断下降，到试验第28 天，SW 组与对照组差异极显著，表明SW 对胸腺（脾脏）生长指数产生了严重的抑制作用，从而抑制了动物机体免疫反应的建立。Ts 组在试验初期（≤7 d）对胸腺（脾脏）生长指数影响不显著，这与Ts 是低毒生物碱相符；在试验第14 天和第21 天，Ts 组胸腺（脾脏）生长指数显著降低，从而抑制了动物机体免疫反应的建立，但其产生抑制作用的时间与杨保收[19]研究的结果还存在一定的差异，这可能与进行试验的季节有一定关系，具体的原因还需要做进一步研究。H 组出现了与SW 组类似的结果，从而说明试验的初期主要是SW 发挥作用，能够促进动物机体免疫器官的生长，而在试验的21 d 后2 种生物碱均对小白鼠脏器生长指数产生了抑制作用。

综上所述，小花棘豆中的SW 和Ts 均能够对胸腺（脾脏）生长指数产生抑制作用，SW 产生的抑制作用更加明显，从而能够损害动物机体的免疫器官，对动物机体产生毒害作用。