miR-761、TIMP-2 在老年高血压非小细胞肺癌患者癌组织中的表达及预后相关分析

李珍珍

（河南省永城市人民医院肿瘤科 永城 476600）

老年高血压非小细胞肺癌（NSCLC）在肺癌中的发生率约占80%以上[1]。近年来医疗水平的发展使得NSCLC 的治疗效果有很大的改进，但其5 年存活率仍未见明显提高[2]。高血压是老年肺癌患者常见合并症，可增加患者治疗难度[3]。微小RNA-761（microRNA-761，miR-761）在细胞稳态中发挥重要作用，可通过靶向调控线粒体融合和分裂维持细胞稳态[4]。基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2,TIMP-2）是蛋白酶活性的抑制因子[5]。Yan 等[6]研究中首次发现miR-761、TIMP-2 与NSCLC 有关，但其在高血压NSCLC 预后中的作用和潜在机制尚不清楚。本研究旨在探讨miR-761、TIMP-2 表达水平与高血压 NSCLC 临床病理特征及预后的关系。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 研究对象 以2015 年6 月至2016 年 7 月我院收治的89 例高血压NSCLC 患者癌组织为高血压肺癌组，其中男 47 例、女 42 例，年龄 60~87 岁、平均（71.57±10.33）岁。取其癌旁组织作为癌旁对照组。同期选取87 例单纯NSCLC 患者的癌组织作为肺癌组，其中男 46 例、女 41 例，年龄 60~87 岁、平均（72.42±10.26）岁，与高血压肺癌组一般资料比较无显著性差异（P＞0.05）。纳入标准：NSCLC 符合诊疗规范[7]，并经病理学证实；按照医嘱正规治疗；知情同意书；无治疗史；首次确诊。排除标准：合并感染者；失访者；临床资料不完整者；继发性NSCLC 者；脑血管疾病者。本研究经医院伦理委员会批准（编号：2014-07-158）。

1.2 研究方法

1.2.1 癌组织miR-761 表达水平测定 采用RNA提取试剂盒（货号：JL1545，QIAGEN 公司）从癌组织中抽提总RNA，反转录试剂盒（货号：FSQ-301，上海研卉生物公司）得到cDNA，然后利用SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（货号：DRR041A，Takara 公司）配制反应体系，在CFX384 定量分析上扩增miR-761 及其内参U6。引物由上海生工生物公司设计并合成，见表1。采用 2-△△Ct法计算 miR-761 相对表达量。

表1 qRT-PCR 引物序列

1.2.2 癌组织TIMP-2 蛋白表达的测定 取新鲜组织，10%甲醛固定标本后，对组织标本进行切片，采用免疫组织化学法检测组织TIMP-2 蛋白表达水平，按照SP 试剂盒（货号：CDLG-4851，武汉纯度生物公司）说明书操作，用PBS 代替一抗作为阴性对照，TIMP-2 抗体（货号：ATA38720，武汉益普生物公司）。以胞浆内出现棕黄色或棕褐色定义为阳性细胞。两种计分乘积：≤2 分为低表达，≥2 分为高表达。见表2。

表2 计分标准（分）

1.3 随访 高血压NSCLC 患者术后以电话或门诊方式随访5 年，生存期从手术之日起计算，截至2021 年 7 月。

1.4 统计学分析 采用SPSS22.0 处理数据，计量资料用（）表示，行t检验；计数资料用%表示，行χ2检验；Kaplan-Meier 分析 miR-761、TIMP-2 水平与预后的关系；多因素COX 回归分析高血压NSCLC 预后的影响因素。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组miR-761、TIMP-2 表达水平比较 高血压肺癌组miR-761 表达水平分别高于肺癌组、癌旁对照组 （t=8.386、19.557，P=0.000、0.000），肺癌组miR-761 表达水平高于癌旁对照组（t=17.090，P=0.000）。高血压肺癌组与肺癌组TIMP-2 高表达率比较，差异无统计学意义（χ2=1.835，P=0.176），癌旁对照组TIMP-2 高表达率分别高于肺癌组、高血压肺癌组（χ2=5.798、14.052，P=0.016、0.000）。见表 3、图 1。

表3 三组 miR-761、TIMP-2 表达水平比较（）

表3 三组 miR-761、TIMP-2 表达水平比较（）

注：与癌旁对照组比较，*P＜0.05；与肺癌组比较，#P＜0.05。

组别 n miR-761 TIMP-2[例（%）]癌旁对照组肺癌组高血压肺癌组89 87 89 1.02±0.27 1.81±0.34*2.46±0.64*#56（62.92）39（44.83）*31（34.83）*

图1 高血压肺癌组（左）、肺癌组（中）与癌旁对照组（右）中TIMP-2蛋白表达（×400）

2.2 癌组织miR-761、TIMP-2 表达与临床病理特征的关系 以miR-761 表达水平平均值（2.46）为界，将患者分为miR-761 高表达组45 例，miR-761低表达组44 例。miR-761 高表达组、TIMP-2 低表达组肿瘤≥3.0 cm、有淋巴结转移、组织低分化、TNMⅢ-Ⅳ期患者比例高于miR-761 低表达组、TIMP-2高表达组（P＜0.05）。见表4。

表4 癌组织miR-761、TIMP-2 表达与临床病理特征的关系[例（%）]

2.3 癌组织miR-761、TIMP-2 表达水平与高血压NSCLC 预后的关系 miR-761 高表达者5 年生存率（31.11%） 低于 miR-761 低表达者（59.09%）（χ2=7.039，P＜0.05）。 TIMP-2 高 表 达 者 5 年 生 存 率（64.52%）高于TIMP-2 低表达者（34.48%）（χ2=7.364，P＜0.05）。见图 2 至图 3。

图2 癌组织miR-761 表达水平与预后的关系

图3 癌组织TIMP-2 表达水平与预后的关系

2.4 高血压NSCLC 预后的影响因素分析 以组织分化程度、肿瘤大小、miR-761、TNM 分期、淋巴结转移、TIMP-2 为自变量，将是否死亡作为因变量，COX回归显示，miR-761、TIMP-2 是高血压 NSCLC 患者预后的影响因素（P＜0.05）。见表5。

表5 高血压NSCLC 预后的影响因素分析

3 讨论

NSCLC 是肺癌最常见的组织类型，其发病率和死亡率逐年上升[8]。大多数NSCLC 患者早期症状不典型，多数患者就诊时已属晚期，且老年患者常合并高血压等并发症，使其治疗较为困难，造成患者生存率很低[9]。目前随着研究的进一步深入，miRNA 或某些特定基因的检测有利于精确地预测肺癌患者的预后[10]。因此，探究高血压NSCLC 发病相关因子及其分子生物学特点对疾病的诊治可能有重要意义。

研究表明，miR-761 可通过作用靶点干扰肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭等功能[11]。不同肿瘤中miR-761发挥的作用亦不同，在乳腺癌、肝癌等肿瘤中miR-761 可作为原癌基因促进肿瘤发生、发展，在结直肠癌等肿瘤中miR-761 可发挥抑癌基因的功能[12]。本研究结果中，miR-761 在高血压NSCLC 患者癌组织中高表达，与Zhang 等[13]研究中miR-761 的趋势基本一致；且与肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移、TNM 分期等临床病理参数有一定的关系。这说明miR-761 可能通过靶向作用其下游因子，影响肿瘤的侵袭和迁移，进而参与高血压NSCLC 的病情进展。此外，本研究中miR-761 高表达高血压NSCLC 患者五年生存率（31.11%）低于miR-761 低表达患者（59.09%），且miR-761 是影响患者预后的独立危险因素。进一步提示miR-761 高表达不利于患者预后，其高表达后可能影响肿瘤细胞的转移，加速患者病情进展，缩短其生存期。

TIMP-2 是基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinase，MMP）抑制因子的一种，可激活MMP，同时又能与激活后的MMP 结合，参与肿瘤的发生、发展[14]。研究表明，TIMP-2 在 NSCLC 患者血清中呈明显低表达[15]。本研究结果显示，与高血压NSCLC 患者癌旁组织及单纯NSCLC 患者癌组织相比，高血压NSCLC 患者癌组织TIMP-2 表达水平降低，与黄茜等[16]及He 等[17]研究结果相似；且TIMP-2 低表达患者肿瘤≥3.0 cm、有淋巴结转移、组织低分化、TNM Ⅲ-Ⅳ期患者比例高于TIMP-2 高表达患者。提示NSCLC 患者TIMP-2 低表达，而合并高血压会进一步降低TIMP-2 的表达量，TIMP-2有望作为淋巴结转移、组织分化等及肿瘤转移程度的参考指标。此外，本研究中TIMP-2 低表达患者预后较差，其可能是通过影响MMP 的激活和表达，而MMP 可通过调节肿瘤血管新生等，参与肿瘤的侵袭和迁移，影响患者预后。

综上所述，癌组织miR-761、TIMP-2 表达与高血压NSCLC 的进展、预后可能有密切联系，为临床治疗提供新的研究思路，同时对提高高血压NSCLC的诊疗效果有重要意义。然而本研究作为回顾性研究，样本受区域限制且数量有限，miR-761、TIMP-2间的具体作用机制仍需通过动物及细胞试验验证，有待今后纳入更多样本进一步深入探究。