一种改良包埋模具和改良载玻片的设计与应用

李明显，董杏梅，汤丽鹏，杨海峰，郑广娟，何青莲*

广东省中医院，广州中医药大学第二临床医学院 1.病理科，2.中药药理实验室，广州 510120

在常规病理技术中[1,2],石蜡切片是诸多操作环节中非常重要的关键技术,能够为常规HE染色、特殊染色、免疫组化染色[3]及分子筛查等检测技术提供不同规格要求的组织切片。若宫腔刮出物、小脑占位组织、椎管内取出物等组织中的小灶组织疑有恶变或性质不能确定,可通过对原组织蜡块深切、连切、薄切等方式再进行常规HE染色，也可对重新切片的组织进行特殊染色、免疫组化染色等检测方法，以明确小灶组织的性质。但是在上述不同检测技术制得的切片中再次定位原小灶组织具有一定难度，因为在石蜡切片[4]后，放入摊片池内的组织切片在水中会不断漂游旋转，且很难根据破碎组织的形态结构进行辨识组织的方向，所以同一组织蜡块再次进行相关技术检测时就很难制得与原组织切片方向相一致的染色切片。这种制片效果给病理医生在显微镜下寻找目标区域带来一定不便。为了解决上述问题，作者设计一种改良包埋模具（已获国家外观设计专利:ZL201730568265.6）和改良载玻片（已获国家外观设计专利:ZL201730629223.9），以利于病理医生在来源于同一蜡块组织的不同玻片上快速识别相同的目标区域，进而提高工作效率及诊断的准确性。

1 材料与方法

1.1 仪器及耗材

Leica RM2235石蜡切片机，HISTOCENTRE 3石蜡包埋机，Leica HI1210摊片池，Roche Benchmark XT全自动免疫组化仪，改良包埋模具，改良载玻片。

1.2 结构特点

1.2.1 改良包埋模具 模具由不锈钢金属材质压制而成，上部尺寸为长4 cm×3 cm，中央区正方形尺寸为2 cm×2 cm，与普通包埋模具相比，包埋模具两端分别用红绿进行标记,底部增加了一处缺角设计（图1），缺角底边长0.5 cm。

图1 一种改良包埋模具的结构示意图1.缺角处2.绿色端3.红色端Fig.1 Structural sketch of an improved embedding die1,corner;2,green end;3,red end

1.2.2 改良载玻片 载玻片由标签区和组织区两部分组成，与普通载玻片相比，组织区设计了两处相同的不规则黑色几何图形，几何图形由两个大小不同、形状相似、排列一致的缺角正方形组成，大者边长为2 cm，小者边长为1 cm，图形的大小按照包埋模具的规格设计，并由黑色中性颜料绘制（图2）。该载玻片上的颜料在脱蜡过程中会被有机溶剂彻底清洗掉，对后续的染色过程及最终染色结果均无影响。

图2 一种改良载玻片的结构示意图1.标签区2.组织区3.大的几何图形4.小的几何图形Fig.2 Structural sketch of an improved slide1,label area;2,tissuearea;3,largegeometry;4,small geometry

1.3 方法

1.3.1 石蜡包埋 将组织放入具有缺角设计的包埋模具底部后，统一改良包埋模具的绿色端与塑料包埋盒的数字编码端相一致，向改良包埋模具内注入适量蜡液至超过塑料包埋盒的底部，然后移至冷台静置。

1.3.2 石蜡切片制作 以免疫组化染色切片制作流程为例，将制得的组织蜡块的数字编码端向上固定于切片机的机头上进行切片，将具有缺角形状的多张组织切片放入摊片池内，以组织切片的缺角处作为其明显的标识，根据组织切片大小并结合缺角标记，裱片时使组织切片与载玻片上组织区的几何图形相吻合，然后再依次进行免疫组化染色程序的相关操作。

2 结果

应用改良包埋模具制得的蜡块组织均具有统一规格的缺角特点,而且缺角处与塑料包埋盒的数字编码端均具有相对固定的位置关系。对该蜡块进行免疫组化切片时应用改良载玻片进行裱片，得到的染色切片均具有组织切片粘贴方向一致及组织切片在载玻片上的位置相对固定的特点。病理医生对染色切片进行观察时，只需要在显微镜的低倍视野内对第一张染色切片的目标区域进行定位，固定坐标后，其余的染色切片依次更换至该处，病理医生就能发现目标区域，节省了时间和精力，可以对相应切片做出快速判断，极大地提高工作效率。

3 讨论

为了保证病理诊断结果的准确性，病理医生经常需要在显微镜下对染色切片进行重复而又繁琐的观察判断，探寻一种能够简化在显微镜下寻找目标区域的繁琐操作的组织切片制作方法将具有特殊的应用价值与现实意义。常规石蜡切片过程中，传统的切片制作方法及制作要求并没有对组织切片在载玻片上的角度及相对位置提出严格要求，因此同一组织蜡块制得的多张连续切片之间存在不同的角度及位置差异，制片效果在一定程度上降低了病理医生阅片的工作效率。通过对包埋模具和载玻片进行改进，并按照相应的操作规则以达到同一组织蜡块的多张连续切片在载玻片上的粘贴方向相对统一、粘贴位置相对固定的制片特点。改良包埋模具两端不同颜色的设计便于石蜡包埋过程中统一包埋模具的方向，按照实验中石蜡包埋的操作方法，借助底部的缺角设计就能使制得的组织蜡块的缺角处与塑料包埋盒的数字编码端均具有相对固定的位置关系，从而得到规范统一缺角组织蜡块，减少了额外用刀片制作缺角的操作步骤。石蜡切片时将具有缺角形状的组织切片放入摊片池内，应用改良载玻片进行裱片，就能较容易地制得组织切片粘贴方向一致、组织切片在载玻片上的位置相对固定的染色切片[5]，起辅助作用的不规则缺角正方形在染色过程中会被溶解掉，对染色结果没有任何影响，而且上述实验过程中并没有增加技术员的工作量。对任一组织蜡块而言，无论是一次制得多张连续切片，还是以后多次制片，即使在没有该组织蜡块的第一次切片可供参考的情况下，按照上述实验操作方法也能较容易地制作出与第一次的制片效果具有相同的粘贴方向和粘贴位置的切片，而且可以与第一次切片中的组织结构进行定性、定量比较，为准确的病理诊断提供依据。