复硝酚钠对黄河鲤急性毒性研究及安全评价

林 伟， 邵子瀚， 刘巧凌＊

（1.信阳农林学院， 河南信阳 464000； 2.新县水产技术推广站， 河南洛阳 464000）

复硝酚钠作为一种强力细胞赋活剂， 被广泛用于农业生产的粮食作物、经济作物、蔬菜、瓜果、果树、油料作物以及花卉等；由于它具有效率高、残留少、使用浓度范围广、毒性低等优点，复硝酚钠还应用畜牧上，在提高肉、蛋、毛、皮产量和质量的同时，还能增强动物的免疫力，并预防多种疾病。 在水产上复硝酚钠主要用于肥水产品或饲料之中， 可以起到改善水质，降低养殖成本以及预防疾病的作用。 但复硝酚钠对不同的养殖动物毒性大小存在着较大差异，若按同等浓度应用于实际生产，有极大可能会造成养殖动物的死亡。 因此，为了生产中复硝酚钠的规范使用，我们需要研究复硝酚钠对黄河鲤的毒性。

1 试验时间、地点及条件

试验时间为2019年10月， 地点在信阳农林学院水产学院水产动物病害学实验室， 用水为循环曝气48 h的自来水。 水质指标为：温度12～13 ℃，总硬度3.8，碱度1.47 mmol/L ，pH值6.9～7.6。

2 材料

2.1 试验动物

试验用黄河鲤来自荥阳某黄河鲤养殖场， 平均规格为：体长为（16±1.5） cm，体重为（110±20）g。黄河鲤运回后放于循环爆氧池中吊水5 d， 选出210尾相同规格、 身体健壮、 体表无明显损伤的个体进行试验。

2.2 器材

水族箱（36 cm×25 cm×40 cm），由闽江实业集团有限公司生产； 玻璃棒、 吸耳球、 量筒 （50 mL、500 mL）、移液管、容量瓶（1000 mL）、温度计、pH测试仪等， 均由上海生工生物工程有限公司郑州分公司提供。

2.3 试剂

复硝酚钠，购于郑州银海化工有限公司。

3 方法

3.1 步骤

本试验采用静水生物实验法[1]。 试验开始前查阅大量的关于复硝酚钠对动物及水产动物的急性毒性研究文献， 又根据该试验的特点预估出预试验浓度范围。 通过预试结果得出了正式试验的浓度范围，以此为依据，进行黄河鲤的急性毒性试验。 水族箱体积为20 L，水体温度为12～13 ℃，以无复硝酚钠添加组为对照， 根据预试验得出复硝酚钠对黄河鲤最高半致死浓度为39 mg/L，最低半致死浓度为16 mg/L。 据此浓度范围等对数间距设置浓度梯度分别为：16 mg/L，19 mg/L，23 mg/L，27 mg/L，33 mg/L，39 mg/L，共设立21组，其中每个浓度梯度有3个平行对照组以及三个无药添加组为对照组。 每组放入吊水后的黄河鲤10尾，按照静水生物实验法要求进行毒性实验，用药后要注意观察黄河鲤的活动状况， 对死亡的个体要及时捞出， 防止腐烂影响水质，96 h内每间隔24 h记录1次死亡率。

3.2 死鱼的判断标准

鱼中毒死亡的标准是鱼呼吸停止并对外界刺激无反应，即当试验鱼中毒后鳃盖完全停止活动，对外物（如玻璃棒或镊子）刺激30 s内没有产生反应即确定为死亡[2]。

3.3 数据的处理

采用改良寇氏法计算半致死浓度（LC50）[2]。

式中：Xm为最大剂量组剂量的对数值，i为相邻两组剂量对数值之差，P为各组动物的死亡率，∑p为各组动物死亡率之和[2]。

4 结果与分析

4.1 不同时间和浓度的死亡情况

不同浓度复硝酚钠组黄河鲤死亡情况详情见表1。

表1 不同浓度组黄河鲤不同时间死亡数量（n=10）

4.2 不同浓度组在不同时间段的半致死浓度和安全浓度

根据表1的数据，用公式（1）和公式（2）计算各时间段的半致死浓度和安全浓度。 结果见表2。

表2 复硝酚钠对黄河鲤在24 h、48 h、72 h、92 h半致死浓度与安全浓度结果mg·L-1

4.3 急性中毒反应

黄河鲤在不同浓度的复硝酚钠中表现的中毒反应各有不同。 在放入复硝酚钠10 min内黄河鲤显得有些许不安，有四处游窜的现象，高浓度组（39 mg/L）的黄河鲤大概在1h时，鱼体反应剧烈，出现极速蹿游，上浮，停游，继而又沉在水底停止游动的现象，而对照组黄河鲤游动正常。 随着实验不断进行，高浓度的鱼对外界刺激反应非常迟钝， 个别甚至失去知觉进而陆续出现死亡现象， 其他组的鱼死亡率都有显著增加，而高浓度组（39 mg/L）的鱼在24 h时全部死亡。 中毒个体体表粘液分泌较多，有的漂浮在水面，有的平躺在缸底，有的腹部朝上，有的鱼体变硬，大部分都有粘液增加的现象出现。

5 讨论

5.1 复硝酚钠对黄河鲤的毒性强度

结果表明， 复硝酚钠对黄河鲤的安全浓度为3.1 mg/L，复硝酚钠对黄河鲤24 h、48 h、72 h、96 h的半致死浓度都为5.9 mg/L。参照我国危险化学品鱼类急性毒性分级试验标准GB/T21281-2007(96 hLD50≤1 mg/L时为急性毒性Ⅰ级，1 mg/L＜96 hLD50≤10 mg/L为急性毒性Ⅱ级，10 mg/L＜96 hLD50≤100 mg/L）[2]，复硝酚钠在渔业生产中为急性毒性Ⅱ级， 在生产上使用应注意用量。

5.2 复硝酚钠在黄河鲤生产中的使用注意事项

复硝酚钠在水产动物养殖过程中的应用， 主要是添加在改底、肥水产品中作为添加剂使用，该类产品不仅能够促进渔产品细胞产生兴奋反应,增强渔业产品的生理活性，加快细胞的新陈代谢，使产品的肉质鲜嫩，营养成分增加，蛋白质含量提高，能够极大的提高水产品的品质。 该产品的添加能够促进渔产品对营养的吸收和提高自身免疫能力， 还可预防多种疾病[3]。但是在平时的使用过程中如果不能很好的把握用量而超出使用标准，不仅会污染水体，还会对水生生物造成伤害，不利于生产，本研究所得复硝酚钠对黄河鲤的安全浓度为3.1 mg/L，因此，复硝酚钠在合适的浓度下对黄河鲤是安全的， 但是在生产的过程中为了提高经济效益还是要合理用药。