红细胞分析参数辅助诊断珠蛋白生成障碍性贫血亚型的研究*

王镀津,魏莉平

1.鄂东医疗集团市中心医院/湖北理工学院附属医院检验科，湖北黄石 435000；2.肾脏疾病发生与干预湖北省重点实验室，湖北黄石 435000；3.鄂东医疗集团市妇幼保健院检验科，湖北黄石 435000

珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)是由于珠蛋白基因缺陷或者点突变导致血红蛋白的组分和含量发生改变从而导致不同程度溶血性贫血的一组遗传性疾病[1]。地贫是一种常染色体隐性的单基因遗传病。地贫分为α地贫、β地贫、δβ地贫、δ地贫，其中以β地贫和α地贫较为常见[2-3]。地贫根据临床表型可分为轻型、中型、重型3种临床表型。α地贫是由于16号染色体短臂末端α珠蛋白基因缺陷所致，β地贫为位于11p15.5 上的β珠蛋白基因序列发生插入、缺失及突变等所导致。地贫在我国广东[4]、广西[5]及四川地区的发病率高，具有明显地域差异，但是随着经济与社会的发展，人口流动性的增加，不同地区疾病谱也发生重大变化[6]。地贫作为出生缺陷防控的重要组成部分，早发现、早干预手段也应与时俱进。血细胞分析参数与地贫患者或地贫基因携带者有极大的相关性，尤其是红细胞计数(RBC)、红细胞平均体积(MCV)、血红蛋白浓度(HGB)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度(RDW)等都可以为地贫的诊断提供依据。本研究以鄂东医疗集团市中心医院及市妇幼保健院地贫筛查患者为研究对象。详细分析了本地区地贫基因型别及对应的血细胞分析参数对地贫的辅助诊断效果，为本地区地贫出生缺陷防控工作提供了有效的参考数据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取 2019 年1月至 2021 年1月在鄂东医疗集团市中心医院及市妇幼保健院出生的新生儿患者，经过临床医师筛选出高度疑似地贫患者190例,全部进行地贫基因及红细胞相关参数检测。

1.2仪器与试剂 珠海Hema 9600 PCR扩增仪，亚能生物YN-H96型全自动核酸分子杂交仪。深圳亚能地贫基因检测试剂盒。希森美康医用电子(上海)有限公司XN-9000全自动血细胞仪及其配套试剂。

1.3地贫基因及红细胞参数检测

1.3.1红细胞参数分析 使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管抽取患者2 mL外周静脉血，XN-9000全自动血细胞仪分析红细胞各项参数。

1.3.2地贫基因检测 使用EDTA 抗凝管抽取患者2 mL外周静脉血，采用中山大学达安基因股份有限公司Smart-32 型自动核酸提取仪磁珠法提取全部外周血基因组 DNA。按照深圳亚能地贫基因检测试剂盒检测说明书及实验室操作规程检测3种缺失型α地贫(--SEA、-α3.7和-α4.2)、3种非缺失型α地贫(αCSα、αQSα和αWSα)及17种突变型β地贫(41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-Ⅰ-1M、IVS-Ⅰ-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM和CAPM)基因。

2 结 果

2.1地贫基因检测结果 本研究选取临床高度怀疑地贫患者190例，经过地贫检测，检出地贫基因携带者103例，占54.20%，其中携带α地贫基因59例，阳性率为57.30%，携带α地贫基因中--SEA/αα(东南亚型)及-α3.7/αα (右侧α缺失)阳性率较高；携带β地贫基因42例，阳性率为40.80%，其中654M (C→T)、41-42M (-TTCT)阳性率较高。αβ复合地贫基因型1例为4.2杂合缺失并654M杂合突变；α缺失复合α突变1例，为3.7缺失复合CSM突变。所有检测病例中未发现纯合子。见表1。

表1 地贫基因阳性分布情况

2.2各种地贫基因携带者的红细胞参数比较 为保证参考范围及分析结果的一致性，本研究从103例地贫基因携带者中筛选出携带α地贫基因43例，携带β地贫基因25例，无地贫基因携带者22例，分别检测RBC、红细胞比容(HCT)、HGB、MCV、MCH、MCHC、红细胞体积分布宽度-变异系数(RDW-CV)、网织红细胞(RET)。α地贫基因携带者与无地贫基因携带者RBC、MCV、MCH、MCHC比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；β地贫基因携带者与无地贫基因携带者MCV、MCH、MCHC、RDW-CV比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；α地贫基因携带者与β地贫基因携带者RBC、HCT、HGB、MCHC、RDW-CV、RET比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各种地贫基因携带者的红细胞参数比较

项目nMCH(pg)MCHC(g/L)RDW-CV(%)RET(×106/L)α地贫基因携带者4326.45±0.53a325.10±1.52ac15.64±0.25c48.78±3.63cβ地贫基因携带者2527.41±1.02a331.00±2.14a20.15±0.73b67.17±7.26无地贫基因携带者2231.48±0.75338.00±2.1214.85±0.4252.96±6.06

3 讨 论

地贫是出生缺陷防控的重点方向之一，只有充分了解本地区地贫发病率，才能更有针对性地做好预防措施，防止重度地贫患儿出生。地贫发病有明显的地域特征，不同地区的基因突变频率也存在很大差异，随着经济社会的发展，人口大量流动，各地区地贫疾病谱也发生改变。鄂东南地区地处鄂赣皖交界地区，地贫基因谱受周边人口流动影响很大。文献[7-8]报道武汉主要以β地贫基因(69.23%)为主。江西省部分地市的基因型以α地贫基因为主，其中α地贫以αα/--SEA基因型突变为主,β地贫以IVS-Ⅱ-654、CD41-42杂合子基因型突变为主,这跟鄂东南地区的地贫基因型较为接近[9]。

本研究选取了190例经临床医师充分评估后高度疑似地贫患者进行基因检测，确诊103例地贫基因携带者。其中携带α地贫基因基因59例，--SEA/αα(东南亚型)以及-α3.7/αα (右侧α缺失) 阳性率较高。携带β地贫基因42例，其中654M(C→T)、41-42M(-TTCT)阳性率较高。携带αβ复合地贫基因型1例，为4.2杂合缺失并654M杂合突变，α缺失复合α突变1例，为3.7缺失复合CSM突变。

本研究结果显示，α地贫基因携带者、β地贫基因携带者均可以通过MCV、MCH、MCHC与无地贫基因携带者相互区分。α地贫基因携带者及β地贫基因携带者红细胞分析参数之间也存在不同，α地贫基因携带者与β地贫基因携带者RBC、HCT、HGB、MCHC、RDW-CV、RET比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，也就是以上红细胞分析参数可以用来辅助诊断α地贫与β地贫。有研究报道红细胞检测参数对β地贫基因型之间也有鉴别作用[10-12],这说明要足够重视对疑似地贫病例的血常规参数的分析，其对地贫及亚型诊断具有积极作用。本研究显示，RET可以用来鉴别α地贫与β地贫。

地贫防治是一项长期且艰巨的任务，疾病基因谱在不同区域、不同种族之间都处于动态变化，因此，提高地贫的筛查技术具有重要意义。本研究为红细胞检测参数对地贫的诊断提供了新的思路。随着检测手段的不断更新，遗传疾病的检测能力也在不断提高，但是技术的更新离不开临床经验的积累，临床医师要足够重视对传统检验项目的深入分析，这样才能提高检验项目辅助诊断疾病的能力。