953例乳腺癌患者CK5/6、EGFR和AR的表达与临床病理分析

金玉，王艳辉，杨乐欣，任丽

（天津医科大学肿瘤医院检验科，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市“肿瘤防治”重点实验室，天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，天津 300060）

乳腺癌是全球女性高发的恶性肿瘤，2020年全球乳腺癌新发病例226万，取代肺癌成为世界第一大癌[1]。免疫组化指标在乳腺癌的诊断和治疗中起着积极的指导作用。细胞角蛋白5/6（CK5/6）是一种基底细胞角蛋白，特异性表达于上皮细胞胞质，用于判断细胞的类型和分化程度。表皮生长因子受体（EGFR）是细胞增殖和信号转导受体，与肿瘤细胞增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关[2]。雄激素受体（AR）属于核类固醇激素受体家族，起着细胞内转录因子的作用，已成为乳腺癌中潜在的治疗靶点，但目前对于AR的研究不充分[3]。本次研究旨在回顾性分析953例乳腺癌CK5/6、EGFR、AR的表达与临床病理分析的关系，为临床治疗提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象本研究回顾性分析了2020年5月23日—2020年12月31日于天津医科大学肿瘤医院确诊为乳腺癌的953例患者的临床资料。纳入标准：（1）符合《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范》[4]中乳腺癌诊断标准，经病理检查确诊。（2）女性，单侧初次病变。（3）术前未进行化疗、放疗及内分泌治疗。（4）临床资料及病理资料完整无缺失。排除标准：（1）高血压、心脏病、糖尿病、青光眼等基础疾病患者。（2）双乳肿物、双乳癌或此前有乳腺肿物切除的患者。（3）其他肿瘤患者。（4）智力障碍或其他严重精神疾病患者。（5）肝脏、肾脏或其他妇科疾病患者。

1.2 病理结果判定标准（1）ER/PR状态的判定标准：肿瘤细胞核着色程度≥1%为阳性（+），＜1%或无着色为阴性（-）[5]。（2）人类表皮生长因子受体2（Her-2）状态的判定标准：免疫组织化学染色IHC（1+）或IHC（0）判定Her-2阴性；IHC（3+）判定Her-2阳性；IHC（2+）进一步通过FISH方法进行Her-2基因状态检测，分别纳入阴性组和阳性组[6]。（3）Ki67状态的判定标准：依据2011年St.Gallen国际乳腺会议确定标准[7]，Ki67的表达水平以阳性细胞的百分数来计算，阳性细胞数＜14%为低表达，≥14%为高表达。（4）CK5/6状态的判定标准：CK5/6阳性为在肿瘤细胞质上出现黄色或棕黄色颗粒，标本中随机选取5个高倍镜（400×）视野，阳性细胞百分比≥5%表示抗体呈阳性反应（+），＜5%表示抗体呈阴性反应（-）[8]。（5）P53、EGFR和AR的判定标准：P53和AR定位于细胞核，EGFR定位于细胞膜。免疫组织化学结果判定依据DAKO HerceptTest评分系统，按照阳性细胞占观察细胞比例半定量分级：阳性反应≤10%为阴性（-），＞10%为阳性（+）[9]。

1.3 分子分型标准依据美国癌症联合委员会（AJCC）第8版乳腺癌TNM分期图谱[10]进行，即（1）Luminal A：ER（+）和（或）PR（+），Her-2（－），Ki67＜14%。（2）Luminal B：①Her-2阴性，ER（+）和（或）PR（+），Her-2（－），Ki67≥14%。②Her-2阳性，ER（+）和（或）PR（+），Her-2（+），Ki67任意。（3）Her-2过表达：ER（－），PR（－），Her-2（+）。（4）三阴乳腺癌（TNBC）：ER（－），PR（－），Her-2（－）。三阴性乳腺癌可进一步依据CK5/6（+）和（或）PR（+）分为基底细胞样型TNBC（BL-TNBC），依据CK5/6（－）和PR（－）分为非基底细胞样型TNBC（non-BL-TNBC）。

1.4 统计学处理采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，计数资料用[n（%）]表示；比较采用χ2检验，n＜5，则用Fisher’s检验；相关性分析采用Spearman等级相关分析；CK5/6、EGFR和AR的独立危险因素用Logistic回归分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者临床特征患者年龄23～77岁，平均年龄（49.55±10.11）岁，发病年龄主要集中于42～56岁，其中≤50岁535例（56.1%），＞50岁418例（43.9%）。初发左乳癌476例（49.9%），右乳癌477例（50.1%）。绝经414例（43.4%），未绝经539例（56.6%）。转移292例（30.6%），未转移661例（69.4%）。对乳腺癌分子分型进行分类，其中Luminal A型占7.5%（71/953），Luminal B（Her-2阴性）占56.1%（535/953），Luminal B（Her-2阳性）占14.3%（136/953），Her-2过表达型占10.5%（100/953），三阴乳腺癌占11.6%（111/953）。病理分型中浸润性导管癌占71.1%（678/953），其他病理分型占28.9%（275/953）。

2.2 免疫组化各指标的表达及其相关性ER、PR、ki67和AR阳性率高，分别为76.3%、64.2%、91.6%和80.5%。Her-2、P53、CK5/6和EGFR阳性率低，分别为25.9%、38.3%、12.0%和19.6%。进一步探究CK5/6、EGFR和AR的相关性发现，CK5/6和EGFR的表达呈正相关（r=0.52，P＜0.001）；CK5/6和AR的表达呈负相关（r=-0.488，P＜0.001）；EGFR和AR的表达呈负相关（r=-0.310，P＜0.001）。

组织分级个案缺失100例，临床分期个案缺失165例，TNM个案缺失165例，其余病例信息均完整。研究发现，CK5/6的表达在不同的分子分型和组织分级中有统计学意义（P＜0.05），而与年龄、乳腺癌初发位置、是否绝经和病理分型差异无关。EGFR的表达除与年龄和乳腺癌初发位置无关外，其余均具有统计学意义（均P＜0.05）。AR的表达在不同的分子分型和组织分级中有统计学意义（P＜0.05），与其他因素无关（表1）。

表1 CK5/6、EGFR和AR的表达与临床病理特征的关系[n（%）]Tab 1 Relationship between the expression of CK5/6，EGFR，AR and clinicopathological characteristics[n（%）]

CK5/6、EGFR和AR的表达与临床分期和TNM分期的关系表明，CK5/6、EGFR和AR的表达在不同的临床分期中有差异（P＜0.05）。CK5/6和EGFR的表达与肿瘤是否发生远处转移有关（P＜0.05），与肿瘤大小和淋巴结无关。AR的表达与淋巴结数量有关（P＜0.05），而与肿瘤大小和是否发生远处转移无关（表2）。CK5/6、EGFR和AR的表达与各免疫组化的关系表明，CK5/6与ER、PR、Ki67和AR呈负相关，与P53呈正相关；EGFR与ER、PR、Ki67和AR呈负相关，与Her-2和P53呈正相关；而AR与ER和PR呈正相关，与Her-2和P53呈负相关。CK5/6和EGFR的表达呈正相关，CK5/6和AR的表达呈负相关，EGFR和AR的表达呈负相关（表3）。

表2 CK5/6、EGFR和AR的表达与临床分期和TNM分期的关系[n（%）]Tab 2 Relationship between the expression of CK5/6，EGFR，AR and clinical stage，TNM stage[n（%）]

表3 CK5/6、EGFR和AR的表达与免疫组化指标的关系[n（%）]Tab 3 Relationship between the expression of CK5/6，EGFR，AR and immunohistochemical indexes[n（%）]

2.4 CK5/6、EGFR和AR表达的多因素回归分析分子分型中Luminal B型、高组织学分级和EGFR的阳性表达是影响CK5/6表达的独立危险因素（P＜0.001）；Luminal B型和P53、CK5/6的阳性表达是影响EGFR表达的独立危险因素（P＜0.001）；ER、PR、Her-2和Ki67的阳性表达是影响AR表达的独立危险因素（P＜0.001），见表4～6。

表4 CK5/6表达与临床病理因素的Logistic回归分析Tab 4 Logistic regression analysis of CK5/6 expression and clinicopathological factors

表5 EGFR表达与临床病理因素的Logistic回归分析Tab 5 Logistic regression analysis of EGFR expression and clinicopathological factors

表6 AR表达与临床病理因素的Logistic回归分析Tab 6 Logistic regression analysis of AR expression and clinicopathological factors

3 讨论

乳腺癌作为女性发病率最高的恶性肿瘤，异质性大，死亡率高，治疗主要以手术切除和放化疗为主。在乳腺癌的诊断和治疗中，免疫组化的各项分子指标发挥着重要作用。因此，进一步对分子指标进行深入研究对于乳腺癌的靶向治疗和联合治疗具有指导意义。

CK5/6作为上皮细胞的增殖分化密切相关的分子指标，具有极高的保守性和组织分化特异性。本研究发现CK5/6的表达与分子分型、组织分级、临床分期的差异以及是否发生远处转移有关，与年龄、乳腺癌初发位置、是否绝经、病理分型差异、肿瘤大小和是否发生淋巴结转移无关。Logistic回归分析表明，在消除ER、PR、Her-2和AR等分子指标的影响后，分子分型中Luminal B型、高组织学分级和EGFR的阳性表达是影响CK5/6表达的独立危险因素。与陶玉梅等[11]的报道基本一致。本研究中EGFR阳性率低，EGFR的表达与是否绝经、转移及病理分型密切相关，而与累及淋巴结数量无关。研究显示，EGFR的表达及表达强度与累及淋巴结的数目具有极高的关联性[12]。Luminal B型和P53、CK5/6的阳性表达是影响EGFR表达的独立危险因素。CK5/6阳性可使EGFR的阳性表达增加3倍。AR与ER、PR具有相同的结构，可作为乳腺癌中潜在的治疗靶点，但目前对于AR的认识远不如ER、PR充分[3]。本研究中AR在乳腺癌中呈高表达，阳性率高达80.5%（810/953），与陈海霞等[13]研究一致，表明AR在乳腺癌中起重要作用。本研究中，AR的表达与分子分型、组织学分级、临床分期和累及淋巴结数量有关，ER、PR、Her-2和Ki67的阳性表达是影响AR表达的独立危险因素。AR表达水平与预后的关系尚存在争议[14-15]。

分子指标间的相关性已在多项研究中被研究。TNBC可针对CK5/6和EGFR的阳性表达进一步分为基底细胞癌和非基底细胞癌。已有研究发现CK5/6和EGFR共表达[11]。任新瑜等[16]发现两者联合检测的敏感性和特异性达98.7%和100%。有研究认为CK5/6可以替代EGFR，作为TNBC的独立预后因素[8]。研究表明，低AR表达与高临床分期和低核分级相关，而CK5/6的高表达预后差，CK5/6、AR和P53联合可作为TNBC患者辅助化疗的潜在预后标志物[17]。有研究发现，AR表达与EGFR表达存在相关性，在AR阳性的TNBC中观察到磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）激活增加，表明AR可能是通过EGFR和PI3K/Akt信号通路在TNBC癌变中起作用[18]。

总之，乳腺癌中分子标志物已引起广泛关注，但目前对这些分子标志物的了解还不够充分。分子标志物之间存在的相关性提示应进一步探究分子标志物相互关联的内在机制；临床可以选择更为经济有效的检查方式，减轻患者经济负担或多种分子标志物共同检测，提高乳腺癌诊断的准确性，精准治疗，为肿瘤治疗提供新的思路和方法。